不同電針對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠額葉和海馬5-h、da和ne表達的影響

不同電針對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠額葉和海馬5-h、da和ne表達的影響

抑郁主要表現(xiàn)為抑郁、思維抑郁和意志活動障礙。它的高發(fā)病率和高發(fā)病率給社會和家庭帶來了沉重的負(fù)擔(dān)和損害。目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為抑郁癥是由于大腦神經(jīng)遞質(zhì)在神經(jīng)突觸間的濃度相對或絕對不足,使得患者的精神活動和心理狀況處于較低水平。研究表明［1］,能夠增加中樞單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量的藥物可以減輕抑郁癥狀,而減少單胺遞質(zhì)濃度及影響其轉(zhuǎn)運藥物可以引起抑郁癥狀。針刺作為世界上獨具一幟的傳統(tǒng)療法,對患病機體具有良性、整體調(diào)節(jié)作用。大量臨床調(diào)研顯示［2］,針刺療法在顯著改善抑郁癥患者的急躁焦慮、失眠、飲食欠佳等方面具有獨特優(yōu)勢,其臨床治療效果正在獲得廣泛關(guān)注和不斷認(rèn)同。普通脈沖電針容易形成單一頻率而使機體耐受,而音樂電針克服了這一缺點,它能夠隨著音樂節(jié)律的此起彼伏產(chǎn)生不同的頻率和波形,又能發(fā)揮音樂療法本身的作用,讓患者聆聽音樂。與普通的針刺療法相比,音樂電針療法既能刺激穴位以調(diào)節(jié)氣血、疏通經(jīng)絡(luò),又能充分發(fā)揮音樂本身的治療作用。在以往的研究基礎(chǔ)上,本實驗進一步對比慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為學(xué)和額葉、海馬的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)影響的差異,分析不同電針在不同腦區(qū)其抗抑郁機制之間的差異,為臨床提供一定的科學(xué)實驗依據(jù)。1材料表面1.1動物房,適應(yīng)性飼養(yǎng)健康SD雄性大鼠[北京維通利華動物實驗中心提供,動物許可證:SCXK(京)2006-0009],清潔級,體重180~220g,北京中醫(yī)藥大學(xué)提供清潔級動物房,適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,恒溫(24±1%)℃、濕度(40±5)%,共50只。按照隨機數(shù)字表將實驗動物隨機分成正常對照組、模型組、百憂解組、脈沖電針組和音樂電針組,每組10只,共5組。1.2免疫藥盒和熱計劃藥5-HT放射免疫分析藥盒、DA放射免疫分析藥盒和NE放射免疫分析藥盒(北京華英生物技術(shù)研究所提供);蔗糖(北京國華化學(xué)試劑廠);藥物:百憂解膠囊(美國禮來公司生產(chǎn))。1.3醫(yī)用x射線針針針的生產(chǎn)開野箱:長80cm、寬80cm和高40cm自制黑色實驗箱,將其分成25個方格;針具:0.30mm×13mm規(guī)格的華佗牌無菌針灸針;γ-911全自動放免計數(shù)儀(中國科技大學(xué)實業(yè)總公司生產(chǎn));LH202型韓氏電針儀(北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司生產(chǎn));音樂電針儀:ZJ-12H音樂電針治療儀(哈爾濱致厚醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))。2方法2.1性應(yīng)激模型正常對照組:動物不接受任何刺激和治療,自由飲食,群養(yǎng)。其余4組均采用改良的慢性應(yīng)激模型結(jié)合孤養(yǎng)［3］,造模動物全部孤養(yǎng),包括斷水24h、斷食24h、冷水游泳(10℃、5min)、夾尾3min、環(huán)境潮濕24h、水平震蕩(1次/s,30min)、晝夜顛倒24h,每天隨機安排1種刺激,共21天。