基因工程的基本操作步驟(趙莉公開課)課件

基因工程的基本操作步驟（趙莉公開課）ppt1、基因工程包括哪些步驟？3、基因工程中的核心環(huán)節(jié)是哪一步？4、基因表達載體導入到受體細胞有哪些方法？5、目的基因導入受體細胞就會成功表達嗎？如何檢測和鑒定？2、什么是目的基因？獲取的方法有哪些方法？思考討論問題：銀燭秋光冷畫屏，輕羅小扇撲流螢；天階夜色涼如水，坐看牛郎織女星?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蛞?、目的基因的獲取二、基因表達載體的構建三、將目的基因導入受體細胞四、目的基因的檢測與鑒定主要是指編碼蛋白質的基因(一）目的基因

目前被廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、植物抗病基因（抗病毒、抗細菌)、人胰島素基因等。一、目的基因的獲?。ǘ┇@取目的基因的方法1、從基因文庫中直接獲取2、PCR技術擴增3、人工合成——核心二、基因表達載體的構建科學家在培育抗蟲棉時，起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質粒中，然后導入棉花的受精卵中，結果抗蟲基因在棉花體內沒有表達。資料:然后在插入抗蟲基因的質粒中插入抗蟲基因啟動子，導入棉花受精卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力?？茖W家又在有啟動子、抗蟲基因的質粒中插入抗蟲基因終止子，導入棉花受精卵，結果成長的植株，有了抗蟲能力。

編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動子啟動子：位于基因首端一段能與RNA聚合酶結合并能起始mRNA合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉錄。RNA聚合酶:能夠識別啟動子上的結合位點并與其結合的一種蛋白質.終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，它能阻礙RNA聚合酶的移動，并使其從DNA模板鏈上脫離下來，使轉錄終止。終止子編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動子終止子AGGTCACGTCGTCCAGTGCAGCRNA聚合酶AGGUCACGUCG基因表達載體的組成：b、目的基因a、啟動子c、終止子d、標記基因e、復制原點1、下列屬于獲取目的基因的方法的是①利用mRNA反轉錄形成②從基因組文庫中提?、蹚氖荏w細胞中提?、芾肞CR技術⑤利用DNA轉錄 ⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥小試牛刀2、有關基因工程的敘述中，錯誤的是A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對連接起來B、限制性內切酶用于目的基因的獲得C、目的基因須由運載體導入受體細胞D、人工合成目的基因不用限制性內切酶小試牛刀3、1997年，科學家將動物體內的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的DNA分子重組，并且在大腸桿菌中表達成功。請據右下圖回答問題。(1)此圖表示的是采取__________合成基因的方法獲取__________基因的過程。(2)圖中①DNA是以為__________________模板，形成單鏈DNA，在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得了所需要的目的基因。人工目的

控制胰島素合成的信使RNA

小試牛刀(3)圖中③代表

，它往往含

基因，以便對目的基因的檢測。重組DNA分子

標記

歡迎各位領導老師蒞臨我校再見1、從基因文庫中直接獲?。?）基因文庫的概念部分基因文庫：基因組DNA文庫：將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫含有一種生物的全部基因只包含了一種生物的部分基因，如:cDNA文庫（2）基因文庫的建立方法提取某種生物的全部DNA用適當的限制酶酶切一定大小的DNA片段將DNA片段與運載體連接導入受體菌中儲存基因組文庫方法一：直接分離法(鳥槍法)某種生物的單鏈mRNA單鏈互補DNA雙鏈cDNA片段導入受體菌中儲存與運載體連接cDNA文庫反（逆）轉錄酶DNA聚合酶方法二：反轉錄法--cDNA的合成流程圖解PCR技術—聚合酶鏈式反應PCR擴增儀DNA雙鏈復制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶）模板DNA2、利用PCR技術擴增目的基因原理：前提：原料：條件：利用PCR技術擴增目的基因5’3’G—GT—C3’5’A—GC—C5’3’引物ⅡG—G高溫變性低溫退火中溫延伸1.目的基因DNA受熱變性，解鏈；5’3’A—G

引物Ⅰ2.引物與單鏈互補結合；3.合成鏈在DNA聚合酶作用下進行延伸。蛋白質的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結構基因的核苷酸序列目的基因推測推測化學合成3、人工合成1.大葉性（肺泡性）肺炎為肺實質炎癥，通常累及肺大葉的全部或大部，并不累及支氣管。病原體現在肺泡引起炎癥，繼之導致部分或整個肺段、肺葉發(fā)生炎癥改變，致病菌多為肺炎鏈球菌。本病多見于青壯年，臨床起病急，主要癥狀為寒顫高熱、咳嗽、胸痛、呼吸困難和咳鐵銹色痰。2.小葉性（支氣管）肺炎指病原體經支氣管入侵，引起細支氣管、終末細支氣管和肺泡的炎癥。病原體有肺炎鏈球菌、葡萄球菌、病毒、肺炎支原體以及軍團菌等。常繼發(fā)于支氣管炎、支氣管擴張、上呼吸道病毒感染以及長期臥床的危重病人。3.間質性肺炎以肺間質炎癥為主，病變累及支氣管壁及其周圍組織，有肺泡壁增生及間質水腫。可由細菌、支原體、衣原體、病毒或卡氏肺囊蟲等引起。病因學分類1.細菌性肺炎如肺炎鏈球菌（即肺