《廣西橘紅珠》編制說明（征求意見稿）

1《廣西橘紅珠》（征求意見稿）編制說明中醫(yī)藥研究院提出，廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中山大學(xué)-廣東省中藥化橘紅是中國(guó)特有的國(guó)際性珍稀名貴藥材，有“南方人參”美譽(yù)，其藥材始見于1675年《廣東通志》，在高州府藥之屬類別下有如下描述：“粵中雖稱沃壤，然風(fēng)土淺薄賦質(zhì)柔脆，人物同之，至于靈奇珍異，物亦獨(dú)擅其美者，夫果有利于用，即存其名以著其實(shí)可也。奚必橘之貴而柚之賤哉。或曰柚誠柚2東省高州府志》記載：“若夫化州之橘非橘也，柚也，天下之人皆橘之，吾亦不得不橘之?！蔽髦兴幹尽罚?963年）第二冊(cè)，用于“止渴，助消化，除胸中氣滯其炮制方法也效仿橘紅“去白取皮”，使用外果皮入藥，即化橘紅藥材。而由于化州柚皮厚肉酸，不中食，在實(shí)際使用中，逐漸演變?yōu)槭褂梦闯墒煊坠胨幖撮偌t珠。橘紅珠中大部分都是中果皮，其中柚皮苷、野漆樹苷等活性成分含建立科學(xué)、準(zhǔn)確的廣西橘紅珠質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于保障廣西橘紅產(chǎn)品的品質(zhì)，規(guī)范廣西橘紅的種植、采收、加工，促進(jìn)廣西柚產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展，打造廣近年來自治區(qū)政府的對(duì)種植化橘紅的支持力度不斷增強(qiáng)，調(diào)動(dòng)了農(nóng)戶的積極性，廣西的化州柚的種植規(guī)模不斷擴(kuò)大，按優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)品種畝產(chǎn)2000~2500公效益相當(dāng)可觀，產(chǎn)品供不應(yīng)求，因此廣西橘紅產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，目前初步統(tǒng)計(jì)種境調(diào)查著手，在對(duì)各產(chǎn)區(qū)的水分、光照、溫度、土壤條件分析的基礎(chǔ)上，研究分析了廣西化橘紅產(chǎn)區(qū)種植發(fā)展的現(xiàn)狀，發(fā)現(xiàn)廣西化州柚種植發(fā)展過程中面臨著種植適應(yīng)區(qū)劃分不明確，盲目引種擴(kuò)種；受氣候條件影響較大，且基礎(chǔ)設(shè)施落后；各產(chǎn)區(qū)土壤環(huán)境差異明顯，產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊；品種良莠不齊，橘紅珠品質(zhì)得不到保證；其原因歸結(jié)為專業(yè)型人才缺乏，種植規(guī)模小，土地集約化程3度低；缺乏有效質(zhì)量控制體系政策落實(shí)不到位，產(chǎn)品得不到保障等問題。隨著橘紅珠及其系列產(chǎn)品的多元化開發(fā)及其獨(dú)特功效的日益凸顯，為保證人民群眾的用藥安全，促進(jìn)廣西化橘紅產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，有必要建立一套科學(xué)、準(zhǔn)確評(píng)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《廣西橘紅珠》項(xiàng)目任務(wù)下達(dá)后，成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工作組，制定了標(biāo)準(zhǔn)編寫方案，明確任務(wù)職責(zé)，確定工作技術(shù)路線，開展標(biāo)準(zhǔn)研制工作，具體標(biāo)準(zhǔn)編制工作由廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中山大學(xué)-廣東省中藥上廣西橘紅珠標(biāo)準(zhǔn)主要起草人員稱主要參加人員師授4師員員5），李沛波,蘇暢,畢福均,王永剛,彭維,蘇薇薇.化州柚提取物止咳作用及其f67李泮霖,李鋒,余劍軍,等.