結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷課件

結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷主要內(nèi)容結(jié)核病的流行情況1結(jié)核病的病原學(xué)32結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷3結(jié)核病的分子藥敏341.結(jié)核病的流行概況全球范圍內(nèi)結(jié)核病疫情急劇惡化人口大規(guī)模流動(dòng)結(jié)核菌耐藥現(xiàn)象益發(fā)嚴(yán)重結(jié)核病合并艾滋病感染我國是世界上僅低于印度的第二結(jié)核病大國結(jié)核菌感染率44.5%新發(fā)活動(dòng)性結(jié)核患者130萬/年死亡13萬/年2021WHOtuberculosiscontrolreport我國是全球27個(gè)耐藥結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一2021年世界衛(wèi)生組織宣布全球耐多藥結(jié)核病緊急狀態(tài)全球的結(jié)核病患者,在接受治療之前已經(jīng)傳染給了別人！??！早期快速診斷與治療成為制約結(jié)核病控制的關(guān)鍵：有細(xì)菌學(xué)診斷依據(jù)的病人不超過50%當(dāng)前結(jié)核研究的熱點(diǎn)7/45近期結(jié)核病診斷方法的相關(guān)研究JID2021:205(Suppl2),S147.2.結(jié)核病的病原學(xué)

結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)是引起人類結(jié)核病的主要病原體。1882年由德國醫(yī)生Koch發(fā)現(xiàn)。結(jié)核分枝桿菌屬于厚壁門、裂殖菌綱、放線菌目、分枝桿菌科、分枝桿菌屬。分枝桿菌復(fù)合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型結(jié)核分枝桿菌是人類主要的致病菌。2024/1/15GDTB8結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)生物學(xué)主要特點(diǎn)：1.細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)2.引起的疾病都呈慢性，并伴肉芽腫3.抗酸染色陽性生長特點(diǎn)：生長緩慢，繁殖一代在人工培養(yǎng)基內(nèi)約需要15～20小時(shí)，在靜脈感染未經(jīng)免疫小鼠肺中約需要15小時(shí)，在巨噬細(xì)胞內(nèi)約需要15～20小時(shí)，在家兔角膜中約需要20～22小時(shí)。實(shí)驗(yàn)室檢查方法的歷史1880s Tuberclebacilli的發(fā)現(xiàn) Ziehl-Neelsen染色方法1900s Mantouxtest(TSTwithtuberculin)1920s Petragnanimedium PurifiedProteinDerivative〔PPD〕1930s Lewenstein-Jensen培養(yǎng)基1940s Dubosagar,Ogawa培養(yǎng)基1950s Middlebrook7H91990s NAAT2000s ELISPOT,QuantiFERON,2021s LPA,GeneXpert2021s???3.結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)菌學(xué)涂片：敏感性低傳統(tǒng)固體培養(yǎng)：所需時(shí)間長，2~3月分子生物學(xué)TB-DNATB-mRNA血清/免疫學(xué)IGRA：有望替代TST，但不能區(qū)分活動(dòng)性TB與潛伏感染血清學(xué)：存在抗原純度和特異性差等方面的問題液體培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)：平均時(shí)間20天①.細(xì)菌學(xué)診斷萋尼氏染色熒光染色羅氏培養(yǎng)/藥敏試驗(yàn)快培/藥敏試驗(yàn)涂片?枯燥?固定初染脫色復(fù)染顯微鏡檢查登記/報(bào)告顯微鏡檢查堿性復(fù)紅鹽酸酒精亞甲蘭鹽酸酒精高錳酸鉀光學(xué)顯微鏡檢查熒光顯微鏡檢查萋尼氏染色鏡下形態(tài)熒光染色鏡下形態(tài)LEDFluorescencemicroscopy

