細(xì)菌學(xué)衛(wèi)生檢驗(yàn)種類(lèi)及標(biāo)準(zhǔn)

第七章

細(xì)菌學(xué)衛(wèi)生檢驗(yàn)種類(lèi)及標(biāo)準(zhǔn)邵麗軍1編輯ppt主要內(nèi)容第一節(jié)體液、分泌物及排泄物細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)第二節(jié)各種環(huán)境標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)及衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（自學(xué)）2編輯ppt臨床感染性疾病的診斷和治療應(yīng)用良好的檢測(cè)技術(shù)和方法，提供準(zhǔn)確的結(jié)果或報(bào)告確定檢查目的和方法正確規(guī)范的采集和運(yùn)送標(biāo)本臨床檢驗(yàn)流程第一節(jié)體液、分泌物及排泄物細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)3編輯ppt細(xì)菌學(xué)鑒定方法1、形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查2、細(xì)菌生長(zhǎng)特性檢查如菌落3、生化試驗(yàn)4、血清學(xué)試驗(yàn)5、藥敏試驗(yàn)6、細(xì)菌毒素檢測(cè)7、分子生物學(xué)檢測(cè)8、噬菌體分型試驗(yàn)9、動(dòng)物試驗(yàn)4編輯ppt臨床標(biāo)本常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序標(biāo)本選擇標(biāo)本采集與運(yùn)送觀察標(biāo)本、前處理直接涂片快速檢驗(yàn)別離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)可疑菌落血清學(xué)鑒定藥物敏感試驗(yàn)生化反響形態(tài)觀察結(jié)果報(bào)告5編輯ppt細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)報(bào)告原那么分級(jí)報(bào)告一級(jí)報(bào)告：直接涂片染色結(jié)果及培養(yǎng)結(jié)果二級(jí)報(bào)告：別離培養(yǎng)及藥敏結(jié)果三級(jí)報(bào)告：細(xì)菌種屬、藥敏結(jié)果、結(jié)果評(píng)價(jià)和建議6編輯ppt7編輯ppt無(wú)菌原那么正確采樣時(shí)間正確采樣部位

足夠樣本量

多樣性采集做好記錄標(biāo)本采集的一般原則8編輯ppt一、血液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)二、腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)三、穿刺液和引流液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)四、尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)五、膿液和分泌物標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)六、痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)七、生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)八、糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)9編輯ppt一、血液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)種類(lèi)常見(jiàn)病原菌G+球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌G+桿菌結(jié)核分枝桿菌、產(chǎn)單核李斯特菌、陰道加特納菌G-球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布蘭漢菌G-桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞苗、克雷伯桿菌、腸桿菌、變形桿菌、沙雷菌、沙門(mén)菌、不動(dòng)桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、嗜血桿菌真菌念珠菌、曲霉菌、隱球菌、球孢子菌厭氧菌擬桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌10編輯ppt〔一〕血液標(biāo)本的采集與送檢1.采樣時(shí)間：發(fā)熱期、用藥之前、病情開(kāi)展2.采樣部位及頻率：多部位、高頻率例1：亞急性心內(nèi)膜炎：24h內(nèi)在三個(gè)不同部位采集3次血標(biāo)本，兩次間隔不少于15分鐘，如培養(yǎng)陰性，就再采3次血標(biāo)本。例2：急性膿毒血癥：在10分鐘內(nèi)在不同部位采2～3次血標(biāo)本。11編輯ppt3.樣本采集的量：成人血量5～10ml，嬰兒1ml～2ml，兒童3ml～5ml；當(dāng)疑心為真菌感染時(shí)，應(yīng)采集雙份量，分別作雙相培養(yǎng)(37℃/28℃)。4.樣本的送檢：盡快，室溫5.操作：直接采血注入含増菌肉湯的培養(yǎng)瓶或用不含防腐劑的肝素抗凝管至實(shí)驗(yàn)室接種，需同時(shí)做需氧和厭氧培養(yǎng)12編輯ppt血培養(yǎng)一級(jí)報(bào)告二級(jí)報(bào)告三級(jí)報(bào)告“檢出***菌〞，藥敏試驗(yàn)結(jié)果；7天仍無(wú)生長(zhǎng)現(xiàn)象，報(bào)告為“7天培養(yǎng)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)〞〔結(jié)核可培養(yǎng)8周報(bào)告陰性〕13編輯ppt〔二〕細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)14編輯ppt〔一〕標(biāo)本的采集與送檢1.采樣：腰椎穿刺術(shù)無(wú)菌采集腦脊液3-5ml，床邊接種或放入無(wú)菌試管中，立即送檢〔采樣到送檢不超過(guò)1h〕；2.注意保溫，不可置冰箱保存，因?yàn)闀?huì)使病原菌死亡，尤其是腦膜炎奈瑟氏菌、肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌；3、腦膿腫吸出物尚須檢測(cè)厭氧菌和寄生蟲(chóng)培養(yǎng)基選擇：普通血培養(yǎng)瓶、厭氧血培養(yǎng)瓶、血平皿、中國(guó)藍(lán)平皿、流感嗜血桿菌平皿等。