2.2慢性應(yīng)激模型制備正常對照組:動物群養(yǎng),自由飲水?dāng)z食,不接受任何刺激;模型組:動物孤養(yǎng),接受21天慢性應(yīng)激造模處理;百憂解組:在應(yīng)激前1h進行藥物干預(yù),其它操作同模型組;脈沖電針組:在應(yīng)激前1h進行脈沖電針干預(yù),其它操作同模型組;音樂電針組:在應(yīng)激前1h進行音樂電針干預(yù),其它操作同模型組。5組同時進行,1次/天,共21天。2.3模型試驗的方法選穴:參照“實驗動物針灸穴位圖譜”選取“印堂”和“百會”二穴。脈沖電針組:用30號1寸毫針平刺進針,連接LH202型電針儀,百會針尖向上,印堂針尖向下,頻率為2/100Hz,電流強度為1mA,每次20min,每天1次,共21天。音樂電針組:每天給予慢性應(yīng)激刺激結(jié)合孤養(yǎng),選穴及針刺方法同上,針柄接ZJ-12H音樂電針治療儀,音樂選取“抗抑郁處方”,電壓為2V,電流強度為1mA,強度以使頭部輕微顫抖、動物不嘶叫為宜,每次20min,每天1次。2.4百友解給藥方法應(yīng)激刺激前1h灌胃給藥,百憂解以生理鹽水配成2mg/ml,按10ml/kg給藥,每天1次。2.5蔗糖水的消耗量測定在實驗前1天和第21天進行的體重檢測,然后計算并比較各組大鼠的體重。在隔音保持安靜狀態(tài)下,將大鼠放置于開野實驗箱的中心方格內(nèi),觀察大鼠5min內(nèi)穿越格數(shù)(四爪均進入的方格)記為水平活動計分,后肢直立次數(shù)(兩前爪騰空或攀附墻壁)記為垂直活動計分。各組大鼠禁水24h后給予1%蔗糖水,測定1天內(nèi)蔗糖水的消耗量。在本實驗應(yīng)激處理前1天和第21天分別進行1次。2.6額葉和海馬組織的分離實驗第22天,迅速斷頭后,在超凈臺冰塊上分離出額葉和海馬組織,置于滅菌的corning凍存管并液氮中保存。按試劑盒說明,采用放射免疫分析法進行指標(biāo)檢測。2.7統(tǒng)計學(xué)處理實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ue0af±s)表示,采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。兩組之間用t檢驗,組間差異采用單因素方差分析,以P<0.05為有顯著性差異,P<0.01為有極顯著性差異。3結(jié)果3.1造模成功率驗證與正常對照組相比,模型組大鼠的水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)顯著降低(P<0.01),表明該實驗造模成功;與模型組相比,百憂解組、音樂電針組和脈沖電針組大鼠的行為學(xué)活動度明顯增加,均有顯著性差異(P<0.05),結(jié)果見表1。3.2模型大鼠體重的變化實驗應(yīng)激處理前,各組大鼠之間體重?zé)o顯著性差異(P>0.05);在實驗處理后的21天,與正常對照組,模型組的大鼠體重下降,差異有顯著性意義(P<0.01);與模型組比較,百憂解組、音樂電針組和脈沖電針組的大鼠體重均有增加(P<0.05),見表2。3.3應(yīng)激處理對兩組織物中織物紅外光譜的影響應(yīng)激處理前,各組之間大鼠的蔗糖水消耗量無顯著性差異(P>0.05)。應(yīng)激處理21天后,與正常對照組相比,模型組的糖水消耗量降低,有極顯著性差異(P<0.01);與模型組相比,百憂解組、音樂電針組的糖水消耗量升高,均有顯著差異(P<0.05),結(jié)果見表3。3.4模型大鼠額葉組織的活性成分變化與正常對照組相比,模型組大鼠額葉組織5-HT、DA、NE的含量降低,有極顯著性差異(P<0.01)。與模型組相比,百憂解組和脈沖電針組大鼠額葉組織的5-HT、NE、DA的含量增加有顯著性差異(P<0.05);音樂電針組大鼠額葉組織的5-HT、NE、DA的含量增加,有顯著性差異(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。與脈沖電針組相比,音樂電針組額葉組織的5-HT含量增加,有顯著性差異(P<0.05)。見表4。