LED熒光顯微鏡LED熒光顯微鏡本錢低廉的超亮發(fā)光二極管可承受的價(jià)格，價(jià)格接近于現(xiàn)有的光學(xué)顯微鏡壽命長〔~15-20,000小時(shí)〕省電可用電池供能可靠性更強(qiáng)不需要空調(diào)設(shè)施不需要暗室診斷性能優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)熒光顯微鏡操作人員工作負(fù)荷減輕普通熒光顯微鏡和發(fā)光二極管熒光顯微鏡性能比較〔不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果進(jìn)行匯總與平均〕顯微鏡方法靈敏度(%)特異度(%)普通熒光顯微鏡直接涂片67.496.1普通熒光顯微鏡濃集涂片66.699.2發(fā)光二極管熒光顯微鏡直接涂片71.6(p=0.1025)96.4發(fā)光二極管熒光顯微鏡濃集涂片72.4(p=0.0073)98.8

Bactec?MGIT960/320Bact/Alert3DVERSATREK生產(chǎn)廠家美國BD公司法國生物梅里埃公司美國Trek診斷公司儀器定位專業(yè)分枝桿菌檢測系統(tǒng)業(yè)內(nèi)金標(biāo)準(zhǔn)普通細(xì)菌血培養(yǎng)系統(tǒng)需加裝分枝桿菌培養(yǎng)特殊組件普通細(xì)菌血培養(yǎng)系統(tǒng)需加裝分枝桿菌培養(yǎng)特殊組件單機(jī)容量960個(gè)檢測位每年可至少檢測8000個(gè)樣本240個(gè)瓶位每年可檢測2000個(gè)樣本528個(gè)瓶位日均標(biāo)本處理量25~30個(gè)6~7個(gè)9個(gè)檢測原理熒光增強(qiáng)法：采用敏感性較強(qiáng)的熒光信號(hào)探測氧氣的變化情況，只需單一反應(yīng)，所以速度快，準(zhǔn)確性高PH值比色法：當(dāng)培養(yǎng)瓶內(nèi)有微生物生長，其釋放出的CO2，經(jīng)水飽和后，產(chǎn)生H+，使PH值產(chǎn)生變化，感應(yīng)器的顏色也隨之變化。需雙重反應(yīng)，因此速度較慢，假陽性率較高，此技術(shù)已趨向淘汰壓力檢測：檢測細(xì)菌生長中各種氣體產(chǎn)生和消耗而引起的瓶內(nèi)壓力的變化。靈敏度差。此技術(shù)已趨向淘汰檢測技術(shù)瓶外檢測技術(shù)瓶外檢測技術(shù)瓶內(nèi)檢測技術(shù)易導(dǎo)致污染及生物安全問題平均陽性報(bào)告時(shí)間8－11天15－21天不詳藥敏試劑5種一線抗TB藥物，全部具有FDA及SFDA認(rèn)證無藥敏試劑提供只有3種一線藥物培養(yǎng)/藥敏試驗(yàn)陰性培養(yǎng)陽性培養(yǎng)無或微弱熒光FFFO2FO2FO2FO2FO2FFO2FO2CO2O2O2O2O2O2O2O2O2CO2CO2O2FFFFFO2FO2FFFFCO2O2O2O2O2O2強(qiáng)熒光傳感器對(duì)氧氣高度敏感的釕復(fù)合物肉湯改良Middlebrook7H9肉湯上部空間已預(yù)先充填10%CO2BACTEC?MGIT?960/320

