丙泊酚、咪達(dá)唑侖對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后處理保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

丙泊酚、咪達(dá)唑侖對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后處理保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究目的:麻醉醫(yī)生在圍手術(shù)期擔(dān)負(fù)著維護(hù)患者生命安全的重要職責(zé),圍手術(shù)期腦血管意外一直備受關(guān)注,因此如何采取有效措施減輕腦缺血再灌注損傷也是麻醉醫(yī)生關(guān)注的焦點(diǎn)之一。隨著研究的深入,一些實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)麻醉藥物對(duì)腦缺血再灌注損傷具有預(yù)處理或后處理保護(hù)作用。作為臨床常用的靜脈麻醉藥物丙泊酚和咪達(dá)唑侖,文獻(xiàn)檢索尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)這兩種藥物用于腦缺血后處理的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型的基礎(chǔ)上,通過丙泊酚、咪達(dá)唑侖在缺血后再灌注早期靜脈給藥,探討其合理的劑量和作用機(jī)制,并揭示磷脂酰肌醇-3-激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)在靜脈麻醉藥“缺血后處理”中的作用,為術(shù)前已存在腦缺血患者麻醉中的合理用藥提供理論依據(jù)和策略。方法:健康雄性SD大鼠144只,體重270～320g。隨機(jī)分為8組（n=18）:假手術(shù)組（S組）;局灶性腦缺血再灌注組（I/R組）、丙泊酚給藥組（P₁、P₂、P₃組）、咪達(dá)唑侖給藥組（M₁、M₂、M₃組）采用大腦中動(dòng)脈線栓法阻斷大腦中動(dòng)脈2h,開放22h,建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型,分別于再灌注前3min至再灌注5min時(shí)由股靜脈勻速泵注生理鹽水2.5ml、丙泊酚1、2、5mg/kg、咪達(dá)唑侖0.05、0.1、0.3mg/kg（異丙酚、咪達(dá)唑侖采用生理鹽水稀釋至2.5ml）。于再灌注22h時(shí)行神經(jīng)功能缺陷評(píng)分;評(píng)分后TTC染色進(jìn)行腦梗死體積測(cè)定（n=6）;采用免疫組化測(cè)定缺血側(cè)腦組織caspase-3和NF-κB的表達(dá)以及TUNEL測(cè)定細(xì)胞凋亡率（n=6）;應(yīng)用western-blotting測(cè)定Akt磷酸化水平（n=6）。結(jié)果:與S組相比,I/R組大鼠神經(jīng)功能缺陷評(píng)分增高,腦梗死體積增加,缺血側(cè)大腦皮層NF-κB明顯從細(xì)胞漿移位于細(xì)胞核內(nèi),NF-κB、caspase-3表達(dá)增加,細(xì)胞凋亡率升高,Akt磷酸化水平降低;組織形態(tài)學(xué)觀察可見缺血側(cè)中心區(qū)出現(xiàn)細(xì)胞壞死,缺血半暗帶區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少,體積縮小,細(xì)胞核固縮,染色質(zhì)濃縮、邊聚,海馬組織結(jié)構(gòu)異常,椎體細(xì)胞數(shù)目減少,細(xì)胞皺縮變形（均P<0.05）;與I/R組相比,P₁、P₂組和M₂、M₃組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分降低,腦梗死體積縮小,缺血側(cè)大腦皮層NF-κB從細(xì)胞漿向細(xì)胞核移位被抑制,NF-κB、caspase-3表達(dá)減少,細(xì)胞凋亡率降低,Akt磷酸化水平明顯升高,缺血側(cè)大腦組織形態(tài)學(xué)損傷減輕（均P<0.05）;P₃組和M₁組評(píng)分與I/R組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;P₂組或M₃組分別與P₁組或M₂組相比,腦梗死體積縮小,缺血側(cè)大腦皮層NF-κB從細(xì)胞漿向細(xì)胞核移位被抑制,NF-κB、caspase-3表達(dá)減少,細(xì)胞凋亡率降低,Akt磷酸化水平明顯升高,缺血側(cè)大腦組織形態(tài)學(xué)損傷減輕（均P<0.05）。結(jié)論:大鼠腦缺血2h,于再灌注前3min至再灌注5min時(shí)經(jīng)股靜脈勻速泵注1、2mg/kg丙泊酚或0.1、0.3mg/kg咪達(dá)唑侖具有腦保護(hù)作用,其最適劑量為丙泊酚2mg/kg或咪達(dá)唑侖0.3mg/kg。丙泊酚、咪達(dá)唑侖可能通過下調(diào)caspase-3和NF-κB的表達(dá),促進(jìn)Akt磷酸化,抑制凋亡發(fā)生,發(fā)揮缺血后處理的腦保護(hù)作用。創(chuàng)新點(diǎn):1.研究丙泊酚、咪達(dá)唑侖這兩種常用