化州柚幼果生長(zhǎng)過程中柚皮苷含量的動(dòng)態(tài)變化標(biāo)準(zhǔn)編制工作組召開了標(biāo)準(zhǔn)編制會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的整體框架結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，并規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、要求、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、大量的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)資料，對(duì)廣西橘紅珠的前人研究成果進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)，形成了有的參考資料中有關(guān)廣西橘紅珠技術(shù)要求，并結(jié)合檢驗(yàn)實(shí)際要求的基礎(chǔ)上，按單位、企業(yè)針對(duì)廣西橘紅珠技術(shù)情況進(jìn)行分組實(shí)地調(diào)研學(xué)習(xí)。通過實(shí)地調(diào)研，8掌握各地方產(chǎn)品的具體要求。并實(shí)際征求意見，通過收集反饋了大量意見，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組多次召開會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行了反復(fù)修改和研究討論。最終形四、標(biāo)準(zhǔn)主要章節(jié)內(nèi)容及確定依據(jù)采用現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)廣西橘紅珠的感官指標(biāo)、理化指標(biāo)進(jìn)行分析測(cè)定，對(duì)（二）標(biāo)準(zhǔn)涉及技術(shù)的具體實(shí)施方案按照廣西壯族自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)編制工作的要求，標(biāo)準(zhǔn)起草小組成員于項(xiàng)目實(shí)施期間，深入廣西陸川、廣西南寧、廣西百色、廣東化州等9編號(hào)產(chǎn)地采收時(shí)間廣西陸川2023/02廣西陸川2023/02廣西陸川2023/04廣西陸川2023/04廣西陸川2023/07廣西南寧2023/04廣西南寧2023/07/廣東百色2023/02廣西百色202306廣東化州2023/06廣東化州2023/081.顯微鑒別參照中國(guó)藥典方法。供試品粉碎，過二號(hào)篩，混合均勻。取適量于載玻片上，滴數(shù)滴水合氯醛溶液將粉末浸潤(rùn)后，酒精燈加熱，再滴加適量稀甘油溶液，充分混合，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察。代表性顯微特征見圖1。樣品粉末黃棕色至棕褐色，中果皮薄壁細(xì)胞形狀不規(guī)則，壁不均勻增厚，有的作連珠狀或在角隅處特厚。果皮表皮細(xì)胞表面觀多角形、類方形或長(zhǎng)方形，垂周壁增厚，氣孔類圓形，直徑18~31μm，副衛(wèi)細(xì)胞5~7個(gè)。可見碎斷的非腺毛，碎段細(xì)胞多至十?dāng)?shù)個(gè)，最寬處直徑約33μm，胞腔內(nèi)含淡黃色或棕色顆粒狀物。草酸鈣方晶成片或成行存在于中果皮薄壁細(xì)胞中，呈多面形、菱形、棱柱形、長(zhǎng)方形或形狀不規(guī)則，直徑1~32μm,長(zhǎng)5~40μm.導(dǎo)管為螺紋導(dǎo)管和網(wǎng)紋導(dǎo)管。偶見石細(xì)胞及纖維。2表皮細(xì)胞44非腺毛圖1廣西橘紅珠的顯微鑒別2.薄層色譜鑒別卡瑪薄層色譜自動(dòng)點(diǎn)樣儀（ATS4）、自動(dòng)展開儀（ADC2）、紫外成像系統(tǒng)（CAMAG,Muttenz,Switzerland）。2.2試劑乙酸乙酯，丙酮，冰醋酸，甲醇，乙醇，均為分析純。柚皮苷對(duì)照品（110722-200610，中國(guó)食品藥品檢定研究院），橙皮內(nèi)酯水合物對(duì)照品（BBP00486，2.3供試品制備方法考察（1）提取溶劑的考察配制含柚皮苷對(duì)照品0.98mg/mL，橙皮內(nèi)酯水合物對(duì)照品0.19mg/mL的混合溶液。對(duì)不同提取溶劑進(jìn)行考察：甲醇、甲醇水溶液（7：3，v/v）、乙醇、乙醇水溶液（7：3，v/v）。供試品制備步驟如下：取第5批樣品，粉碎過二號(hào)篩，取0.5g粉末于錐形瓶中，分別加入5mL上述不同提取溶劑，超聲15分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液。各取2μL供試品溶液，點(diǎn)樣于高效薄層硅膠G板。展開劑根據(jù)2015版中國(guó)藥典化橘紅項(xiàng)，選擇乙酸乙酯，丙酮，乙酸和水（8:4:0.3:1），點(diǎn)好樣的薄層板于飽和展開缸中展開至8cm。