指示器系統(tǒng)MGIT/3D制造的液體培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)比固體培養(yǎng)快(平均10-12天vs.20-24天)比固體培養(yǎng)基更敏感可以自動(dòng)判讀，或使用標(biāo)準(zhǔn)指示管和操作手冊(cè)進(jìn)行判讀也加快了藥敏試驗(yàn)的速度局限需要NALC-NaOH進(jìn)行痰處理和離心普通菌群的污染很常見比固體培養(yǎng)更經(jīng)常地檢出非結(jié)核分枝桿菌〔常常不致病〕確定診斷前必須對(duì)所有的陽性培養(yǎng)物進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的鑒定比固體培養(yǎng)基昂貴②血清學(xué)診斷WHO對(duì)來自不同國家的19種試劑盒產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果說明：與痰培養(yǎng)相比，這些試劑盒檢測的靈敏度為1%~60%，特異度為53~99%1。原因：由于所用的測定方法、使用的試劑種類或抗原、抗體的不同等，導(dǎo)致測定結(jié)果差異較大，并且缺乏可比性。WHO認(rèn)為現(xiàn)有的血清學(xué)診斷試劑的敏感度和特異度都有待進(jìn)一步提高，不推薦其作為一種快速診斷的方法在臨床使用。1WHOWorldHealthOrganization.DiagnosisevaluationseriesNo.2:laboratory-basedevalutionof19commerciallyavailablerapiddiagnostictestsfortuberculosis.2021.WHO對(duì)結(jié)核抗體評(píng)估2021年WHO正式公告：由于目前的商業(yè)血清學(xué)試劑在結(jié)核檢測中存在較大差異，且檢測結(jié)果很高比例的假陽性和假陰性，因此不建議使用血清學(xué)方法作為結(jié)核桿菌的診斷實(shí)驗(yàn)1。1WHOCommercialSerodiagnosticTestsforDiagnosisofTuberculosis.不能早期診斷！容易漏診、誤診！血清學(xué)檢測的評(píng)價(jià)結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞再次受到結(jié)核抗原刺激時(shí)會(huì)分泌多種細(xì)胞因子〔IFN-γ〕。因此，檢測效應(yīng)T淋巴細(xì)胞可用于結(jié)核病或結(jié)核潛伏感染者的診斷。由于效應(yīng)T細(xì)胞存活時(shí)間很短，而且具有特異性，因此可以作為機(jī)體是否正處于被感染的指標(biāo)，無論是否有臨床病癥?；贗GRA原理的產(chǎn)品目前已被美國、加拿大、英國、德國、意大利、瑞士、法國、荷蘭、日本等二十余個(gè)國家寫入本國的結(jié)核診療指南中。目前應(yīng)用的進(jìn)口IGRA主要有兩種商品化的試劑：1〕澳大利亞Cellestis公司的QuantiFERON-TBGOLDInTube〔QFT-GIT〕2〕英國OxfordImmunotec公司的T-SPOT.TB蛋白水平分子診斷:γ-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)〔IGRA)γ-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)〔IGRA〕γ

