輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法

1輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法WS/T775-2021新型冠狀病毒消毒效果實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)病毒滅活virusinactivation通過(guò)物理或化學(xué)方法使病毒失去感染性。電離輻射授予質(zhì)量為dm的物質(zhì)的平均能量dε除以物質(zhì)質(zhì)量dm的商。吸收劑量單位為“戈瑞”符號(hào)為Gy，1Gy=1J/kg。最低有效滅活劑量minimumeffectivedose為達(dá)到滅活病毒目的所需要的最低吸收劑量，即工藝劑量下限值。病毒滴度Virustiter單位體積液體中具有感染能力病毒的數(shù)目。TCID50（Mediantissuecultureinfectivedose）4輻照設(shè)備要求24.1技術(shù)要求使用小型電子加速器對(duì)病毒進(jìn)行滅活處理，設(shè)備要4.2使用要求a)使用單位應(yīng)取得《輻射安全許可證》或地方環(huán)保部門(mén)的行政5病毒滅活評(píng)價(jià)方法與結(jié)果判定5.1試驗(yàn)原理使用TCID50方法確定各組病毒的感染滴度，觀察不同輻照吸收劑量對(duì)病毒的滅活效果。5.2病毒感染性定量測(cè)定方法TCID50細(xì)胞體外感染法，用Behrens和Karber法計(jì)算TCID50值。5.3病毒滅活輻照劑量判定滅活試驗(yàn)結(jié)果符合以下全部條件，可判定輻照滅活病毒的有效性：a)陰性對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)正常；b)陽(yáng)性對(duì)照組病毒滴度對(duì)數(shù)值應(yīng)≥4.0；c)滅活試驗(yàn)組細(xì)胞無(wú)病變，與陰性對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)情況一致。其中滿足上述判定標(biāo)準(zhǔn)獲得的輻照劑量做小值，即為最低有效輻照滅活劑量。6類(lèi)比病毒預(yù)備試驗(yàn)6.1類(lèi)比病毒篩選對(duì)烈性病毒進(jìn)行輻照滅活試驗(yàn)時(shí)，可先選用類(lèi)比病毒進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，具體如下：a)所選類(lèi)比病毒應(yīng)和擬開(kāi)展試驗(yàn)的烈性病毒屬于同一種屬；b)所選類(lèi)比病毒應(yīng)屬于低致病性或宿主為非靈長(zhǎng)類(lèi)的病毒，可在低安全等級(jí)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展相關(guān)試驗(yàn)。6.2類(lèi)比試驗(yàn)要求a)對(duì)類(lèi)比病毒采取的輻照滅活試驗(yàn)方法、條件等應(yīng)與擬開(kāi)展試驗(yàn)的烈性病毒一致，輻照滅活劑量結(jié)果以供后續(xù)參考；b)最終結(jié)果以擬進(jìn)行輻照滅活試驗(yàn)的烈性病毒為準(zhǔn)，類(lèi)比病毒試驗(yàn)結(jié)果僅供參考。7烈性病毒輻照滅活試驗(yàn)7.1病毒載體材料3不銹鋼鋼片和聚丙烯塑料片。不銹鋼鋼片為12mm直徑圓形片(厚0.5mm)，聚丙烯塑料片為10mm7.2操作步驟a)病毒載體的制備:取滅菌載體片，滴染病毒晾干備用。b)滅活試驗(yàn):取病毒載體置于細(xì)胞培養(yǎng)板中，并進(jìn)行密封處理，再放入小型輻照儀器內(nèi)腔中，設(shè)置輻照劑量后，作用至規(guī)定的時(shí)間取出，放入1mL維持培養(yǎng)基中，作用10min,混勻洗脫。c)對(duì)照組試驗(yàn):陽(yáng)性對(duì)照組為病毒對(duì)照組，觀察病毒生長(zhǎng)是否良好，病毒滴度是否達(dá)到試驗(yàn)要求；陰性對(duì)照組用維持培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，觀察有無(wú)污染，細(xì)胞生長(zhǎng)是否良好。d)以上各組按照終點(diǎn)稀釋法分別進(jìn)行病毒滴度測(cè)定。試驗(yàn)重復(fù)3次。e)根據(jù)5.2測(cè)定方法和5.3判定標(biāo)準(zhǔn)，確定2種載體下最低有效滅活劑量，最后取兩者較大者為試驗(yàn)滅活劑量。具體參照《新型冠狀病毒消毒效果實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》中載體制備和載體法滅活試驗(yàn)。4（規(guī)范性附錄）輻照設(shè)備劑量標(biāo)定方法三、測(cè)試步驟:3、在托盤(pán)上標(biāo)注數(shù)個(gè)測(cè)量點(diǎn)。測(cè)量點(diǎn)要求以托盤(pán)正中心為中間點(diǎn)，紙張長(zhǎng)方向的對(duì)稱(chēng)軸（穿過(guò)中4、劑量片標(biāo)注位置標(biāo)注好后將劑量片放置于點(diǎn)的正中。如下55、劑量片放置好后需要對(duì)其進(jìn)行固定（設(shè)備在輻照時(shí)設(shè)備會(huì)