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1基于血小板活化生物標(biāo)志物檢測(cè)的中藥注射劑活血化瘀活性評(píng)價(jià)方法操作規(guī)程本文件規(guī)定了體外血小板活化生物標(biāo)志物評(píng)價(jià)中藥注射劑活血化瘀活性的實(shí)驗(yàn)方4檢測(cè)原理2強(qiáng)的相關(guān)性。二磷酸腺苷(ADP)為一種較為溫和的血小板活化誘導(dǎo)劑,可適度活化血小板,引發(fā)后續(xù)5材料與設(shè)備5.1材料生產(chǎn)許可證資質(zhì)的單位購(gòu)進(jìn)。在實(shí)驗(yàn)期間應(yīng)按國(guó)家對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)條件要求進(jìn)行飼養(yǎng)。動(dòng)物飼養(yǎng)符合a)anti-mouse/ratCD62pPE/Cy7、Anti-Mouse/RatCD61PE、RatIgG2aP;ADP激活血樣的制備:分別取上述基礎(chǔ)血樣和加藥血樣,各加入100ul濃度為20uM的ADP激活,使得ADP的終濃度為10uM,渦旋混勻1s,反應(yīng)2min。上述各血樣加入不同抗體后,4℃±1℃避光孵育20min。分別取固定后的各組血樣50ul,加入1ml稀釋液稀釋(稀釋約250倍),可根據(jù)情況適當(dāng)調(diào)整稀釋倍數(shù),防止?jié)舛冗^(guò)大,分離不佳。加入稀釋液4),c)上樣速度控制細(xì)胞獲取速度在每秒200-400個(gè)細(xì)胞,一般a)R1門的劃定確定靶細(xì)胞群(單一的血小板),同時(shí)去除細(xì)胞碎片和細(xì)胞聚集體對(duì)試驗(yàn)的干擾。采用488nm氬離子激光(BLUE488nm在以CD61-PE-小的細(xì)胞團(tuán)為單一的血小板。將血小板圈定為R1門,門內(nèi)收集5000-1
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