干擾素檢測陰性γ干擾素檢測陽性TB抗原多肽T細(xì)胞活化T細(xì)胞γ干擾素T-SPOT?.TB原理結(jié)核桿菌特異抗原由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白所有的卡介苗〔BCG〕均喪失該基因序列絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌也不存在RD1區(qū)ESAT-6與CFP-10抗原結(jié)核桿菌特異抗原蘇氏?？八_斯戈登牛非洲T-SPOT?.TB臨床性能指標(biāo)特異性只針對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群敏感，與絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗〔BCG〕無交叉反響美國FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306)國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508)靈敏度根本不受免疫力低下/受抑制影響，在肺外結(jié)核患者中有很高的檢出率美國FDA數(shù)據(jù)：靈敏度95.6%(175/183)國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：靈敏度95.3%(624/655)靈敏度ReferenceSensitivityJafarietal2006AJRCCM174;9:1048-53100.0%(12/12)FerraraetalLancet2006376;1328-34*83.3%(20/24)LeeetalEurRespirJ200628;24-30*96.6%(84/87)GolettietalClinMicrobiolInfect200612;6:544-50*91.3%(21/23)MeieretalEJCMID200524;529-53695.9%(70/73)KangetalChest.2007Sep;132(3):959-65*92.2%(59/64)JanssensetalERJ200730(4):722-898.3%(57/58)ClarkeetalClinExpImmunol2007150(2):238-44.90.0%(27/30)DetjenetalCID20071;45(3):322-8*92.9%(26/28)OzekincietalJIntMedRes2007;35:696-70392.9%(26/28)SoysaletalIJTLD200812(1):50-56*80.8%(80/99)DominguezetalClinVaccImmunol200815(1);168-71*85.7%(36/42)CheeetalJClinMicrobiol.2008Apr9*94.1%(254/270)VincentietalClinExpImmunol.2007Oct;150(1):91-8*84.6%(11/13)WangetalEmergingInfectDis200713;4:553-887.2%(34/39)LosietalEurRespirJ.2007Dec;30(6):1173-9100.0%(10/10)KimetalArchInternMed167;20:2255-2259100.0%(22/22)ConnelletalPLoSONE2008.3;7:e2624*100.0%(9/9)Kobashietal.ScandJInfectDis2008.40;8:629-34*87.5%(42/48)Kobashietal.JInfect.2008[Epubaheadofprint].*90.0%(36/40)Domínguezetal.DiagnMicrobiolInfectDis.2008.*[Epubaheadofprint]84.2%(32/38)Golettietal.PLoSONE.2008.3;10:e3417.*89.9%(62/69)Bosshardetal.RespirMed.2008.[Epubaheadofprint]98.4%(62/63)HiguchiMedMicrobiolImmunol.2008.[Epubaheadofprint]*95.9%(47/49)TOTAL92.0%(1139/1238)特異性T-SPOT?.TB的實(shí)驗(yàn)步驟用BDCPT管或Ficoll提取液收集外周血單個(gè)核細(xì)胞結(jié)核特異抗原〔ESAT-6/CFP10〕刺激結(jié)核特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞使其分泌γ-干擾素效應(yīng)T淋巴細(xì)胞分泌的γ-干擾素與膜板預(yù)包被的抗γ-干擾素抗體結(jié)合并固定在細(xì)胞周圍1個(gè)斑點(diǎn)=1個(gè)效應(yīng)T細(xì)胞參加顯色液，觀察結(jié)果過夜孵育，洗板，參加酶標(biāo)二抗陰性結(jié)果陽性結(jié)果空白對(duì)照抗原AESAT-6抗原BCFP10陽性對(duì)照（PHA）實(shí)驗(yàn)效果圖方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)檢測特異性的提高幫助臨床區(qū)分卡介苗接種和環(huán)境分枝桿菌感染引起的“假陽性〞，防止了臨床的無效用藥檢測靈敏度的提高有利于臨床對(duì)結(jié)核病的早發(fā)現(xiàn)、早治療，防止了疾病的傳播與擴(kuò)散快速48小時(shí)出結(jié)果方法學(xué)的局限不能區(qū)分活動(dòng)性TB與潛伏感染不能夠提示臨床患者的病變部位，需要結(jié)合臨床的判斷目前還不能夠根據(jù)斑點(diǎn)數(shù)量的多少來判斷患者是活動(dòng)性結(jié)核病或是潛伏感染者檢測收費(fèi)高〔800元/次〕實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋陰性結(jié)果提示患者體內(nèi)不存在針對(duì)結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T細(xì)胞。假陰性結(jié)果：①感染階段不同；②少數(shù)免疫系統(tǒng)功能不全/疾??；③實(shí)驗(yàn)非正常操作。陽性結(jié)果提示患者體內(nèi)存在針對(duì)結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T細(xì)胞，患者存在結(jié)核感染。但是否是活動(dòng)性結(jié)核病，需結(jié)合臨床病癥和其它檢測指標(biāo)綜合判斷。假陽性結(jié)果：①4種環(huán)境分枝桿菌感染時(shí)：M.kansasii〔堪薩斯〕、M.szulgai〔蘇氏〕、M.marinum〔?！?、M.gordonae〔戈登〕各國對(duì)潛伏感染風(fēng)險(xiǎn)人群的篩查指南風(fēng)險(xiǎn)人群美國指南加拿大指南英國指南免疫力抑制人群（例如，HIV感染者，使用強(qiáng)的松或TNF-α抑制劑治療）TST或IGRA；如果是陰性或高度懷疑的，TST和IGRA都要檢查TST，如果TST陰性要用IGRA確認(rèn)TST或IGRABCG接種者（如果也屬于其它風(fēng)險(xiǎn)人群）推薦用IGRA沒有特定的推薦TST或IGRA與傳染性肺結(jié)核患者密切接觸TST或IGRATST，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽性TST，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽性醫(yī)務(wù)工作者TST或IGRA推薦用TSTTST或IGRA，視情況而定無法再來確認(rèn)TST結(jié)果的人群（例如，流浪漢，注射吸毒者或交通不方便）推薦用IGRA沒有特定的推薦推薦用IGRA國外出生的人群只篩查過去5年內(nèi)移民的人群；TST或者IGRA只篩查過去2年內(nèi)小于15歲的移民；TST，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽性只篩查新移民；TST篩查5至15歲移民，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽性；IGRA篩查16至35歲移民其它風(fēng)險(xiǎn)人群TST或IGRATST，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽性TST，用IGRA進(jìn)一步確認(rèn)TST陽性樣本量為26680調(diào)查者的15個(gè)多中心研究顯示,在4年的隨訪中,IGRA-陽性的個(gè)體中發(fā)病數(shù)為4~48例/1000人/每年.2021年9月的研究結(jié)果提示，IGRA-陰性對(duì)于兒童〔小于5歲〕不能排除結(jié)核病(Pediatr.Infect.Dis.J.30,817–818,2021).ChildhoodtuberculosistreatmentremainsimprecisescienceNatureMedicineVolume:17,Page:116011October2021.③分子生物學(xué)診斷Real-timePCR2小時(shí)全過程目測法檢測流程檢測方法說明結(jié)果判斷在陰性對(duì)照反響管液體顏色呈橙色，陽性對(duì)照反響管液體顏色呈綠色的條件下：假設(shè)待檢樣本反響管中液體顏色呈綠色，那么可報(bào)告該樣本檢測結(jié)果為結(jié)核分枝桿菌陽性；假設(shè)待檢樣本反響管中液體顏色呈橙色，那么可報(bào)告該樣本檢測結(jié)果為結(jié)核分枝桿菌陰性；假設(shè)陰陽性對(duì)照反響管結(jié)果與上述情況不符，那么本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測。RNA作為臨床分子診斷靶標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)：RNA拷貝數(shù)≥DNA拷貝數(shù)更具臨床意義:生命力旺盛的病原體RNA轉(zhuǎn)錄活潑RNA遠(yuǎn)不如DNA穩(wěn)定病原體死亡，RNA很快降解 1.交叉污染少 2.較好的愈后指標(biāo)結(jié)核桿菌RNA(TB-RNA)操作過程4.結(jié)核病的分子藥敏DNA?STRIP?T-spot

