輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法

1輻照法滅活烈性病毒劑量確定方法WS/T775-2021新型冠狀病毒消毒效果實驗室評價標準病毒滅活virusinactivation通過物理或化學(xué)方法使病毒失去感染性。電離輻射授予質(zhì)量為dm的物質(zhì)的平均能量dε除以物質(zhì)質(zhì)量dm的商。吸收劑量單位為“戈瑞”符號為Gy，1Gy=1J/kg。最低有效滅活劑量minimumeffectivedose為達到滅活病毒目的所需要的最低吸收劑量，即工藝劑量下限值。病毒滴度Virustiter單位體積液體中具有感染能力病毒的數(shù)目。TCID50（Mediantissuecultureinfectivedose）4輻照設(shè)備要求24.1技術(shù)要求使用小型電子加速器對病毒進行滅活處理，設(shè)備要4.2使用要求a)使用單位應(yīng)取得《輻射安全許可證》或地方環(huán)保部門的行政5病毒滅活評價方法與結(jié)果判定5.1試驗原理使用TCID50方法確定各組病毒的感染滴度，觀察不同輻照吸收劑量對病毒的滅活效果。5.2病毒感染性定量測定方法TCID50細胞體外感染法，用Behrens和Karber法計算TCID50值。5.3病毒滅活輻照劑量判定滅活試驗結(jié)果符合以下全部條件，可判定輻照滅活病毒的有效性：a)陰性對照組細胞生長正常；b)陽性對照組病毒滴度對數(shù)值應(yīng)≥4.0；c)滅活試驗組細胞無病變，與陰性對照組細胞生長情況一致。其中滿足上述判定標準獲得的輻照劑量做小值，即為最低有效輻照滅活劑量。6類比病毒預(yù)備試驗6.1類比病毒篩選對烈性病毒進行輻照滅活試驗時，可先選用類比病毒進行預(yù)實驗，具體如下：a)所選類比病毒應(yīng)和擬開展試驗的烈性病毒屬于同一種屬；b)所選類比病毒應(yīng)屬于低致病性或宿主為非靈長類的病毒，可在低安全等級實驗室開展相關(guān)試驗。6.2類比試驗要求a)對類比病毒采取的輻照滅活試驗方法、條件等應(yīng)與擬開展試驗的烈性病毒一致，輻照滅活劑量結(jié)果以供后續(xù)參考；b)最終結(jié)果以擬進行輻照滅活試驗的烈性病毒為準，類比病毒試驗結(jié)果僅供參考。7烈性病毒輻照滅活試驗7.1病毒載體材料3不銹鋼鋼片和聚丙烯塑料片。不銹鋼鋼片為12mm直徑圓形片(厚0.5mm)，聚丙烯塑料片為10mm7.2操作步驟a)病毒載體的制備:取滅菌載體片，滴染病毒晾干備用。b)滅活試驗:取病毒載體置于細胞培養(yǎng)板中，并進行密封處理，再放入小型輻照儀器內(nèi)腔中，設(shè)置輻照劑量后，作用至規(guī)定的時間取出，放入1mL維持培養(yǎng)基中，作用10min,混勻洗脫。c)對照組試驗:陽性對照組為病毒對照組，觀察病毒生長是否良好，病毒滴度是否達到試驗要求；陰性對照組用維持培養(yǎng)基作為陰性對照，觀察有無污染，細胞生長是否良好。d)以上各組按照終點稀釋法分別進行病毒滴度測定。試驗重復(fù)3次。e)根據(jù)5.2測定方法和5.3判定標準，確定2種載體下最低有效滅活劑量，最后取兩者較大者為試驗滅活劑量。具體參照《新型冠狀病毒消毒效果實驗室評價標準》中載體制備和載體法滅活試驗。4（規(guī)范性附錄）輻照設(shè)備劑量標定方法三、測試步驟:3、在托盤上標注數(shù)個測量點。測量點要求以托盤正中心為中間點，紙張長方向的對稱軸（穿過中4、劑量片標注位置標注好后將劑量片放置于點的正中。如下55、劑量片放置好后需要對其進行固定（設(shè)備在輻照時設(shè)備會