臨床輸血和檢驗(yàn)專家講座

臨床輸血與檢驗(yàn)臨床輸血與檢驗(yàn)試驗(yàn)指導(dǎo)臨床輸血和檢驗(yàn)第1頁

一、RBCABO血型判定二、RBCRh血型判定主要內(nèi)容

試驗(yàn)一、RBC血型判定（一）ABO血型判定（一）臨床輸血和檢驗(yàn)第2頁

一、ABO血型判定（一）

（一）待檢血漿和待檢5%RBC懸液配制兩人一組

1.待檢血漿制備（反定型用）（1）放血：選擇血多未溶血貯血管，剪兩端，將血于小試管中，編號(hào)。（2）離心：rpm×3min。（3）吸收血漿：塑料滴管、滴管保留。

2.5%RBCNS懸液制備（正型用）（1）洗滌RBC：在上（3）RBC試管中加等VNS，混勻。（2）離心：rpm×3min。（3）配制5%RBC懸液：滴1滴RBC于潔凈小試管底部（懸空），加NS14滴（滴管放在試管中），混勻。臨床輸血和檢驗(yàn)第3頁（二）RBOABO判定（試管法：正定型）【試劑】標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清（商品）、NS【操作】

1.標(biāo)識(shí)

2.加已知抗血清各管加1滴對(duì)應(yīng)抗A、抗B抗體

3.加待檢5%RBC各管分別加1滴待檢5%RBC

4.離心混勻，1000rpm×1min。

5.觀察結(jié)果顯微鏡6.判斷結(jié)果7.匯報(bào)結(jié)果ABO血型定型（試管法：反定型）：

【注意】器材、試劑、標(biāo)本、操作、生物安全臨床輸血和檢驗(yàn)第4頁（三）RBCABO判定（試管法：反定型）

試劑：5%A型和B型RBC標(biāo)本：待測(cè)血清或血漿

操作：標(biāo)識(shí)；加血清；加RBC；混勻；離心；觀察結(jié)果、判斷結(jié)果

臨床輸血和檢驗(yàn)第5頁

試驗(yàn)二、紅細(xì)胞血型判定（二）一、RBCABO血型判定（玻片法：正定型）

1.5%RBC待檢RBC懸液制備

加NS10滴；采血；擠1滴血；將1滴血放進(jìn)裝有NS試管中，用NS洗凈試管壁上血液混勻。

2.血型判定標(biāo)識(shí)；加抗血清；加RBC；混勻；1-5min看結(jié)果3.注意防干；顯微鏡觀察結(jié)果。臨床輸血和檢驗(yàn)第6頁二、RhD抗原判定1.試劑

單克隆抗D（IgG+IgM）試劑2.標(biāo)本

5%待檢RBC（自己）3.

方法

鹽水介質(zhì)（試管法）4.操作程序

取小試管1支；標(biāo)識(shí)；加抗D試劑1滴；加5%RBC混勻；離心；觀察結(jié)果；

匯報(bào)結(jié)果：Rh血型判定（鹽水介質(zhì)法）D抗原

性。5.注意臨床輸血和檢驗(yàn)第7頁

試驗(yàn)匯報(bào)試驗(yàn)一血型判定（一）RBCABO血型判定（一）

一、鹽水介質(zhì)試管法（正定型）1、操作程序標(biāo)本制備、標(biāo)識(shí)、加抗血清、加待測(cè)RBC、混勻、離心、觀察結(jié)果、判斷結(jié)果、匯報(bào)結(jié)果。2、結(jié)果匯報(bào)RBCABO血型判定（試管法：正定型）：3、注意事項(xiàng)臨床輸血和檢驗(yàn)第8頁二、鹽水介質(zhì)試管法（反定型）1、操作程序標(biāo)本制備、標(biāo)識(shí)、加抗血清、加待測(cè)RBC、混勻、離心、觀察結(jié)果、判斷結(jié)果、匯報(bào)結(jié)果。2、結(jié)果匯報(bào)RBCABO血型判定（試管法：反定型）：3、注意事項(xiàng)臨床輸血和檢驗(yàn)第9頁

試驗(yàn)二、RBC血型判定（二）

綜合

一、RBCABO血型判定（二）玻片法1、操作程序

2、結(jié)果匯報(bào)3、注意事項(xiàng)二、RBCRhD抗原判定1、操作程序2、結(jié)果匯報(bào)3、注意事項(xiàng)臨床輸血和檢驗(yàn)第10頁