-XpertMTB/RIFDNA微陣芯片藥物藥物作用機(jī)制參與基因編碼酶作用突變頻率（%）INH氧自由基對(duì)DNA，脂質(zhì)等多效應(yīng)KatG觸酶-過氧化物酶活化原藥42~58INH對(duì)NADH競爭性INH-NADH加成物抑制分支菌酸合成代償katG功能inhAkasAahpCndhnatglf烯?；d體蛋白還原酶酮?；鞍缀铣擅竿榛鶜溥^氧化物酶NADH脫氫酶芳香胺乙酰轉(zhuǎn)移酶吡喃半乳糖變位酶分支菌酸代謝靶酶靶酶？靶酶？NAD+減少乙?；Щ領(lǐng)NH靶酶？21~3410~15耐藥標(biāo)記物RFP抑制信使RNA轉(zhuǎn)錄rpoBRNA多聚酶靶酶96~100PZA酸化胞漿，失活酶活性抑制脂肪酸代謝？替代煙酰胺摻入NAD抑制膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能pncAFasI吡嗪酰胺酶FasI？活化原藥靶酶？72~97EMB阿拉伯半乳聚糖合成抑制阿拉伯呋喃糖累積脂阿拉伯甘露聚糖合成抑制embCABembB阿糖轉(zhuǎn)移酶靶酶47~65SM肽鏈翻譯錯(cuò)誤rpsLrrs核糖體30S亞基S12蛋白核糖體16SrRNA靶位靶位52~598~21AK/KMOFx肽鏈翻譯錯(cuò)誤抑制DNA回旋酶rrsgyrA核糖體16SrRNADNA回旋酶A亞基靶位靶酶75~94Cs抑制肽聚糖合成ulrA/dadBD-丙氨酸合成酶靶酶GT-Blot48自動(dòng)雜交儀1臺(tái)所需設(shè)備：GTQPCR－96擴(kuò)增儀1臺(tái)Mikro220離心機(jī)1臺(tái)恒溫器1臺(tái)超聲波振蕩儀1臺(tái)TARGET靶基因菌種鑒定16SrRNAIS6110異煙肼katG、inhA、ahpC、oxyR、KasA、ndh利福平rpoB乙胺丁醇embB吡嗪酰胺pncA鏈霉素rpsL、rrs喹諾酮類藥物gyrA、gyrBMTBDRplus方法原理：PCR擴(kuò)增檢測rpoB、katG和inhA基因突變位點(diǎn)，診斷RFP和INH耐藥。rpoB