二、腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)15編輯ppt〔二〕細(xì)菌學(xué)檢查

1．涂片檢查：革蘭染色：查找一般細(xì)菌，尤其腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌和鏈球菌多見(jiàn)?？顾崛旧翰檎医Y(jié)核分枝桿菌。墨汁染色：查找新型隱球菌。2．細(xì)菌培養(yǎng)：腦脊髓液培養(yǎng)多數(shù)需3～4天，在此期間如有細(xì)菌生長(zhǎng)，經(jīng)鑒定報(bào)告“××菌〞，同時(shí)報(bào)告藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

16編輯ppt床邊接種離心涂片，同時(shí)增菌不染色鏡檢革蘭、抗酸、墨汁染色單菌落涂片染色離心沉淀物或増菌培養(yǎng)物腦脊液報(bào)告單17編輯ppt三、穿刺液和引流液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)〔一〕標(biāo)本的采集與送檢1、標(biāo)本來(lái)源：胸腔積液、腹水、心包積液、關(guān)節(jié)液、膽汁、鞘膜液深部組織液等2、標(biāo)本量：心包積液、關(guān)節(jié)液為1-5ml，胸腔積液、腹水為5-10ml3、收集送檢：無(wú)菌收集并置于無(wú)菌抗凝試管送檢，無(wú)法立即送檢可冷藏；標(biāo)本還可床邊接種或置厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢，無(wú)法立即送檢可室溫保存。18編輯ppt〔二〕細(xì)菌學(xué)檢查1、標(biāo)本處理：①漿液離心沉淀物涂片；②膿液直接涂片；③含血細(xì)胞，加等量蒸餾水破壞紅細(xì)胞后，離心沉淀物涂片2、涂片檢查：這類(lèi)標(biāo)本因原部位是無(wú)菌的，只要檢出細(xì)菌即可診斷感染的類(lèi)型，故直接涂片很重要。革蘭染色：查找一般細(xì)菌?？顾崛旧翰檎医Y(jié)核分枝桿菌。3、別離培養(yǎng)及鑒定：離心沉淀物分別接種增菌肉湯、血瓊脂平板、中國(guó)藍(lán)或麥康凱瓊脂平板、厭氧血瓊脂平板。如有細(xì)菌生長(zhǎng)，需進(jìn)一步鑒定和藥敏試驗(yàn)后報(bào)告。

19編輯ppt四、尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)〔一〕標(biāo)本的采集與送檢1、采集方法：防止尿液被尿道口菌群污染，采用中段尿采集法、導(dǎo)尿法和膀胱穿刺法采集標(biāo)本無(wú)菌導(dǎo)尿管采集尿液，在排出15ml尿液后收集，有潛在引入尿道菌的危險(xiǎn)；留置導(dǎo)尿管采尿，先以75%酒精消毒導(dǎo)管口，用無(wú)菌注射器收集10ml；長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管患者，應(yīng)在更換新尿管時(shí)留取尿標(biāo)本。20編輯ppt2、采集時(shí)間：通常應(yīng)采集早晨起床后第一次尿液，在抗菌藥物應(yīng)用之前采集尿液10-15ml

3、送檢：及時(shí)送檢，室溫不超過(guò)2h；冷藏不超過(guò)8h；淋病奈瑟菌和厭氧菌培養(yǎng)應(yīng)保溫送檢。21編輯ppt〔二〕細(xì)菌學(xué)檢查1、顯微鏡檢查：離心沉淀物涂片。根據(jù)臨床情況選擇染色方法如革蘭染色和呂氏美藍(lán)染色〔淋球菌〕、抗酸染色〔結(jié)核分枝桿菌〕、暗視野顯微鏡直接觀察〔鉤端螺旋體〕。2、別離培養(yǎng)及鑒定：①必須做傾注培養(yǎng)法計(jì)數(shù)尿液菌，培養(yǎng)結(jié)果才有臨床意義。②離心沉淀物分別接種血瓊脂平板、中國(guó)藍(lán)或麥康凱瓊脂平板或疑似菌相應(yīng)培養(yǎng)基，可疑菌落進(jìn)行涂片、染色、生化鑒定、藥敏等。22編輯ppt3、結(jié)果報(bào)告涂片鏡檢，報(bào)告形態(tài)特點(diǎn)和染色情況；

