納米抗體研究進(jìn)展-免疫學(xué)

納米抗體的研究進(jìn)展匯報(bào)人：蔡佳蓉研究背景由重鏈可變區(qū)〔VH〕組成的抗原結(jié)合片段，體積約為完整抗體的1/12。抗原親和力低，易聚集1993年—納米抗體〔Nb/VHH抗體〕：晶體結(jié)構(gòu)直徑2.5ｎｍ、長4ｎｍ，相對分子質(zhì)量小于15kDa。具有水溶性和構(gòu)象穩(wěn)定性，特異的抗原結(jié)合能力和高親合力1994年—第一個(gè)Nb的氨基酸序列測定進(jìn)入Nb結(jié)構(gòu)、特性和生產(chǎn)、應(yīng)用的探索與開發(fā)研究階段1989年—單域抗體〔Sdab〕：駱駝Sdab抗體技術(shù)應(yīng)用廣泛新型基因工程抗體不斷出現(xiàn)抗體小型化納米抗體發(fā)現(xiàn)性質(zhì)研究市場應(yīng)用納米抗體的結(jié)構(gòu)Nb體積很小,為普通抗體的十幾分之一。容易接近靶目標(biāo)外表的溝、裂縫或被隱藏的抗原表位,識(shí)別許多傳統(tǒng)抗體無法識(shí)別的抗原。呈橢圓形,相對分子質(zhì)量(M)為15kD?；パa(bǔ)決定區(qū)不同VHH的CDR1和CDR3比VH更長。VHH的CDR3長度為16～18個(gè)氨基酸，人和小鼠VH的平均長度分別只有14和12個(gè)氨基酸FR2的氨基酸不同普通抗體的FR2中V37、G44、L45和W47這4個(gè)氨基酸殘基是疏水性殘基，在進(jìn)化中是相當(dāng)保守的VHH中，它們突變?yōu)橛H水性的氨基酸殘基F37、E44、R45、G47，增加了VHH的溶解性駱駝重鏈抗體的VHH和人抗體重鏈的VH結(jié)構(gòu)非常相似都含有3個(gè)高變區(qū)〔HVR〕和4個(gè)骨架區(qū)〔FR〕微小差異不容無視納米抗體的結(jié)構(gòu)為了進(jìn)一步改善Nb活性，比方提高親和力，延長半衰期等，可以通過短小的連接序列(Linker)將單價(jià)Nb聚合在一起，轉(zhuǎn)換成多價(jià)或多特異性的Nb，也能夠攜帶某些特定結(jié)構(gòu)形成融合的Nb.納米抗體的特性免疫原性Nb缺少Fc段，從而防止補(bǔ)體反響，對人體的免疫原性很低。穿透性Nb具有強(qiáng)而快的組織穿透能力，能夠有效的穿透血腦屏障。生產(chǎn)性利用基因工程能在酵母菌、大腸桿菌等微生物中大量表達(dá)。理化性溶解度高親水氨基酸取代疏水氨基酸穩(wěn)定性Nb內(nèi)部存在二硫鍵37℃放置1周后能保持80%以上生物活性?？篃嵝詮?qiáng)高于90℃的環(huán)境中長期放置，仍能重新獲得生物活性?？乖Y(jié)合性Nb的CDR3較長，形成穩(wěn)定的凸形結(jié)構(gòu)，可深入抗原內(nèi)部更好地結(jié)合抗原。不僅可結(jié)合小分子半抗原和肽，還可結(jié)合大分子蛋白和病毒。納米抗體的制備從駱駝體內(nèi)分離出重鏈抗體提取總RNA反轉(zhuǎn)錄獲得模板根據(jù)重鏈抗體保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物PCR法擴(kuò)增獲得全套VHH克隆至載體體外表達(dá)獲得多種單價(jià)Nb的抗體庫屢次篩選得到抗原特異的Nb納米抗體的開發(fā)和研究潛力利用納米抗體對組織穿透力強(qiáng)和對靶位點(diǎn)的親和力高的特點(diǎn)，進(jìn)入致密組織，檢測被深入包埋的物質(zhì)，實(shí)現(xiàn)肉制品、蛋