野生型探針:WT1-WT8rpoB

耐藥突變探針:MUT1-3:D516V,H526Y,H526D,S531L→通過缺失的野生型信號(hào)進(jìn)行突變探測→通過出現(xiàn)的突變信號(hào)進(jìn)行突變探測MTBDRplus

rpoB511513516518522526531533rpoBWT2rpoBWT4rpoBWT6rpoBWT8rpoBWT7rpoBMUT1(D516V)rpoBMUT3(S531L)rpoBMUT2A(H526Y)rpoBMUT2B(H526D)514515rpoBWT1rpoBWT3rpoBWT5509508505MTBDRplus操作流程DNA提取用NALC/NaOH處理痰標(biāo)本2)PCR擴(kuò)增3)

雜交擴(kuò)增產(chǎn)物和固化在膜上的特異性探針雜交4)

結(jié)果判讀MTBDRplus反響條帶(示范)BandeletteMTBDR?(HainLifescience)

鑒定結(jié)核菌利福平rpoBINHkatG315藥物GenoTypeMTBDRplus結(jié)果比例法藥敏結(jié)果

耐藥

敏感INH

耐藥450

敏感716靈敏度：86.5%(45/52)特異度：100%(16/16)符合率：89.7%(61/68)菌株標(biāo)本GenoTypeMTBDRplus方法與比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較藥物GenoTypeMTBDRplus結(jié)果比例法藥敏結(jié)果

耐藥

敏感RFP耐藥480

敏感116靈敏度：98.0%(48/49)特異度：100%(16/16)符合率：98.5%(64/65)菌株標(biāo)本GenoTypeMTBDRplus方法與比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較痰標(biāo)本〔涂片陽性〕GenoTypeMTBDRplus方法與比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較藥物GenoTypeMTBDRplus結(jié)果比例法藥敏結(jié)果

耐藥

敏感INH

耐藥630

敏感1129靈敏度：98.4%(63/64)特異度：100%(129/129)符合率：99.5%(192/193)痰標(biāo)本〔涂片陽性〕GenoTypeMTBDRplus方法與比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較藥物GenoTypeMTBDRplus結(jié)果比例法藥敏結(jié)果

耐藥

敏感RFP

耐藥3912

敏感2140靈敏度：95.1%(39/41)特異度：92.1%(140/152)符合率：92.7%(179/193)缺點(diǎn):需要專門設(shè)備；未發(fā)現(xiàn)所有的耐藥突變位點(diǎn)，不能檢測所有藥物的耐藥基因型；MTBDRplus試劑盒的檢測試紙條，缺少ahpC-oxyR間隔序列范圍，否那么可進(jìn)一步提高INH耐藥檢測的敏感性；不能取代傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)檢測、只能作為參考。進(jìn)行標(biāo)本處理、實(shí)時(shí)PCR和利福平耐藥性檢測的完整平臺(tái)此平臺(tái)由FIND和Cepheid〔一個(gè)加州公司〕所開發(fā)痰標(biāo)本可以直接放入模塊中，而無需與任何試劑進(jìn)行混合處理GeneXpert設(shè)備可進(jìn)行標(biāo)本液化、去污染、富集、DNA提取、rpoB實(shí)時(shí)擴(kuò)增、應(yīng)用分子燈塔檢測耐藥相關(guān)的突變?cè)撓到y(tǒng)非常容易