多指標分析方法在活血化瘀中藥復(fù)方制劑質(zhì)控方面的應(yīng)用研究

多指標分析方法在活血化瘀中藥復(fù)方制劑質(zhì)控方面的應(yīng)用研究活血化瘀是中醫(yī)的一個重要理論和治療原則，《內(nèi)經(jīng)》記載的“疏其氣血、令其調(diào)達”，已成為后世活血化瘀治療原則的基礎(chǔ)。隨著對活血化瘀中藥的深入研究，發(fā)現(xiàn)其具有改善血流動力學(xué)異常、改善血液流變學(xué)異常、改善微循環(huán)障礙、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化及心肌缺血、抑制組織異常增生等藥理作用，被廣泛應(yīng)用于臨床各科，涉及心腦血管疾病、糖尿病、肝硬化、腫瘤等數(shù)十種疾病，臨床療效顯著，展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。正是由于中藥制劑在臨床上的廣泛應(yīng)用，中藥制劑難免良莠不齊，為了保證中藥復(fù)方制劑的安全性與有效性，對其質(zhì)量控制的方法與手段成為中藥現(xiàn)代化的最重要研究課題之一。現(xiàn)行的中藥質(zhì)量控制模式是借鑒國外化學(xué)藥品質(zhì)量控制模式建立的，化學(xué)藥品具有明確的分子結(jié)構(gòu)，清晰的構(gòu)效關(guān)系，因此鑒別、檢查、含量測定都可以直接作為質(zhì)量評價的指標，但是對于在中醫(yī)理論指導(dǎo)下的中藥，尤其是復(fù)方制劑，檢測其中任何一種成分均不能體現(xiàn)其整體質(zhì)量。因此，需要重新審視和明確中藥質(zhì)量控制和評價的目標、策略、模式與方法，建立一套既能保證穩(wěn)定可控，又能直接體現(xiàn)安全有效的新型中藥質(zhì)量控制管理方法體系?！吨袊幍洹?010年版收載的中藥部分對其質(zhì)控含量測定的成分，一種是活性有效成分，一種是指標成分，即既可能是活性成分，也可能是非活性成分，上世紀七十年代以來，高效液相色譜法（HPLC）以其在含量測定方面的獨特優(yōu)勢：分離效能高、分析速度快、重現(xiàn)性好、流動相選擇性廣、色譜柱可反復(fù)使用等，被大量地應(yīng)用于有效成分及指標成分的質(zhì)量控制，在中藥制劑質(zhì)量控制中占有非常重要的地位。隨著HPLC方法的普及應(yīng)用，2010年版《中國藥典》所載中藥部分的含量測定方法已達到709種采用的是高效液相色譜法。為了使活血化瘀中藥復(fù)方制劑得到安全、廣泛的應(yīng)用，對其指標成分的質(zhì)量控制就成為我們研究的主要對象。藥品質(zhì)量的可控性是藥品的基本屬性，是藥品的安全性和有效性的基礎(chǔ)。質(zhì)量標準是控制藥品質(zhì)量的重要手段，能有效的控制藥品的質(zhì)量，確保用藥的安全，是質(zhì)量可控性的具體體現(xiàn)。本課題選用唐山工人醫(yī)院內(nèi)常用活血化瘀中藥：參芍口服液（醫(yī)院制劑）、芪龍膠囊、益心舒膠囊、消栓通絡(luò)膠囊（等3種市售品種）中的丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B等多種成分作為研究對象，采用多波長反相高效液相色譜法對復(fù)方制劑中有效成分的質(zhì)量控制進行較為系統(tǒng)的方法學(xué)研究，所建立的方法專屬性強、精密度和穩(wěn)定性良好，實驗結(jié)果準確可靠，可為活血化瘀中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)、有效的試驗方法與依據(jù)。第一部分：參芍口服液中的丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的多波長RP-HPLC法測定目的：建立參芍口服液的五種有效成分（丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B）的RP-HPLC定量分析方法，為參芍口服液質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法：采用EclipseXDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷倫公司）色譜柱，流動相為0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C）進行梯度洗脫；流速：1.0mL/min；檢測波長：280nm、230nm、320nm；柱溫：30℃；進樣量為10μL。結(jié)果：在此色譜條件下，5種成分可完全分離，丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的線性范圍分別為：24~384μg/mL（r2=1）,1.25~20μg/mL（r2=0.9998），40.5~648μg/mL（r2=0.9996），1.5~24μg/mL（r2=0.9999），145~2320μg/mL（r2=0.9999），平均回收率為丹參素100.8%（RSD=1.29%），原兒茶醛100.2%（RSD=2.27%），芍藥苷99.6%（RSD=0.93%），阿魏酸100.2%（RSD=1.18%），丹酚酸B99.3%（RSD=2.46%）。