主要內(nèi)容一、ABO血型判定二、Rh血型判定試驗(yàn)十六交叉配血臨床輸血和檢驗(yàn)第11頁

血涂片及WBC分類鏡檢血涂片移動(dòng)次序

臨床輸血和檢驗(yàn)第12頁

1.試劑Wright染色（1）瑞氏染液：亞甲藍(lán)+伊紅+甲醇（2）姬氏染液：

2.標(biāo)本血涂片

3.染色（1）放置血片：平放（2）加瑞氏染液：覆蓋血膜染色（量）（3）固定：1min。（4）加姬氏染液：等量（防干、時(shí)間）。（5）混勻、染色：5-10min（6）洗片：流水沖洗染料三、血涂片染色臨床輸血和檢驗(yàn)第13頁

主要內(nèi)容一、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用（顯微鏡）二、皮膚采血三、WBC形態(tài)識(shí)別（有時(shí)間）

試驗(yàn)二血細(xì)胞計(jì)數(shù)基本技能訓(xùn)練（二）

臨床輸血和檢驗(yàn)第14頁

改良牛鮑血計(jì)數(shù)板

厚質(zhì)玻璃板：分上、下2個(gè)計(jì)數(shù)室，兩側(cè)各有1條支柱，比計(jì)數(shù)室高0.1mm，蓋上蓋玻片，(24mm×20mm×0.6mm)形成0.1mm縫隙。

一、血C計(jì)數(shù)板使用臨床輸血和檢驗(yàn)第15頁

計(jì)數(shù)室結(jié)構(gòu)：各邊長為3mm，分為9個(gè)大方格，其中四角大方格分為16個(gè)中方格

（單線）中央大方格：用雙線分為25個(gè)中方格每個(gè)中方格：又用單線分為16個(gè)小方格臨床輸血和檢驗(yàn)第16頁血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)臨床輸血和檢驗(yàn)第17頁血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)一個(gè)大方格臨床輸血和檢驗(yàn)第18頁

3.操作（1）采血、取血：20ul（2）WBC稀釋液稀釋：0.38+20ul（3）計(jì)數(shù)板準(zhǔn)備：潔凈，放置（板和蓋）（4）充池：量、氣泡、連續(xù)充池。（5）顯微鏡計(jì)數(shù)1）對(duì)光、調(diào)光：2）移板3）Lp觀察：觀察計(jì)數(shù)板結(jié)構(gòu)；找到四角四個(gè)大方格中左上角大方格；WBC形態(tài)識(shí)別、計(jì)數(shù)；Hp觀察（光線控制：弱！聚光器、光柵、反光鏡）臨床輸血和檢驗(yàn)第19頁1.器材（1）采血器材：采血針、酒精棉球、干棉球。（2）WBC計(jì)數(shù)：加樣器，小試管；Hb吸管；計(jì)數(shù)板，顯微鏡。（3）WBC分類：載玻片、蓋玻片；顯微鏡2.試劑

（1）WBC稀釋液（2）染液

二、皮膚采血

臨床輸血和檢驗(yàn)第20頁3.操作（1）準(zhǔn)備：WBC稀釋液（0.38ml）;Hb吸管載玻片、推玻片；計(jì)數(shù)板及蓋片；顯微鏡（2）采血：1）選擇部位：2）消毒、待干：3）刺針：4）檫去第一滴血5）取血、稀釋：20ul6）推片、傷口處理：7）染色：臨床輸血和檢驗(yàn)第21頁一、Hb微量吸管使用為了確保取血準(zhǔn)確性，應(yīng)該注意哪些步驟或問題二、血涂片制備（一）操作程序（二）思索題：1.影響血涂片制備原因有哪些，是怎樣影響？2.評(píng)價(jià)一張血涂片制備質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有哪些？三、血涂片染色（一）操作程序（二）瑞氏染色原理是什么？注意問題？試驗(yàn)一血細(xì)胞計(jì)數(shù)基本技能訓(xùn)練（一）實(shí)驗(yàn)報(bào)告臨床輸血和檢驗(yàn)第22頁一、皮膚采血操作程序（采血、稀釋、涂片）：二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用及WBC形態(tài)識(shí)別WBC計(jì)數(shù)充池、WBC識(shí)別體會(huì)？

