微生物實(shí)驗(yàn)3課件

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

綜合性實(shí)驗(yàn)一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測（三）空氣、手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析菌落特征觀察P11細(xì)菌純培養(yǎng)P10（純培養(yǎng)不得超過18小時(shí)）膿汁和糞便標(biāo)本檢驗(yàn)（錄像）腸道致病菌的分離與鑒定（錄像）油鏡使用方法（講解）空氣的細(xì)菌學(xué)檢查組號時(shí)間地點(diǎn)菌落形成單位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU/m3＝50,000N÷AT≈86N(直徑7cm平板）N：平板上的菌落數(shù)A：平板面積(38.5cm2)T：采樣時(shí)間(15分鐘)CFU：colonyformingunit醫(yī)院各類房間空氣中細(xì)菌總數(shù)要求細(xì)菌數(shù)分級細(xì)菌總數(shù)/M3病房類型最低細(xì)菌數(shù)＜10器官移植、心血管手術(shù)室、制劑室。低細(xì)菌數(shù)＜200無菌室或其他手術(shù)室、嬰兒室、產(chǎn)房、術(shù)后恢復(fù)室、供應(yīng)室。一般細(xì)菌數(shù)200～500普通病房、治療室、放射科、按摩室?！镒?：以上為世界衛(wèi)生組織建議標(biāo)準(zhǔn)?！镒?：我國衛(wèi)生部要求，手術(shù)室、產(chǎn)房及嬰兒室空氣中細(xì)菌總數(shù)不得超過500個(gè)/M3。液體或固體標(biāo)本菌落總數(shù)測定可將標(biāo)本作十倍、百倍、千倍、萬倍稀釋。分別取1ml注入直徑9cm的滅菌平皿內(nèi)。傾注46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基大約15ml，混合均勻。瓊脂完全凝固以后，37℃培養(yǎng)48小時(shí)。選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。將計(jì)數(shù)得到的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出cfu/g(ml)。132

