干式生化分析儀校準規(guī)范

JJF2036—20231干式生化分析儀校準規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于以反射光度法和差示電位法為定量原理的干式生化分析儀的校準。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:YY/T0655—2008干式化學(xué)分析儀凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術(shù)語YY/T0655—2008界定的及以下術(shù)語和定義適用于本規(guī)范。3.1干式生化drybiochemistry將液態(tài)樣品置于含有試劑的固相載體上發(fā)生生化反應(yīng),依照反應(yīng)結(jié)果定量測定樣品中特定成分的濃度或活度的方法。3.2終點法end-pointassay通過測定酶促反應(yīng)(化學(xué)反應(yīng))開始到反應(yīng)達到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總的變化量,以計算酶活力(待測物)的方法。注:又稱平衡法,如GLU、TB、DB、TP、ALB、TBA、UA、CHO、TG、HDL等的測定。3.3差示電位法differentialpotentiometry基于傳統(tǒng)濕化學(xué)分析的離子選擇性電極原理,利用測定電極電位與被測物質(zhì)離子濃度的關(guān)系求得被測物質(zhì)含量的方法。注:如K+、Na+和Cl-等的測定。3.4速率法rateassay指連續(xù)測定(每15s~1min測量一次)酶促反應(yīng)過程中某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物的濃度隨時間的變化來計算酶促反應(yīng)速度的方法。注:又稱連續(xù)監(jiān)測法,如ALT、AST、LD、ALP、GGT、AMY和CK等的測定。4概述干式生化分析儀(以下簡稱分析儀)是一種專門使用固相載體試劑進行臨床生化檢驗的分析儀,它通過反射光度法、差示電位法等方法準確測定樣品中特定成分的濃度或活度。其中反射光度法(包括終點法和速率法)的顯色反應(yīng)發(fā)生在固相載體,對透射光和反射光均有明顯的散射作用,不遵從朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律,并且固相反應(yīng)膜的上下界面之間存在多重內(nèi)反射,使用庫貝卡-芒克(Kubelka-Munk)理論,或以威廉姆斯-克拉珀(Williams-Clapper)方程予以修正;差示電位法使用固態(tài)離子選擇性JJF2036—20232電極,以離子-電子轉(zhuǎn)換層(即固體接觸層)替代了內(nèi)參比電極及內(nèi)充液,并在其上涂覆聚合物敏感膜,在熱力學(xué)平衡條件下,離子選擇性電極電位與待測溶液中的目標離子活度的關(guān)系符合能斯特(Nernst)方程。分析儀按照檢測項目多少分為單項、雙項、三項、四項和多項分析儀。5計量特性分析儀各項計量特性指標見表1。表1分析儀的主要計量特性指標計量特性計量特性指標①示值誤差GLU±10%K+±6%ALT②±20%重復(fù)性GLU5mmol/L~22mmol/L≤5.0%K+2mmol/L~8mmol/L≤2.0%ALT40U/L~60U/L≤12%100U/L~300U/L≤5.0%線性GLU2mmol/L~25mmol/Lr≥0.975K+2mmol/L~12mmol/Lr≥0.975ALT10U/L~800U/Lr≥0.975①其中GLU、K+、ALT分別針對的是終點法、差示電位法和速率法。②計算時應(yīng)確認固相載體試劑是否含有磷酸吡哆醛(P5P)。注:以上技術(shù)指標不用于合格判別,僅供參考。r為線性相關(guān)系數(shù)。6校準條件6.1環(huán)境條件6.1.1環(huán)境溫度:(15~30)℃;6.1.2相對濕度:≤85%。注:上述條件與制造商的產(chǎn)品規(guī)定不一致時,以產(chǎn)品規(guī)定為準。6.2校準用標準物質(zhì)和試劑樣品6.2.1標準物質(zhì)質(zhì)(4.0%(k=2);K+標準物質(zhì),Ur≤2.5%(k=2);ALT標詳見附錄B標準溶液配置方法。6.2.3試劑樣品校準過程中需要的配套體外診斷試劑、質(zhì)控品和校準品,應(yīng)按照說明書要求的條件JJF2036—20233(3)進行儲存并在有效期內(nèi)使用。(3)7校準項目和校準方法分析儀在正常工作條件下按常規(guī)測試程序先行自校準。7.1示值誤差(1)用分析儀對標準物質(zhì)連續(xù)測定3次,按公式(1)計算相對示值誤差。B=(M-T)/T×100%(1)式中:B—相對示值誤差,%;M—標準物質(zhì)3次測量結(jié)果的平均值;T—標準物質(zhì)標準值。7.2重復(fù)性用分析儀對標準物質(zhì)重復(fù)測量6次,并根據(jù)公式(2)計算相對標準偏差RSD作為重復(fù)性的表征?！罵SD=×式中:RSD—相對標準偏差,%;(xi-x)2i=1n-1×100%(2)xi—第i次標準物質(zhì)的測量值;x—測量平均值;7.3線測量次數(shù),n=6。選用接近測量范圍上下限的標準溶液至少5個濃度,然后將樣品依次分別測定3次,取其平均值作為測量值,各被分析項目均得到一組不同濃度的測量值(yi)。