取出薄層板，干燥，噴適量5%三氯化鋁乙醇溶液顯色劑后，于105°C加熱一分鐘，并在365nm紫外波長(zhǎng)下觀察。結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，提取溶劑對(duì)供試品溶液薄層展開效果并無明顯影響，最終選用甲醇作為提取溶劑。圖2提取溶劑的考察(柚皮苷RF=0.24,橙皮內(nèi)酯水合物RF=0.55)(2)提取溶劑體積的考察取0.5g樣品粉末于錐形瓶中，分別加入5mL,10mL,15mL,20mL甲醇，超聲15分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液。各取2μL供試品溶液點(diǎn)樣，同11法展開、顯色。結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，隨著提取體積的降低，柚皮苷及橙皮內(nèi)酯水合物條帶清晰度增加。因此選用5mL提取體積進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖3提取溶劑體積的考察(橙皮內(nèi)酯水合物RF=0.54,柚皮苷RF=0.22)(3)提取時(shí)間的考察取0.5g樣品粉末于錐形瓶中，加入5mL甲醇，分別超聲5min、15min、25min和35min,離心，取上清液作為供試品溶液。各取2μL供試品溶液點(diǎn)樣，同法展開、顯色。結(jié)果見圖4。結(jié)果表明，超聲時(shí)間對(duì)提取效果無明顯影響。選擇15分鐘作為提取時(shí)間。圖4提取時(shí)間的考察(1-對(duì)照品,2-5min,3-15min,4-25min,5-35min)(橙皮內(nèi)酯水合物RF=0.49,柚皮苷RF=0.21)2.4點(diǎn)樣方法的考察(1)點(diǎn)樣體積的考察分別取0.5μL,1μL,2μL,5μL,8μL供試品溶液點(diǎn)于高效薄層板展開，干燥，噴顯色劑，于105°加熱1分鐘后，置于365nm紫外波長(zhǎng)下觀察。結(jié)果見圖5。結(jié)果表明，隨著點(diǎn)樣體積增加，柚皮苷及橙皮內(nèi)酯水合物條帶清晰度增加。但當(dāng)點(diǎn)樣體積為8μL時(shí)，柚皮苷條帶與下方條帶分離較差。因此最終選用2μL作為點(diǎn)樣體積。圖5點(diǎn)樣體積的考察(2)條帶寬度的考察取2μL供試品溶液點(diǎn)在高效薄層板上，條帶寬度分別為2mm,4mm,6mm,8mmand10mm,于飽和展開缸中展開，干燥，噴適量顯色劑后于105°干燥1分鐘，并在365nm紫外波長(zhǎng)下觀察。結(jié)果見結(jié)果表明，條帶隨著點(diǎn)樣寬度的增加顯得更加狹細(xì)，分離度更好。因此選用8mm的條帶寬度進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。①乙1①乙1(1)穩(wěn)定性供試品溶液于室溫放置不同時(shí)間(0,1,2,3天)后，點(diǎn)樣、展開、顯色，置于365nm波長(zhǎng)紫外光下觀察。結(jié)果見圖7。結(jié)果表明，供試品溶液在3天內(nèi)穩(wěn)定性良好。1-對(duì)照品,2-0d,3-1d,4-2d,5-3d(2)耐用性不同粒徑硅膠薄層板樣品分別點(diǎn)于不同粒徑薄層板上(TLC和HPTLC板)。展開、顯色，置365nm波長(zhǎng)紫外光下觀察。結(jié)果見圖8。結(jié)果表明，高效薄層板條帶更為清晰，但普通薄層板也可達(dá)到鑒別要求。圖8HPTLC(左)和TLC(右)薄層板的比較不同品牌薄層板樣品分別點(diǎn)于不同品牌薄層板上，展開、顯色，置365nm波長(zhǎng)紫外光下觀察。結(jié)果見圖9。結(jié)果表明，不同品牌薄層板對(duì)供試品溶液條帶無明顯影響。展開濕度的影響點(diǎn)樣后，分別在不同濕度(46%、65%、75%、84%)條件下展開，顯色后，置于365nm波長(zhǎng)紫外光下觀察。結(jié)果見圖10。結(jié)果表明，不同濕度下，條帶清晰度無明顯區(qū)別。圖10濕度的影響(橙皮內(nèi)酯水合物柚皮苷(橙皮內(nèi)酯水合物柚皮苷(橙皮內(nèi)酯水合物柚皮苷(橙皮內(nèi)酯水合物柚皮苷耐用性考察結(jié)果表明，不同粒徑(高效薄層板或普通薄層板),不同品牌對(duì)樣品及對(duì)照品溶液薄層展開結(jié)果無明顯影響。不同濕度對(duì)橙皮內(nèi)酯水合物斑點(diǎn)有一定影響，濕度過低斑點(diǎn)不清晰。最終確定以柚皮苷對(duì)照品作為對(duì)照。2.6廣西橘紅珠樣品的薄層鑒別利用建立的薄層鑒別方法，對(duì)橘紅珠樣品進(jìn)行鑒別。結(jié)果如圖11所示。