4132

4手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對照。

2人1塊平板甲、丙→常規(guī)洗手乙、丁→標(biāo)準(zhǔn)洗手甲（丙）乙（丁）丙丁手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析第1格為洗手前：+第2格為洗手后常規(guī)(甲、丙)洗手方法：?標(biāo)準(zhǔn)(乙、丁)洗手方法：?第3格為消毒后：±第4格空白對照：-細(xì)菌的純培養(yǎng)挑選單菌落:膿汁標(biāo)本在普通平板上有黃色、白色兩種菌落，菌落的色素是脂溶性的，是細(xì)菌本身的顏色。菌落直徑2mm左右、圓形、隆起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、不透明。糞便標(biāo)本在伊紅美藍(lán)平板上，有紫黑色、淡粉紅色兩種菌落，菌落顏色是水溶性的，不是細(xì)菌本身的顏色，顏色的產(chǎn)生是因?yàn)榇竽c埃希菌分解乳糖產(chǎn)酸，酸使伊紅與美藍(lán)結(jié)合，形成紫黑色具有金屬光澤、大而隆起、不透明的菌落；菌落直徑2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊紅的顏色，很淡的粉紅色，半透明，直徑1～2mm。選擇平板上相同的菌落數(shù)多的、典型的、容易挑取的單菌落，進(jìn)行接種。斜面接種法P10（1組4支）甲→普通平板→黃色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面丙→伊紅美藍(lán)→紫黑菌落→1支斜面丁→伊紅美藍(lán)→粉紅菌落→1支斜面★標(biāo)記：組號、黃色、白色、紫黑、粉紅?！锱囵B(yǎng)時(shí)間不得超過18小時(shí)。斜面接種法P10甲→黃色,乙→白色,丙→紫黑,丁→粉紅。標(biāo)記：組號，顏色安全警告接種環(huán)接種斜面一次，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快,＜50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開,＜5um通過呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在酒精燈半徑20厘米范圍內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。奧林巴斯CX21型生物顯微鏡（實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)，每人一臺）注意：只能橫放，不得豎放。奧林巴斯CX21型生物顯微鏡使用須知顯微鏡是精密光學(xué)儀器，請不要讓其受到撞擊，請小心操作。在搬運(yùn)顯微鏡時(shí)，請按右圖所示，以雙手抓住鏡臂孔的兩側(cè)，小心搬運(yùn)?！锶绻米≥d物臺①和鏡筒②等部位搬運(yùn)的話，有可能會(huì)造成損壞。顯微鏡各部件名稱開關(guān)與調(diào)整光強(qiáng)開或關(guān)之前，必須將亮度調(diào)整旋鈕②按箭頭相反方向轉(zhuǎn)動(dòng)到最小位置，以免損壞燈泡。電源開關(guān)①撥到∣側(cè)為開，撥到○側(cè)為關(guān)閉。按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)亮度調(diào)整旋鈕②變亮，相反方向轉(zhuǎn)動(dòng)則變暗。放置標(biāo)本按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕②降下載物臺。按箭頭方向拉開載物臺標(biāo)本夾③，自前向后將標(biāo)本片放入平臺，標(biāo)本夾③輕輕放回原位。轉(zhuǎn)動(dòng)上側(cè)垂直移動(dòng)桿④和下側(cè)水平移動(dòng)桿⑤，移動(dòng)標(biāo)本至光路中間。載物臺位置刻度載物臺上的刻度方便確定標(biāo)本位置，標(biāo)本移動(dòng)后可以快速回到原位。水平刻度的標(biāo)識位置以機(jī)械載物臺的①位置來讀取。垂直刻度的標(biāo)識線以②的位置來讀取。聚焦從顯微鏡的側(cè)面觀察，按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕①，使物鏡③盡可能接近標(biāo)本。一邊看目鏡，一邊慢慢逆箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕①，使載物臺下降。看到標(biāo)本以后，用微調(diào)旋鈕②來正確對焦?！?0倍物鏡的工作距離（WD，從物鏡到標(biāo)本的距離）為10.5mm。★油鏡的WD為0.13mm。調(diào)整瞳距調(diào)整瞳距是調(diào)整雙目間的距離，使兩眼同時(shí)看到一個(gè)顯微鏡像，能防止觀察時(shí)的疲勞。方法：一邊看目鏡，一邊移動(dòng)雙目鏡筒，讓左右的視野一致。標(biāo)識●的位置表示瞳距。請記住自己的瞳距值，以便下次觀察時(shí)調(diào)整。調(diào)整屈光度數(shù)調(diào)整觀察者左右視力。以右眼看右側(cè)的目鏡，旋轉(zhuǎn)粗微調(diào)旋轉(zhuǎn)盤，對好焦距。以左眼看左側(cè)的目鏡，旋轉(zhuǎn)屈光度調(diào)整環(huán)①，對好焦距。調(diào)整聚光鏡位置和孔徑光闌用聚光鏡上下移動(dòng)旋鈕①，將聚光鏡轉(zhuǎn)到最上面。在孔徑光闌環(huán)②上刻有物鏡倍率（10倍，100倍等），觀察時(shí)將與使用物鏡相對應(yīng)的倍率放到正面。轉(zhuǎn)換物鏡旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤①，將希望使用的物鏡（10倍、100倍）轉(zhuǎn)到標(biāo)本的上方。100倍浸油物鏡使用方法油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的觀察部位上加一滴浸油。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡進(jìn)入光路，用微調(diào)旋鈕對好焦距。如果浸油內(nèi)有氣泡，會(huì)影響觀察，可稍微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡來回通過1～2次浸油，排除油內(nèi)氣泡。顯微鏡油鏡的使用P1310×物鏡→標(biāo)本位置→滴加香柏油→100×油鏡→浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸（工作距離0.13mm）→細(xì)調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像→記錄結(jié)果→關(guān)閉電源。油鏡處理：擦鏡紙拭去香柏油→擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭→擦鏡紙擦拭油鏡。顯微鏡罩上防塵罩→橫放在實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)。★實(shí)驗(yàn)臺兩側(cè)的電源插座，只能插入一個(gè)插頭，請使用離你最近的電源插座。細(xì)菌的顯微鏡檢查法顯微鏡：光學(xué)顯微鏡目鏡：10倍物鏡：油鏡頭（90或100倍）放大倍數(shù)：10×90或100＝900或1000鏡油：香柏油或石蠟油香柏油折射率（n＝1.515），玻片折射率（n＝1.52），石蠟油（n＝1.46），空氣（n＝1.00）?！镉顽R使用完畢必須擦拭油鏡頭。油透鏡光線載玻片思考題在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,怎樣才能避免雜菌的污染?空氣的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定如何?你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明了什么問題?怎樣從醫(yī)務(wù)人員手指上分離和鑒定金黃色葡萄球菌?菌落特征主要描述哪幾方面問題？任何挑選單菌落？醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

綜合性實(shí)驗(yàn)一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測（三）空氣、手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析菌落特征觀察P11細(xì)菌純培養(yǎng)P1