在各被分析項目不同濃度的測量值(yi)和其對應(yīng)的不同濃度的標準值(xi)之間,按公式(3)計算線性相關(guān)系數(shù)(r)作為線性的表征。r=式中:r—線性相關(guān)系數(shù);(xi-x)(yi-y)i=12ii=1(x-x2ii=12ii=1(y-2ii=1xi—被分析項目各個濃度水平標準溶液的標準值;x—被分析項目各個濃度水平標準溶液的標準值的平均值;yi—被分析項目各個濃度水平標準溶液的測量值;y—被分析項目各個濃度水平標準溶液的測量值的平均值。JJF2036—20234n—被分析項目濃度水平的個數(shù)。8校準結(jié)果表達8.1校準結(jié)果處理經(jīng)校準后的分析儀應(yīng)核發(fā)校準證書,校準證書應(yīng)符合JJF1071—2010中5.12的要求,并給出各校準項目名稱和測量結(jié)果以及擴展不確定度。校準原始記錄格式(推薦性表格)見附錄C,校準證書內(nèi)頁格式(推薦性表格)見附錄D。8.2校準結(jié)果的測量不確定度分析儀校準結(jié)果的測量不確定度按JJF1059.1—2012的要求評定,校準結(jié)果測量不確定度評定示例見附錄E。9復(fù)校時間間隔由于復(fù)校時間間隔的長短是由分析儀的使用情況、使用者、分析儀本身質(zhì)量等諸因素所決定的,因此送校單位可根據(jù)實際使用情況自主決定復(fù)校時間間隔,復(fù)校時間間隔建議不超過1年。JJF2036—20235附錄A縮略語以下縮略語適用于本規(guī)范。GLU:葡萄糖(glucose)TB:總膽紅素(totalbilirubin)DB:直接膽紅素(directbilirubin)TP:總蛋白(totalprotein)ALB:白蛋白(albumin)TBA:總膽汁酸(totalbileacid)UA:尿酸(uricacid)CHO:膽固醇(cholesterol)TG:甘油三酯(triglyceride)HDL:高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein)K+:鉀離子(potassiumion)Na+:鈉離子(sodiumion)Cl-:氯離子(chlorideion)ALT:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase)AST:天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase)LD:乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase)ALP:堿性磷酸酶(alkalinephosphatase)GGT:γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(gamma-glutamyltransferase)AMY:淀粉酶(amylase)CK:肌酸激酶(creatinekinase)JJF2036—20236附錄B標準溶液的配制方法依據(jù)美國臨床實驗室標準化協(xié)會(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI)發(fā)布的EP06-AEvaluationoftheLinearityofQuantitativeMeasurementProce-dures:AStatisticalApproach;ApprovedGuideline文件的線性評估方法,采用混合樣品法配制標準溶液。選取低值、高值標準物質(zhì)各1份,按4∶0、3∶1、2∶2、1∶3、0∶4比例混合得5個不同濃度的標準溶液。配制設(shè)備使用經(jīng)過計量校準的可調(diào)移液器。標準溶液混合樣品的配制值(c)的預(yù)期值按照公式(B.1)進行計算,公式中n、m分別代表高值(H)和低值(L)樣品的份數(shù)。c=n×H+m×Ln+m(B.1)JJF2036—20237附錄C校準原始記錄格式(推薦性表格)分析儀名稱型號規(guī)格制造廠商出廠編號委托單位地址溫度濕度記錄編號校準日期校準員核驗員一、相對示值誤差測定項目標準值測量值平均值示值誤差GLU(mmol/L)K+(mmol/L)ALT(U/L)二、測量重復(fù)性測量項目測量值RSD/%GLU(mmol/L)K+(mmol/L)ALT(U/L)JJF2036—20238測量項目標準值測量值平均值線性相關(guān)系數(shù)GLU(mmol/L)K+(mmol/L)ALT(U/L)JJF2036—20239附錄D校準證書(內(nèi)頁)格式(推薦性表格)校準項目標準值校準結(jié)果GLUK+ALT示值誤差擴展不確定度(k=2)重復(fù)性線性標準值測量值平均值線性相關(guān)系數(shù)校準員:核驗員:JJF2036—202310附錄E測量不確定度評定示例E.1測量方法分析儀在正常工作條件下按常規(guī)測試程序先行自校準,然后用分析儀對標準物質(zhì)連續(xù)測定3次,按公式(E.1)計算相對示值誤差。E.2測量模型B=(M-T)/T×100%(E.1)式中:B—相對示值誤差,%;M—標準物質(zhì)3次測量結(jié)果的平均值;T—標準物質(zhì)標準值。