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文檔簡介

11.220

41DB34

雞滑液囊支原體

LAMP

Technical

Regulations

for

Rapid

Detection

安徽省市場監(jiān)督管理局

DB34/T

2020前 言

DB34/T

2020

Amplification

4.1

高速臺式冷凍離心機(jī)（最大轉(zhuǎn)速

15000

rpm）4.2

4.3

L、1000

L）4.4

4.5

4.6

電熱恒溫水槽（室溫～100℃）4.7

4.8

4.9

4.10

pH

mL，濃鹽酸調(diào)

DB34/T

2020二水乙二銨四乙酸二鈉

18.61

80

pH

100mL。

十二烷基硫酸鈉

20

80

pH

100

mL。

mol/L

三羥甲基氨基甲烷-鹽酸（pH

8.0）2

mol/L

乙二銨四乙酸二鈉（EDTA）溶液（pH8.0）0.4

mL，20％十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液（pH

mL，5

mol/L

氯化鈉

mL，滅菌雙蒸水

200

250

mL。

堿性酚

25

mL，三氯甲烷

24

mL。5.7

5.8

雙蒸水（符合

GB/T

6682

的要求）5.9

5.10 DL2000

Marker5.11 6×Loading

Buffer

MSEF-TUCP011096PrimerExplorer

CACAAATGGATGGTGCTATTCTT

-3'——B3：5'-TACTGCGTCACCTTCAAGTGCT-3'

無菌采集咽喉拭子，關(guān)節(jié)囊腫和胸部囊腫的內(nèi)部炎性分泌物，放入盛有

1.0

mL

PBS

卻后的

PBS

溶液，無菌條件下加入青霉素

1000

IU/mL）的

1.5

mL

DB34/T

2020

1.5

mL

制備的樣品在

24

1.5

mL

L，加入

10

30

10

rpm

10

min。

取上清

1.5

mL

滅菌離心管中，加入等體積異丙醇，混勻，置

-80℃冰箱中

30

min，

棄上清，沿離心管開口方向管壁緩緩滴入

mL

滅菌雙蒸水溶解沉淀，作為模板備用。若需長期保存須放置在

8.2

Bst

Polymerase

設(shè)所需

PCR的檢測總數(shù)為

n，其中

為被檢樣品、陽性對照與陰性對照之和，每個樣本測試反應(yīng)體系配制見表1。

加樣DB34/T

2020在各設(shè)定的

PCR

8.1.6

中制備的

DNA

溶液各

s。

LAMP

反應(yīng)

8.2.2

中離心后的

PCR

管編號，放入

65℃水浴鍋內(nèi)

30～60

min，之后置

80℃溫育

20

每個樣本取

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