3.5百憂解、脈沖電針大鼠海馬組織的5-ht、ne、da的含量與正常對照組相比,模型組大鼠海馬組織5-HT、DA、NE的含量降低,有極顯著性差異(P<0.01)。與模型組相比,百憂解組、脈沖電針組大鼠海馬組織的5-HT、NE、DA的含量增加,有顯著性差異(P<0.05);音樂電針組大鼠海馬組織的5-HT、NE、DA的含量增加,有顯著性差異(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。與脈沖電針組比較,音樂電針組大鼠海馬組織的5-HT的含量增加,有顯著性差異(P<0.05)。見表5。4應(yīng)激抑郁癥模型大鼠腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)的活性變化大量的研究結(jié)果表明,抑郁癥患者存在與情感加工的神經(jīng)解剖環(huán)路的異常,額葉皮質(zhì)、杏仁核、海馬和下丘腦等4個關(guān)鍵大腦結(jié)構(gòu)的功能與大腦的情感活動有著密切關(guān)系［4］,額葉及邊緣系統(tǒng)是大腦重要的解剖位置和神經(jīng)中樞,與人類的思維、情緒、意識等行為密切相關(guān),能協(xié)調(diào)完成各種高級神經(jīng)精神活動。研究表明［5］抑郁癥等情感障礙性疾病存在額葉及邊緣系統(tǒng)的代謝異常。人類的情感表達、注意力、記憶和抽象能力都與額葉的功能密切相關(guān);而人類的情緒波動、思維和認(rèn)知能力也與海馬有著密不可分的關(guān)系。動物實驗表明［6］:動物在慢性應(yīng)激狀態(tài)下,其海馬體積減小、萎縮。臨床研究表示抑郁癥病人大腦海馬萎縮,體積減小,縮小程度與情緒記憶障礙成正相關(guān)。抑郁癥主要是中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如5-HT、NE和DA含量下降或功能不足所致。ZhangX等［7］研究發(fā)現(xiàn),因抑郁癥死亡的病理尸檢顯示腦組織內(nèi)(腦干和額葉)5-HT含量降低和海馬5-HTR總量減少,抑郁癥神經(jīng)遞質(zhì)的異常主要表現(xiàn)為腦內(nèi)的5-HT合成減少。電針對中樞及外周紊亂的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)具有良性調(diào)節(jié)作用,朱藝等［8］觀察到應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬5-HT和乙酰膽堿酯酶(AChE)活性降低,電針“百會”和“三陰交”穴可明顯提高模型大鼠海馬中5-HT、AChE的表達。因此,本研究選取5-HT、DA和NE作為檢測指標(biāo),進一步探討和對比在慢性抑郁模型大鼠的不同腦區(qū)下,音樂電針和普通的脈沖電針治療抑郁癥的機制和療效差異。傳統(tǒng)普通的脈沖電針儀發(fā)出周期性重復(fù)的波形,在治療后期病人易出現(xiàn)耐受現(xiàn)象。中醫(yī)音樂療法是運用角、徵、宮、商、羽五種旋律的音樂,與五行、五臟的相對應(yīng)關(guān)系,根據(jù)五行的生克制化規(guī)律來確定治則,并指導(dǎo)臨床選曲的一種療法。音樂電針儀主要是針對脈沖電針儀的周期性重復(fù)波形出現(xiàn)了后期療效衰減和電針局部組織跳動的缺點導(dǎo)而提出的;它不僅能把音樂的節(jié)律轉(zhuǎn)化為變化的頻率和波形,從而達到對穴位的一種良性刺激,而且又能與音樂療法有機的結(jié)合起來,使得患者不容易對其產(chǎn)生耐受,最終達到較好的治療效果。本實驗研究顯示音樂電針治療慢性抑郁模型大鼠的療效優(yōu)于普通的脈沖電針組,音樂電針組慢性抑郁模型SD大鼠不同腦區(qū)的5-羥色胺的含量明顯增加,兩組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。分析其原因可能是因為百憂解是一種選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑,音樂電針干預(yù)后可能能夠促進5-羥色胺在神經(jīng)細(xì)胞突觸間隙的濃度增加,抑制5-