供試品溶液中，在與柚皮苷對(duì)照品相應(yīng)的位置上，均顯相同的圖111~11批橘紅珠樣品薄層鑒別結(jié)果1-柚皮苷，2-第1批，3-第2批，4-第3批，5-第4批，6-第5批，7-第6批，8-第7批，9-第8批，10-第9批，11-第10批，12-第11批(HPTLC硅膠G板，100×200mm)(21℃,60%)(R水分檢查采用藥典通則0832第二法進(jìn)行測(cè)定。樣品的水分結(jié)果如表2所示，11批樣品的平均水分為9.70%,以平均值上浮20%作為水分限度，規(guī)定不得過12.0%。表2橘紅珠樣品水分測(cè)定結(jié)果編號(hào)產(chǎn)地水分%1廣西陸川2廣西陸川3廣西陸川8.494.總灰分的測(cè)定總灰分檢查采用藥典通則2302進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果如表3所示。11批橘紅珠樣品的平均灰分為3.50%，以平均值上浮20%作為總灰分限度，規(guī)定不得過4.5%。表3橘紅珠樣品總灰分測(cè)定結(jié)果總灰分%1廣西陸川32廣西陸川3.743廣西陸川3.474廣西陸川3.565廣西陸川3.66廣西南寧3.297廣西南寧3.448廣東百色3.59廣西百色3.4910廣東化州3.3911廣東化州3.2平均值3.55.浸出物的測(cè)定6.1醇溶性浸出物照醇溶性浸出物測(cè)定法（通則2201）項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用乙醇作為溶劑。11批樣品的檢測(cè)結(jié)果見表4，醇溶性浸出物平均值為26.89%，以平均值下浮20%作為限度，規(guī)定不得少于20.0%。6.2水溶性浸出物照水溶性浸出物測(cè)定法（通則2201）項(xiàng)下的冷浸法測(cè)定，用水作溶劑。11批樣品檢測(cè)結(jié)果見表4，水溶性浸出物平均值為48.45%，以平均值下浮20%作為限度，規(guī)定不得少于40.0%。表4橘紅珠樣品浸出物測(cè)定結(jié)果編號(hào)醇溶性浸出物（%）水溶性浸出物（%）225.5151.3329.0251.41426.2848.23528.6147.36625.0948.62726.1149.05826.4846.49929.4449.361023.0942.71130.5647.86平均值26.8948.457.柚皮苷含量測(cè)定方法萬分之一電子分析天平（ME204，瑞士Mettlertoledo公司）；Ultimate3000高效液相色譜儀（美國(guó)Dionex公司，DGP-3600SD雙溫箱、DAD檢測(cè)器、Chromeleon7.2數(shù)據(jù)處理軟件色譜柱：Dionex5μm數(shù)控超聲波清洗器（KQ500DE，昆山市超聲儀器31有限公司超純水器（Simplicity185personal，美國(guó)Millipore公司）；移液管。7.1.2試藥純度：93.2%）。甲醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純甲醇（Honeywell，批號(hào)：R11G4H，色譜純）；冰醋酸（aladdin，批號(hào)：E1519047，色譜純）。7.1.3樣品條件摸索及方法學(xué)考察所用樣品為第8批樣品。7.2供試品制備方法的考察7.2.1色譜條件色譜柱：DionexAcclaim120C18（4.6×150mm，3μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-0.3%醋酸溶液（B）=35∶65；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：320nm；進(jìn)樣量：10μl；柱溫：35℃。7.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取適量柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含柚皮苷496.5μg7.2.3供試品溶液的制備使用水浴回流及超聲兩種方法對(duì)樣品進(jìn)行提取，其中超聲時(shí)間分別考察20分鐘、30分鐘，比較以上三種方法的柚皮苷提取效果。供試品溶液A（水浴回流）：取供試品粉末（過二號(hào)篩）0.5g，精密稱定，置150mL圓底燒瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，水浴回流提取60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取25mL續(xù)濾液，加甲醇定量轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液即得。