磁珠法-核酸提取新篇章課件

磁珠法—核酸提取的新篇章洛陽(yáng)惠爾納米科技狄光輝

核酸提取方法進(jìn)展核酸抽提是下游核酸檢測(cè)、研究或產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的起點(diǎn)，所別離的核酸的質(zhì)量和完整性直接影響研究或診斷結(jié)果，因此核酸抽提是分子生物學(xué)最關(guān)鍵的方法之一。成功的核酸別離純化需要四個(gè)重要步驟：組織或細(xì)胞的破碎和裂解，核蛋白復(fù)合體的變性，核酸酶的滅活以及污染物的去除。傳統(tǒng)核酸提取方法酚--氯仿抽提法堿抽提法CTAB抽提法纖維素膜層析法核酸固相抽提法市場(chǎng)上大多數(shù)商業(yè)核酸抽提試劑盒采用固相抽提法。相對(duì)于傳統(tǒng)方法，固相抽提更快速和高效。它解決了許多液--液抽提存在的諸多問(wèn)題，如別離不完全等。固相抽提方法的支持物主要有硅膠、玻璃顆粒、陰離子交換樹(shù)脂、磁性顆粒。固相抽提包括細(xì)胞裂解、核酸吸附、漂洗和洗脫四個(gè)關(guān)鍵性的步驟。提取原理首先，基于堿裂解法使細(xì)胞膜破裂，以及組蛋白變性，釋放核酸。然后，將經(jīng)裂解液處理的樣本轉(zhuǎn)移到固相支持物上，在結(jié)合液的幫助下靶核酸被吸附到支持物上。蛋白質(zhì)等其他化合物也可與支持物外表發(fā)生結(jié)合，但通過(guò)目的性洗滌過(guò)程可以被除掉。最后，以TE緩沖液或蒸餾水將純潔的靶核酸從支持物上釋放下來(lái)。離心柱法提取DNA集液管純化柱硅膠濾膜磁珠法提取DNA裂解使核酸游離出來(lái)結(jié)合參加磁珠，使核酸與其結(jié)合洗滌洗去殘留雜質(zhì)洗脫將核酸從磁珠中別離出到溶液純化別離磁珠，得到高純度核酸溶液比較〔以全血為例〕樣本量洗脫液量OD260/280濃度離心柱法200-400μl100μl1.7-1.93-10μl磁珠法150-200μl100μl1.7-1.930-70μl離心柱法產(chǎn)品效果圖磁珠法產(chǎn)品效果圖離心柱法磁珠法適用范圍新鮮血液或經(jīng)抗凝劑（EDTA、檸檬酸）處理后的冷凍血液同前操作環(huán)境室溫環(huán)境進(jìn)行室溫環(huán)境進(jìn)行裂解原理堿裂解法改良的堿裂解法吸附核酸硅膠濾膜包被活性基團(tuán)的磁珠離心需多次離心不需離心，依靠磁分離純度較高，可直接用于PCR、酶切、Sourthen等下游實(shí)驗(yàn)較高，可直接用于PCR、酶切、Sourthen等下游實(shí)驗(yàn)產(chǎn)量較低較高自動(dòng)化抽提不能進(jìn)行自動(dòng)化提取能夠和核酸自動(dòng)提取儀配合實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化提取用時(shí)50-60min30-40min價(jià)格較低略高主要廠家羅氏，百泰克，天根，生工Thermo，羅氏，ABI，gene-mag，惠爾核酸自動(dòng)化抽提系統(tǒng)自動(dòng)化抽提系統(tǒng)是可高通量地處理樣品、有助于簡(jiǎn)化別離步驟的一種大型、復(fù)雜的儀器操作系統(tǒng)。自動(dòng)化提取的優(yōu)點(diǎn)有：減少人為工作時(shí)間，降低人力本錢、增加工作者的平安性以及提高結(jié)果的可重復(fù)性和質(zhì)量。核酸自動(dòng)提取儀磁棒深孔板123456789101112ABCDEFGH裂解洗滌液Ⅰ洗滌液Ⅱ洗滌液Ⅱ磁珠洗脫裂解洗滌液Ⅰ洗滌液Ⅱ洗滌液Ⅱ磁珠洗脫磁珠法核酸提取的核心是生物磁珠，是一種新型的功能化固體載體，其外表包被有活性基團(tuán)，可與多種生物活性物質(zhì)發(fā)生偶聯(lián)，兼具有液體的流動(dòng)性和固體磁性材料等特點(diǎn)。生物磁珠的介紹1硅基磁珠1、一種是針對(duì)含有常規(guī)量核酸的樣本進(jìn)行提取。如動(dòng)植物、種子、細(xì)菌、質(zhì)粒等；2、一種是針對(duì)含有痕量核酸的樣本進(jìn)行提取。如血清病毒游離、法醫(yī)樣本等。此產(chǎn)品主要應(yīng)用于核酸提取2氨基磁珠經(jīng)活化以后，可以偶聯(lián)上抗體，作為免疫磁珠使用。免疫檢測(cè)、免疫診斷3羧基磁珠經(jīng)活化后，可以偶聯(lián)上抗體，作為免疫磁珠使用。免疫檢測(cè)、免疫診斷生物磁珠按功能集團(tuán)分類及應(yīng)用領(lǐng)域Fe3O4磁性微球硅基磁珠SiO2包被氨基/羧基包被氨基/羧基磁珠Fe3O4磁性微球硅基〔硅羥基〕氨基/羧基生物磁珠的制備方法植物、動(dòng)物基因組DNA及細(xì)菌質(zhì)粒提取試劑盒磁珠法DNA提取試劑盒的介紹應(yīng)用：和中科院植物研究所合作，提取百年以上植物的DNA，用于后續(xù)的分型及特定位點(diǎn)的分析可用于海關(guān)、畜牧檢驗(yàn)，檢測(cè)進(jìn)出口肉制品或者家禽是否攜帶病毒提取質(zhì)粒，用作基因工程的常用載體全血試劑盒病毒試劑盒能夠從血清、血漿等多種病毒樣品中〔如HBV、HPV、HCV〕，高效提取和別離病毒總DNA或RNA，也可適用于組織細(xì)胞或分泌物樣本中的病毒總核酸，提取產(chǎn)物可以直接用于下游應(yīng)用，如熒光定量PCR或定量逆轉(zhuǎn)錄PCR等。1.生物磁珠具有小尺寸效應(yīng)和外表效應(yīng)，可高效核酸提取，滿足微量生物樣本核酸提取的要求。2.不使用酚、氯仿、異戊醇等有毒試劑，平安無(wú)毒，綠色環(huán)保。3.生物磁珠能夠通過(guò)