試驗(yàn)二血細(xì)胞計(jì)數(shù)基本技能訓(xùn)練（二）

臨床輸血和檢驗(yàn)第23頁臨床輸血和檢驗(yàn)第24頁1.器材采血器材；WBC計(jì)數(shù)。2.試劑

WBC稀釋液

3.操作程序（1）準(zhǔn)備、標(biāo)識(shí)：0.38ml（2）采血：選擇部位、消毒、刺針、檫血（3）取血：20ul（4）稀釋、混勻：（5）推片：2-3張；干燥、編號(hào)（6）顯微鏡計(jì)數(shù)：四角4個(gè)大方格計(jì)數(shù)（光線、微調(diào)：結(jié)構(gòu)、識(shí)別）計(jì)數(shù)完后馬上洗板！（7）計(jì)算（8）匯報(bào)WBC計(jì)數(shù)=7.5×109/L一、操作程序及結(jié)果匯報(bào)？二、WBC計(jì)數(shù)主要步驟注意事項(xiàng)試驗(yàn)三WBC計(jì)數(shù)

臨床輸血和檢驗(yàn)第25頁1.器材采血器材；WBC分類器材。2.試劑

瑞氏染液、姬氏染液

3.操作程序（1）制片：采血、推片、干燥、標(biāo)識(shí)（2）固定：（3）染色：（4）沖洗：（5）待干：（6）顯微鏡檢驗(yàn)：Lp油鏡檢驗(yàn)（光線,

次序、形態(tài)）（7）匯報(bào)

試驗(yàn)四WBC分類計(jì)數(shù)

臨床輸血和檢驗(yàn)第26頁

細(xì)胞形態(tài)顯微鏡檢驗(yàn)重點(diǎn)（背景細(xì)胞）

胞體：大小，形態(tài)。C核：大小、形態(tài)、染色質(zhì)粗細(xì)、染色。

胞漿：多少、染色

胞漿顆粒：種類、多少、大小、染色血涂片及WBC分類鏡檢血涂片移動(dòng)次序

臨床輸血和檢驗(yàn)第27頁ＷＢＣ分類：Nsg:3%Nst:59%Lym:30%Mon:4%Eos:3%Bas:1%

試驗(yàn)匯報(bào)一、WBC分類操作程序及結(jié)果匯報(bào)二、血涂片檢驗(yàn)內(nèi)容和檢驗(yàn)程序？

分類器使用??！采血、推片、充池示教??！臨床輸血和檢驗(yàn)第28頁染色正常時(shí)染色效果臨床輸血和檢驗(yàn)第29頁

LYM：

6-15um

，圓或卵圓；核圓卵圓，染色質(zhì)致密或深紫色積聚成塊；胞質(zhì)透明淡藍(lán)，可見核周圍淡染。

小LYM：胞質(zhì)少，無顆粒

大LYM：胞質(zhì)多，含少許粗大天嗜青顆粒臨床輸血和檢驗(yàn)第30頁Mon：12～20um，圓、橢圓或不規(guī)則；核多形性、腎形、馬蹄形，常偏位，常有扭曲、折疊感，染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀，著色較淺，輕度聚集；胞質(zhì)較多，因含大量細(xì)小嗜天青顆粒而染成細(xì)小、塵土樣灰藍(lán)色或紫紅色

可含少許空泡。臨床輸血和檢驗(yàn)第31頁臨床輸血和檢驗(yàn)第32頁

分類器使用！?。ㄗ笫郑?/p>

BasEosNsg（中指）Lym（指食）NstMon采血示教！！臨床輸血和檢驗(yàn)第33頁

血涂片顯微鏡檢驗(yàn)1.檢驗(yàn)內(nèi)容（1）血涂片制備及染色情況：全片，Lp（2）寄生蟲檢驗(yàn)：（3）WBC數(shù)量預(yù)計(jì)、形態(tài)觀察及DC：（4）RBC數(shù)量預(yù)計(jì)及形態(tài)：（5）PLT數(shù)量預(yù)計(jì)及形態(tài)觀察

2.檢驗(yàn)程序（1）肉眼觀察：血涂片制備情況（2）顯微鏡準(zhǔn)備（3）放片：血片體尾交界部位放在視野中央（4）LP檢驗(yàn)：血涂片制備及染色；寄生蟲等（5）油鏡檢驗(yàn)：WBC、RBC、PLT；其它臨床輸血和檢驗(yàn)第34頁外周血中正常WBC形態(tài)P33臨床輸血和檢驗(yàn)第35頁Mon形態(tài)臨床輸血和檢驗(yàn)第36頁臨床輸血和檢驗(yàn)第37頁一、RBC計(jì)數(shù)1.方法及原理

2.器材顯微鏡、計(jì)數(shù)板、微量吸管等

3.試劑及標(biāo)本

NS

4.操作程序（1）采血、取血、稀釋、充池：深

20ul+0.38ml稀釋液；10μl+2mlNS推片（2）計(jì)數(shù)：中央大方格內(nèi)5個(gè)中方格（HP）（3）計(jì)算：RBC/L=N/5×25×10×200×106/L=N/100×1012/L（4）匯報(bào)：RBC=X.X×1012/L