供試品溶液B（超聲20min取供試品粉末（過二號(hào)篩）0.5g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲20分鐘（150W，40kHz），放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液即得。供試品溶液C（超聲30min取供試品粉末（過二號(hào)篩）0.5g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲30分鐘（150W,40kHz），放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液即得。分別進(jìn)樣以上3種供試品溶液10μL，記錄所需成分的峰面積。結(jié)果表明（表5超聲30分鐘與水浴回流60分鐘的提取效果相近，且兩種成分的峰面積均略高于水浴回流，說明此法提取效果較好，且更加省時(shí)、便利。故選擇超聲30分鐘作為樣品的提取方法。表5不同提取方法的比較提取方法稱樣量柚皮苷峰面積供試品溶液A供試品溶液B供試品溶液C水浴回流60分鐘0.51230.52080.472117507.1215072.7717926.50最終確定的供試品溶液制備方法為：取樣品粉末（過二號(hào)篩）約0.5g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘（150W，40kHz），放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。為節(jié)約溶劑，本標(biāo)準(zhǔn)草案中將供試品制備方法調(diào)整為：取本品粉末（過二號(hào)篩）約50mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，精密加入甲醇5ml，超聲處理30分鐘（150W，40kHz），放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。7.3色譜系統(tǒng)考察7.3.1溶液的制備（1）對(duì)照品溶液的制備分別含柚皮苷420.2μg。（2）供試品溶液的制備取供試品粉末（過二號(hào)篩）約0.5g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30min（150W，40kHz放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液，即得。7.3.2色譜條件流動(dòng)相及比例依據(jù)藥典化橘紅標(biāo)準(zhǔn)中柚皮苷含量測(cè)定條件，選擇甲醇-0.3%醋酸溶液（35:65）等度洗脫。7.3.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇根據(jù)柚皮苷對(duì)照品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描結(jié)果（圖12確定最大吸收波長(zhǎng)λmax。選擇283nm作為柚皮苷的檢測(cè)波長(zhǎng)。(1)不同品牌色譜柱的考察苷的保留時(shí)間、理論塔板數(shù)和拖尾因子。結(jié)果表明(表6),對(duì)于以上三種品牌色譜柱，柚皮苷均能獲得較好的分離效果。色譜柱保留時(shí)間(min)塔板數(shù)拖尾因子57.3.5流動(dòng)相的選擇（1）流動(dòng)相比例使用同一供試品溶液，考察流動(dòng)相中不同甲醇比例（30%、33%、35%、37%、40%）對(duì)分離的影響。結(jié)果表明（表7），不同比例甲醇對(duì)兩種待測(cè)成分的保留時(shí)間有顯著影響。甲醇比例越高，保留時(shí)間越短?？紤]到分離度及縮短分析時(shí)間，最終選擇甲醇比例為35%。表7流動(dòng)相甲醇比例的選擇保留時(shí)間（min）塔板數(shù)拖尾因子25.875267382543623512407.5373807（2）流速使用同一供試品溶液，考察不同流速（0.8、1.0、1.2ml/min）對(duì)分離效果的影響。結(jié)果表明（表8），除保留時(shí)間外，流速對(duì)各參數(shù)無明顯影響。最終選用1.0ml/min進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。保留時(shí)間（min）塔板數(shù)拖尾因子0.8ml/min44481.0ml/min44141.2mL/min44827.3.6柱溫的選擇使用同一供試品溶液，考察不同柱溫（25、30、35、40°C）對(duì)分離效果的影響。結(jié)果表明（表19，圖29），隨著柱溫上升，柚皮苷的分離度減小?？