E.3合成標準不確定度計算公式依據(jù)不確定度傳播律,當(dāng)各不確定度間不相關(guān)時,u=c2(xi)u2(xi),則uc=(E.2)由公式(E.1)得cM==cT==-E.4不確定度來源不確定度來源包括:a)輸入量M引入的標準不確定度uMGLU、uMK+、uMALT,包括測量重復(fù)性引入的標準不確定度uM1GLU、uM1K+、uM1ALT和分辨力引入的標準不確定度uM2GLU、uM2K+、uM2ALT;b)輸入量T引入的標準不確定度uTGLU、uTK+、uTALT,主要是標準物質(zhì)引入的標準不確定度。E.5不確定度分量評定E.5.1輸入量M引入的標準不確定度uMGLU、uMK+、uMALT評定E.5.1.1測量重復(fù)性引入的標準不確定度uM1GLU、uM1K+、uM1ALT選定一臺分析儀,使用GLU標準物質(zhì)、電解質(zhì)標準物質(zhì)和ALT標準物質(zhì)分別對GLU、K+和ALT參數(shù)連續(xù)測量10次,測量結(jié)果見表E.1。表E.1GLU、K+和ALT測量結(jié)果測量項目測量值(Mi)GLU(mmol/L)6.856.946.827.126.776.976.886.946.927.00K+(mmol/L)4.404.414.524.574.424.384.424.364.534.49ALT(U/L)46.344.745.546.947.445.247.946.645.045.7JJF2036—202311則單次測量結(jié)果的標準差s(MGLU)、s(MK+)和s(MALT)如下:s(MGLU)=≈0.099mmol/Ls(MK+)=≈0.072mmol/L s(MALT)=≈1.073U/L實際測試時在重復(fù)性條件下連續(xù)測量3次,以3次測量的算術(shù)平均值作為結(jié)果,則由測量重復(fù)性引入的標準不確定度為:uM1GLU=s(MGLU)/≈0.057mmol/LuM1K+=s(MK+)/≈0.041mmol/LuM1ALT=s(MALT)/≈0.619U/LE.5.1.2分辨力引入的標準不確定度uM2GLU、uM2K+、uM2ALTALT0//包含因子k=3,由此引入的標準不確定度分量為:uM2GLU=mmol/L≈0.0029mmol/LuM2K+=mmol/L≈0.0029mmol/LuM2ALT=U/L≈0.029U/LE.5.2輸入量T引入的標準不確定度uTGLU、uTK+、uTALT評定輸入量T引入的標準不確定度主要是標準物質(zhì)引入的標準不確定度,本次評定使用冰凍人血清中葡萄糖標準物質(zhì)GBW(E)090545、人血清無機成分電解質(zhì)標準物質(zhì)GBW(E)090795和人血清基質(zhì)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性濃度標準物質(zhì)GBW(E)(k=2),ALT:U=1.3U/L(k=2)(含P5P),則以上引入的標準不確定度為:uTGLU=mmol/L(k=2),ALT:U=1.3U/L(k=2)(含P5P),則以上引入的標準不確定度為:uTGLU=mmol/L=0.085mmol/LuTK+=mmol/L=0.055mmol/LuTALT=U/L=0.65U/LE.5.3靈敏系數(shù)的計算通過表E.1進行計算和查看標準物質(zhì)證書可知,MGLU:6.92mmol/L,TGLU:7.02mmol/L;MK+:4.45mmol/L,TK+:4.41mmol/L;MALT:46.1U/L,TALT:52.3U/L(含P5P)。通過代入對應(yīng)的平均值和標準值,則靈敏系數(shù)的計算結(jié)果如下:JJF2036—202312cMGLU===(mmol/L)-1≈0.1425(mmol/L)-1cTGLU==-cMK+===-6.927.022(mmol/L)-1≈-0.=-6.927.022=(mmol/L)-1≈0.2268(mmol/L)-1=cTK+==-=-(mmol/L)-1≈-0.2288(mmol/L)-1cMALT===(U/L)-1≈0.0191(U/L)-1cTALT=LT=-=-.2(U/L)-1≈-0.0169(U/L)-1E.6標準不確定度一覽表標準不確定度一覽表見表E.2。表E.2分析儀GLU、K+和ALT測量結(jié)果標準不確定度一覽表被測量不確定度來源標準不確定靈敏系數(shù)輸出量的標準不確定度GLU輸入量M測量重復(fù)性0.057mmol/L0.1425(mmol/L)-10.0081225分辨力0.0029mmol/L0.00041325輸入量T標準物質(zhì)0.085mmol/L-0.1404(mmol/L)-10.011934K+輸入量M測量重復(fù)性0.041mmol/L0.2268(mmol/L)-10.0092988分辨力0.0029mmol/L0.00065772輸入量T標準物質(zhì)0.055mmol/L-0.2288(mmol/L)-10.012584ALT輸入量M測量重復(fù)性0.619U/L0.0191(U/L)-10.0118229分辨力0.029U/L0.0005539輸入量T標準物質(zhì)0.65U/L-0.0169(U/L)-10.010985E.7合成標準不確定度由于uM1GLU、uM2GLU和uTGLU,uM1K+、uM2K+和uTK+以及uM1ALT、uM2ALT和uTALT互不相關(guān),則由公式(E.2)可得合成標準不確定度ucGLU、ucK+、ucALT為:ucGLU=×100%=1.44% ucK+=×100%=1.57% ucALT=×100%=1.62%E.8擴展不確定度取包含因子k=2,則擴展不確定度UG