高三生物多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna

課題2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段自學(xué)提綱：知識回顧：1.DNA分子的結(jié)構(gòu)（外側(cè)、內(nèi)側(cè)、基本單位）；2.DNA復(fù)制過程和特點(diǎn)；3.PCR技術(shù)概念及應(yīng)用?；靖拍睿鹤冃浴?fù)性、TaqDNA聚合酶、引物理解PCR技術(shù)的原理掌握PCR技術(shù)的全過程比較PCR技術(shù)和體內(nèi)DNA復(fù)制的異同點(diǎn)。1、DNA分子的3’

端與5’

端-OH端為3’;磷酸基團(tuán)的末端為5’

。2、DNA分子由兩條反向平行的脫氧核苷酸鏈根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則形成氫鍵連接而成。解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打開DNA雙鏈模板合成子鏈原料催化子鏈合成使DNA聚合酶能從引物3’端開始連接脫氧核苷酸

思考：3、體內(nèi)DNA復(fù)制的條件是什么？體外擴(kuò)增DNA如何提供相似環(huán)境？變性（80-100℃

）Taq聚合酶（耐高溫）15—30個核苷酸構(gòu)成DNA或RNADNA雙鏈單鏈變性（加熱80-100℃

）復(fù)性（緩慢冷卻）4、DNA分子的熱變性原理：變性的目的：復(fù)性的目的：解開雙鏈有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ與兩條單鏈的結(jié)合一、PCR技術(shù)的原理利用DNA分子的熱變性原理，通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合，從而完成體外DAN分子的擴(kuò)增。體外DNA復(fù)制的條件：

四種脫氧核苷酸、耐高溫的聚合酶、引物、模板；緩沖溶液和嚴(yán)格控制溫度的溫控設(shè)備。復(fù)制的方向：子鏈的5’端向3’端延伸。二、PCR的反應(yīng)過程每個循環(huán)包括：變性——復(fù)性——延伸

從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也可以作為模板參與反應(yīng)，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA單鏈會與引物Ⅱ結(jié)合，進(jìn)行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制處于兩個引物之間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴(kuò)增。三、實(shí)驗(yàn)步驟：準(zhǔn)備好PCR反應(yīng)體系的配方用微量移液器按配方在往微量離心管中加入各組分蓋嚴(yán)蓋子，用手指輕輕彈擊管壁混合反應(yīng)液離心10分鐘將離心管放入PCR儀上，設(shè)置好循環(huán)程序進(jìn)行反應(yīng)注意事項(xiàng)：詳見操作提示

四、結(jié)果分析與評價(jià)DNA含量的測定：稀釋→對照調(diào)零→測定→計(jì)算（公式見P63）波長260nm處讀數(shù)蒸餾水做對照50倍PCR技術(shù)與體內(nèi)DNA復(fù)制的區(qū)別：

1.PCR不需要解旋酶；體內(nèi)DNA復(fù)制需要；

2.PCR需要耐熱的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物體內(nèi)的聚合酶在高溫時會變性；

3.PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，而生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要生物體自身的復(fù)制。練習(xí)鞏固1、關(guān)于PCR技術(shù)的應(yīng)用，錯誤的一項(xiàng)是A古生物學(xué)、刑偵破案、DNA序列測定B診斷遺傳疾病、基因克隆、古生物學(xué)CDNA序列測定、基因克隆、刑偵破案‘D診斷遺傳疾病、合成核苷酸、DNA序列測定2、DNA的合成方向總是從子鏈的哪一端向哪一端延伸？3、PCR技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是A原理簡單B原料易找CTaqDNA聚合酶有耐熱性D快速、高效、靈活、易于操作4、做PCR使用的微量離心管、槍頭、緩沖液及蒸餾水使用前必須進(jìn)行的關(guān)鍵步驟是A反復(fù)洗滌B不怕外源DNA污染C高壓滅菌D在—20℃儲存；/幼兒園家具ekn927ach忽然，他大叫起來：“有了……我做你的腿！”傻子湊過來，把拐杖恨恨地扔到一邊，雙手?jǐn)v起我?！疤K院長，我可以幫著你做……”他攙扶著我的身子讓我做起動作來。伸臂曲臂、上仰搖頭、擴(kuò)胸彎腰……在他的幫助下，我重復(fù)地做著……“好了好了……蘇院長能站起來了……”傻子拍著手在我面前歡呼起來。我失去了平衡慢慢地向一旁倒下，傻子慌亂地跑過來，我的整個身子重重地壓在他的身上。當(dāng)我掙扎著爬起來的時候，傻子已是大汗淋漓了……不出我的預(yù)料，當(dāng)天晚上傻子果真病了。高燒到了40℃，滿嘴里說著胡話：“壞了壞了……歪了歪了……快跑快跑……嘿嘿嘿嘿……”“傻子——傻子——”我把他緊緊地?fù)г趹牙?。肖燕立即撥通了已院的電話，救護(hù)車很快就來了。我跟傻子去了已院……三哥仔細(xì)地檢查了傻子的病情后對我說：“是勞累過度引起的風(fēng)寒，沒有大礙，打幾天點(diǎn)滴就好了?！蔽业男睦镆粔K石頭落了地，迫切地對三哥說：“讓他多住幾天，好好待他，傻子是個懂事的好孩子……”自從傻子進(jìn)了已院，我的鍛煉就沒有停歇過。早晨迎接太陽，傍晚披著霞光，在老人們的陪伴下自由自在的運(yùn)動著。一開始，我借助著樹干、樹枝的支撐活動著自己的上肢和腰部，后來，漸漸地也能蹲馬步了。晚上，在睡覺之前，肖燕不厭其煩地給我按摩。有一次，她一邊給我按摩一邊問我：“蘇林，說句心里話，如果有那么一天，你的腿真的康復(fù)了，你還繼續(xù)開你的養(yǎng)老院嗎？”“你說呢？”我反問道。“人們常說，嫁漢嫁漢穿衣吃飯……自從你的腿殘疾以來，家里的里里外外全靠我一個人支撐著,你隨便說說，我就干大半天甚至一兩天也干不完。我不是抱怨，你想過沒有？我也是五十多歲的人了，哪里有那么多的精力和體力干這么多的活？”她沒有回答我的問題直接跟我攤牌了，“俗話說：跟了當(dāng)官的當(dāng)娘子，跟了殺豬的翻腸子。我倒好自己殺豬自己翻腸子……”我愕然了，我知道她說的話都是真的！“蘇林，見好就收吧，我們已經(jīng)盡力了……到時候等把我也累垮了，咱這個家我看你咋辦……”妻子的擔(dān)心不是沒有道理的。養(yǎng)老院剛剛有點(diǎn)起色，我就把它交給他人管理……我還真有點(diǎn)舍不得！“肖燕，就說我的腿吧，現(xiàn)在剛開始有點(diǎn)好轉(zhuǎn)，咱就放棄了，不治了，你想我這一輩子還有站起來的希望嗎？”“蘇林，你怎么這么固執(zhí)，這根本就是兩碼事！”“好了好了，我不跟你爭，你說的事等過了年我再想想法?！逼拮硬辉僬f話，低著頭默默地給我按摩著。我反而覺得有點(diǎn)不對勁兒，禁不住問她，“怎么不說話了呢？”“你不讓別人跟你爭誰還敢說話？你以為你是誰？倒霉蛋！”說著，她故意地把我的小腿擰了一下。