紤]到二者之間合適的分離度，最終選用35°C進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。表9柱溫的選擇保留時(shí)間（min）塔板數(shù)拖尾因子44854431441434927.3.7小結(jié)最后確定的色譜條件為：色譜柱：DionexAcclaim120C18（4.6流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：柚皮苷283nm；進(jìn)樣量：10μl；柱溫：35℃。7.4方法學(xué)考察通過混合對(duì)照品溶液以及供試品溶液，使用外標(biāo)法計(jì)算柚皮苷在樣品中的含量。其公式如下：在混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液中，柚皮苷在283nm波長(zhǎng)下下的峰面積。Cu為供試品溶液的濃度，單位為mg/ml；Cs為柚皮苷在混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的濃度，單位mg/ml。7.4.1線性范圍對(duì)照品母液的制備：精密稱取42.02mg柚皮苷對(duì)照品于10ml容量瓶中，用甲醇定容，即得柚皮苷濃度為4.202mg/ml對(duì)照品母液。線性對(duì)照品溶液的制備：分別定量移取不同體積0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml對(duì)照品母液于10ml容量瓶中，加50%甲醇定容，混勻。分別進(jìn)樣各濃度的線性對(duì)照品溶液，記錄283nm波長(zhǎng)下柚皮苷峰面積，根據(jù)各濃度下測(cè)得的峰面積，獲得以下校正曲線(表10,圖13),結(jié)果表明，柚皮苷具有良好的線性。表10柚皮苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程線性范圍(μg/ml)圖13柚皮苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線7.4.2重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，平行制備六份供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明（表23），兩種待測(cè)成分含量的RSD均小于2%。稱樣量柚皮苷峰面積柚皮苷（%）10.5007187.42269.78720.500987.19349.75830.5006288.01779.85640.5006988.70099.93150.5004988.75889.9416平均值0.5007988.52169.9099.864RSD（%）0.787.4.3中間精密度試驗(yàn)不同日期：取同一批樣品，在3個(gè)不同日期制備供試品溶液，每次平行3份，進(jìn)樣測(cè)定，RSD小于2%。不同分析人員：取同一批樣品，由三名分析人員分別平行制備3份供試品溶液，進(jìn)樣檢測(cè)，RSD小于2%。結(jié)果見表12。表12中間精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果-不同日期、不同實(shí)驗(yàn)人員不同日期柚皮苷含量不同人員柚皮苷含量（%）9.5159.7269.5249.4849.3049.4269.3539.4239.5739.4469.3139.189RSD（%）1.391.657.4.4準(zhǔn)確性試驗(yàn)通過檢測(cè)已知加入量的兩種待測(cè)成分的回收率來判斷方法的準(zhǔn)確性。分別制備低、中、高三個(gè)濃度的供試品溶液，每個(gè)濃度平行制備三份，方法如下：低濃度：取樣品粉末250mg，精密稱定，取9份，向低濃度組各加入10mg柚皮苷對(duì)照品，中等濃度各加入20mg柚皮苷對(duì)照品，高濃度各加入30mg對(duì)照品，向每份樣品中精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min（150W，40kHz），放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。取續(xù)濾液即得。根據(jù)樣品的測(cè)得量、原有量及加入量，計(jì)算其回收率。結(jié)果表明（表13），回收率范圍在95%-105%之間，且RSD<3%。原有量加入量測(cè)得量平均值RSD21.6910.5732.68103.9721.6910.6132.44101.3221.6921.0242.6699.76中21.6721.424399.5899.810.