結(jié)論：采用多波長RP-HPLC法建立了參芍口服液中五種有效成分（丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B）的含量測定方法。所建立方法專屬性強，精密度、準確度好，為參芍口服液綜合質(zhì)量控制提供了質(zhì)控依據(jù)。第二部分：多波長反相高效液相色譜法測定芪龍膠囊中丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的含量目的：利用反相高效液相色譜法測定芪龍膠囊中丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的含量，為該制劑的質(zhì)控提供參考。方法：采用EclipseXDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷倫公司）色譜柱，流動相為0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C）進行梯度洗脫；流速：1.0mL/min；檢測波長：280nm、230nm、320nm；柱溫：30℃；進樣量為10μL。結(jié)果：在此色譜條件下，5種成分可完全分離，丹參素、原兒茶醛、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸B的線性范圍分別為：4.24~132.29μg/mL（r2=1）,0.36~11.23μg/mL（r2=0.9998），23.71~379.39μg/mL（r2=1），0.7~11.2μg/mL（r2=0.9999），200~3200μg/mL（r2=0.9998），平均回收率為丹參素100.1%（RSD=1.40%），原兒茶醛99.9%（RSD=2.70%），芍藥苷99.8%（RSD=1.47%），阿魏酸102.0%（RSD=3.11%），丹酚酸B99.9%（RSD=1.41%）。結(jié)論：該方法簡單快速，5種成分分離效果好，可用于芪龍膠囊質(zhì)量控制。第三部分：多波長HPLC-DAD法測定益心舒膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量目的：通過對益心舒膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的HPLC-DAD法測定，為該制劑的質(zhì)控提供參考依據(jù)。方法：采用EclipseXDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷倫公司）色譜柱，流動相為0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C）進行梯度洗脫；流速：1.0mL/min；檢測波長：280nm、320nm；柱溫：30℃；進樣量為10μL。結(jié)果：在此色譜條件下，4種成分可完全分離，丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的線性范圍分別為：9~144μg/mL（r2=0.9999）,0.5~8μg/mL（r2=0.9998），0.65~10.4μg/mL（r2=0.9997），221.25~3540μg/mL（r2=0.9997），平均回收率為丹參素100.7%（RSD=1.75%），原兒茶醛100.3%（RSD=2.89%），阿魏酸100.2%（RSD=3.16%），丹酚酸B99.7%（RSD=2.04%）。結(jié)論：采用HPLC-DAD法，同時測定益心舒膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B含量，該法簡單易行、重現(xiàn)性好，可用于益心舒膠囊質(zhì)量控制。第四部分：多波長高效液相色譜法測定消栓通絡(luò)膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量目的：利用多波長高效液相色譜法，對消栓通絡(luò)膠囊中丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的含量進行定量分析，為該制劑的質(zhì)控提供方法學(xué)參考。方法：采用EclipseXDB-C18(4.6mm×150mm，5μm，安捷倫公司）色譜柱，流動相為0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C）進行梯度洗脫；流速：1.0mL/min；檢測波長：280nm、320nm；柱溫：30℃；進樣量為10μL。結(jié)果：在此色譜條件下，4種成分可完全分離，丹參素、原兒茶醛、阿魏酸、丹酚酸B的線性范圍分別為：12~192μg/mL（r2=0.9998）,1~16μg/mL（r2=0.9999），0.4~6.4μg/mL（r2=0.9999），62.5~1000μg/mL（r2=0.9999），平