高效毛細(xì)管電泳法對四種抗生素的測定

高效毛細(xì)管電泳法對四種抗生素的測定

高性能毛細(xì)管電脈法（hplc）廣泛用于中醫(yī)成分分析、手性藥物分離、藥物濃度測定、臨床診斷和生物化學(xué)領(lǐng)域。然而，由于缺乏定性和定量差，采用毛細(xì)管電泳法（ce）并不適用。隨著應(yīng)用和機(jī)器技術(shù)的發(fā)展，ce的線性準(zhǔn)確性和準(zhǔn)確性接近hplc。2000年的藥店將ce法寫為一個(gè)附件。對于大環(huán)內(nèi)酯類抗生素（如鹽酸大觀素、硫酸內(nèi)莫林星、血紅蛋白、酪氨酸等），由于其自身的官方能夠團(tuán)簇中沒有紫外吸收，因此很難分析化學(xué)容量。采用微生物價(jià)格法測定含量[1.4]。價(jià)格法操作復(fù)雜，影響因素多，實(shí)驗(yàn)周期長，相關(guān)物質(zhì)和其他成分不選擇性，不能真正反映藥物的含量。對于這些藥物的新的分析和評價(jià)方法非常重要。作者選擇了四種抗生藥物進(jìn)行分析，考察了電泳的抗性、定形成理和改進(jìn)方法，并探索了藥物分析的新形式。1實(shí)驗(yàn)1.1毛細(xì)管沖洗方法Biofocus3000型毛細(xì)管電泳儀(美國Biorad公司),可變波長紫外檢測器,檢測口位于負(fù)極端,配有工作站和486微機(jī).毛細(xì)管柱為50μm(i.d.)×54.6cm(有效長度為50cm),河北永年光導(dǎo)纖維廠.毛細(xì)管沖洗方法:每次開機(jī)后用0.1mol/LNaOH溶液沖洗10min,蒸餾水沖洗5min,最后用運(yùn)行緩沖液沖洗平衡10min.兩次測定間用運(yùn)行緩沖液沖洗毛細(xì)管3min.硼酸鈉、鹽酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氫氧化鈉、磷酸均為分析純.阿奇霉素對照品(97.6%)由太平洋藥業(yè)提供.阿奇霉素樣品為國產(chǎn)市售品;紅霉素對照品(88.5%)由中國藥品生物檢定所提供;紅霉素樣品為國產(chǎn)市售品;鹽酸大觀霉素對照品由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物研究所提供;鹽酸大觀霉素樣品為市售品;硫酸奈替米星對照品由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物研究所提供;硫酸奈替米星樣品為市售品.1.2樣品的加標(biāo)試驗(yàn)(1)阿奇霉素的操作條件:運(yùn)行緩沖液為40mmol/L磷酸二氫鈉溶液,以磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8,并以0.45μm的微孔濾膜過濾.操作電壓為18kV;柱溫20℃;以709kPa壓力進(jìn)樣,每次進(jìn)樣7000Pa×10s;檢測波長190nm.(2)紅霉素的操作條件:運(yùn)行緩沖液為30mmol/L磷酸氫二鈉溶液,調(diào)節(jié)pH至4.8,并以0.45μm的微孔濾膜過濾.操作電壓為18kV;柱溫20℃;以709kPa壓力進(jìn)樣,每次進(jìn)樣7000Pa×10s;檢測波長190nm.(3)鹽酸大觀霉素的操作條件:運(yùn)行緩沖液為10mmol/L硼砂溶液(pH=9.3),并且以0.45μm的微孔濾膜過濾.操作電壓為18kV;柱溫25℃;以709kPa壓力進(jìn)樣,每次進(jìn)樣7000Pa×10s;檢測波長192nm.(4)硫酸奈替米星操作條件:運(yùn)行緩沖液為10mmol/L磷酸氫二鈉溶液(pH=4.4),該溶液和樣品溶劑經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后使用.操作電壓18kV;毛細(xì)管溫度25℃;以709kPa壓力進(jìn)樣,每次進(jìn)樣7000Pa×10s;檢測波長192nm.(5)操作條件的選擇:對4種抗生素分別以不同濃度的Tris、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硼砂在不同的pH下試驗(yàn),通過考察遷移時(shí)間、峰型、峰面積的重現(xiàn)性等確定最佳操作條件.1.3方法回收率的測定采用加樣回收率法;樣品的定量采用外標(biāo)法.2結(jié)果與討論2.1麻黃的回歸方程實(shí)驗(yàn)得到阿奇霉素的回歸方程為:Y=3508X-38,V=0.9993,n=5;紅霉素的回歸方程為:Y=4027.0X+30.0,V=0.9999,n=5;鹽酸大觀霉素的回歸方程為:Y=8548.0X-239.5,V=0.9994,n=3.硫酸奈替米星的回歸方程為:Y=5176.9X+37.6,V=0.9998.2.2加樣回收率阿奇霉素(A)的平均加樣回收率為98.9%(n=5),5次試驗(yàn)結(jié)果的TRSDA=1.3%.紅霉素(B)的平均加樣回收率為100.8%(n=5),5次試驗(yàn)結(jié)果的TRSDB=1.4%.鹽酸大觀霉素(C)的平均加樣回收率為101.0%(n=5),5次試驗(yàn)結(jié)果的TRSDC=1.5%.硫酸奈替米星(D)的平均加樣回收率為99.2%(n=5),5次試驗(yàn)結(jié)果的TRSDD=0.8%.2.3樣品測定結(jié)果分別以HPCE外標(biāo)法和效價(jià)法對3批樣品含量進(jìn)行測定,結(jié)果見表1～表4.2.4測定結(jié)果的比較由表可知,本法和效價(jià)法測定結(jié)果相差較大,其原因是效價(jià)法的操作過程復(fù)雜,影響因素多(如實(shí)驗(yàn)用菌、緩沖液的pH值和濃度以及培養(yǎng)溫度等),其中任何一個(gè)環(huán)節(jié)都可能造成誤差;效價(jià)法沒有分離能力,選擇性差,結(jié)果可能比實(shí)際含量高.而HPCE法的結(jié)果為同一測定條件下由對照品和樣品的峰面積比較而得出的,在保證重復(fù)性的前提下,測定結(jié)果更加可靠.這4種抗生素的紫外最大吸收波長都在190nm附近,屬于末端吸收區(qū),由于有機(jī)試劑強(qiáng)烈的末端吸收,無法用HPLC方法進(jìn)行紫外檢測.而HPCE的分離過程中不使用有機(jī)溶劑,從而排除了試劑干擾.在所用的實(shí)驗(yàn)條件下,線性關(guān)系和回收率均獲得了很好的結(jié)果,出峰時(shí)間短,3批