試驗(yàn)五RBC計(jì)數(shù)和PLT計(jì)數(shù)臨床輸血和檢驗(yàn)第38頁

5.注意事項(xiàng)（1）稀釋液：等滲、稀釋、過濾（2）混勻：充分（方法）（3）充池：均勻，2次RBC數(shù)量＜5%（RV內(nèi)）（4）WBC過多（＞100×109/L）：校正臨床輸血和檢驗(yàn)第39頁

二、PLT計(jì)數(shù)1.方法2.原理3.器材4.試劑及標(biāo)本

N

4.操作程序（1）采血：RBC時(shí)一起取血（2）取血、稀釋：

20ul+0.38ml（3）混勻、靜置：混勻1min，放置待RBC基本破壞（4）充池：混勻，充池、靜置10-15min，（2）計(jì)數(shù)：中央大方格內(nèi)5個(gè)中方格（HP）（3）計(jì)算：（4）匯報(bào)：PLT=XXX×109/L

臨床輸血和檢驗(yàn)第40頁

5.注意事項(xiàng)

體積小易黏附聚集破壞（1）器材、試劑潔凈：稀釋液需過濾，器材潔凈，防止微粒和細(xì)菌污染。（2）采血：進(jìn)行末梢采血時(shí)，針刺3mm，血流通暢。第一滴血棄去，首先采血作PLT計(jì)數(shù)。操作快速，防止粘附、聚集和破壞。（3）混勻：血液加入稀釋液內(nèi)充分混勻預(yù)防PLT粘附和聚集，充池前也需充分混勻，但注意混勻力度預(yù)防破壞血小板或產(chǎn)生氣泡。（4）靜置：充池后需靜置10～15min，使PLT充分下沉。臨床輸血和檢驗(yàn)第41頁（4）計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)光線稍暗，應(yīng)與小RBC、細(xì)胞碎片、雜質(zhì)、灰塵及微生物區(qū)分。（5）時(shí)間：在1h內(nèi)計(jì)數(shù)完成。（6）溫度：室溫高時(shí)注意保持計(jì)數(shù)池周圍濕度，以免水分蒸發(fā)而影響計(jì)數(shù)結(jié)果。

試驗(yàn)匯報(bào)一、RBC計(jì)數(shù)操作程序及結(jié)果匯報(bào)二、PLT計(jì)數(shù)操作程序及結(jié)果匯報(bào)三、PLP計(jì)數(shù)關(guān)鍵步驟注意事項(xiàng)臨床輸血和檢驗(yàn)第42頁試驗(yàn)六Hb測(cè)定

試驗(yàn)匯報(bào)一、Hb測(cè)定操作程序（講完課后寫）臨床輸血和檢驗(yàn)第43頁臨床輸血和檢驗(yàn)第44頁1.方法及原理

2.器材

3.試劑及標(biāo)本

伊紅-丙酮

4.操作程序（1）準(zhǔn)備:取小試管2支，0.38mlEos稀釋液；

Ret染液1滴（2）取血、稀釋：20ul+0.38ml；1滴血于染色中（3）充池計(jì)數(shù)：充分混勻、充池2個(gè)計(jì)數(shù)池，共10個(gè)大方格（Lp）。30min內(nèi)計(jì)數(shù)完（5）計(jì)算：Eos=N/10×10×20×106=N/50×109/L（6）匯報(bào)：Eos=0.XX×109/L試驗(yàn)七嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)臨床輸血和檢驗(yàn)第45頁

5.注意事項(xiàng)

（1）1hr內(nèi)計(jì)數(shù)（30min內(nèi)），破壞，難識(shí)別。（2）馬上混勻（易聚集），但稀釋后不應(yīng)過分振搖；稀釋液粘稠可適當(dāng)延長混勻時(shí)間。（3）注意與殘留NC區(qū)分：不著色或著色淺，顆粒小。

實(shí)驗(yàn)

七Eos計(jì)數(shù)1.操作程序及結(jié)果匯報(bào)2.各步驟注意事項(xiàng)臨床輸血和檢驗(yàn)第46頁

1.原理2.器材縮小視野紙片3.試劑10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液4.操作（試管法）

1）加染液：小試管1支，加染液1滴。2）采血、取血：加血1滴于試管中，混勻。4）染色和制片：室溫下放置15～20min后，制片5）計(jì)數(shù)：油鏡最少檢驗(yàn)1000個(gè)RBC中Ret數(shù)

凡R