尿液細(xì)菌計(jì)數(shù)，如為革蘭陽(yáng)性菌＞104CFU／m1；如為革蘭陰性菌＞105CFU／m1，可診斷為泌尿系感染。10％的尿路感染者可能在同份尿標(biāo)本中別離到兩種細(xì)菌，并都是病原菌。但當(dāng)檢出3種或以上不同微生物，認(rèn)為標(biāo)本被污染。別離到的細(xì)菌，經(jīng)鑒定及藥敏試驗(yàn)后，可報(bào)告“檢出***菌，藥敏結(jié)果是***〞；48h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，報(bào)告陰性。報(bào)告“2天培養(yǎng)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)〞。23編輯ppt尿液檢查尿液標(biāo)本離心沉淀涂片可疑菌落血清學(xué)鑒定藥物敏感試驗(yàn)生化反響形態(tài)觀察尿液菌落計(jì)數(shù)接種平板別離培養(yǎng)報(bào)告結(jié)果24編輯ppt〔一〕標(biāo)本的采集與送檢拭子采集法、紗布條采集法、注射器抽吸法開(kāi)放式膿腫封閉式膿腫大面積燒傷瘺管采樣樣品不能及時(shí)送檢可冷藏；厭氧培養(yǎng)要床邊接種或厭氧運(yùn)送。

五、膿液和分泌物標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)清洗后，棉拭子直接采樣切開(kāi)排膿時(shí)用無(wú)菌棉拭子采樣或注射器抽吸可多部位棉拭子采集創(chuàng)面分泌物紗布條塞入瘺管或棉拭子采樣25編輯ppt〔二〕細(xì)菌學(xué)檢查1、涂片檢查：革蘭染色：可檢查一般細(xì)菌，特別注意真菌及放線菌存在?？顾崛旧赫医Y(jié)核分枝桿菌(局部奴卡菌也可陽(yáng)性)2、別離培養(yǎng)及鑒定：分泌物或膿液分別接種血瓊脂平板、中國(guó)藍(lán)或麥康凱瓊脂平板或疑似菌相應(yīng)培養(yǎng)基，可疑菌落進(jìn)行涂片、染色、生化鑒定、藥敏等。3、結(jié)果：一般培養(yǎng)2日，以為諾卡菌培養(yǎng)7天，厭氧菌3-5天，報(bào)告結(jié)果。26編輯ppt27編輯ppt〔一〕標(biāo)本的采集與送檢1、采樣時(shí)間及類(lèi)型：使用抗生素前采集。①用清水反復(fù)漱口后取第2或3口的晨痰；②就診時(shí)深呼吸后咳出的即時(shí)痰；③送痰前一日，晚間咳出的痰液。2、采樣方法自然咳痰法拭子采集法小兒取痰法特殊取痰法呼吸道深部痰，可霧化使痰易排出壓住舌根，棉拭子反復(fù)涂抹咽后壁或懸雍垂后側(cè)壓舌，棉拭子深入咽部，刺激咳出分泌物胃內(nèi)采痰法、支氣管鏡等特殊方法

六、痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)28編輯ppt3、送檢：樣品不能及時(shí)送檢室溫不超過(guò)2h；結(jié)核或真菌痰液冷藏。4、標(biāo)本質(zhì)量：標(biāo)本量一般在3-5ml，標(biāo)本性狀屬于干酪痰、褐色血痰或含少量新鮮血液的血痰、粘液痰者為合格的標(biāo)本29編輯ppt〔二〕痰液細(xì)菌學(xué)檢查痰液標(biāo)本膿性或帶血局部涂片可疑菌落血清學(xué)鑒定藥物敏感試驗(yàn)生化反響形態(tài)觀察稀釋后接種平板別離培養(yǎng)報(bào)告結(jié)果30編輯ppt〔一〕標(biāo)本的采集與送檢1、采樣方法生殖道分泌物穿刺液標(biāo)本疑心梅毒患者前列腺液2、送檢普通細(xì)菌、衣原體、支原體淋病奈瑟球菌厭氧菌清洗尿道口外陰，棉拭子深入尿道口2-3cm采集；陰道分泌物在陰窺鏡下采集盆腔膿腫者及子宮分泌物需穿刺采集清洗生殖器，從潰瘍底部擠出少許組織液按摩前列腺后采集

七、生殖道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)無(wú)法及時(shí)送檢可冷藏保存床邊接種或保溫后及時(shí)送檢室溫，厭氧送檢或床邊接種31編輯ppt〔二〕細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)1、顯微鏡檢查2、別離培養(yǎng)及鑒定3、結(jié)果報(bào)告32編輯ppt〔一〕標(biāo)本的采集與送檢1、采樣方法1、常規(guī)培養(yǎng)不主張用肛拭子，自然排便后，挑取有膿液、粘液部位的糞便2-3g或液狀糞便1-2ml；2、直腸拭子法：不易獲得糞便時(shí)或排便困難的患者及幼兒，可采用直腸拭子方法采集；2、送檢不能及時(shí)送檢放入卡-布運(yùn)送培養(yǎng)基或pH7.0磷酸鹽甘油運(yùn)送或保存。疑似霍亂弧菌，堿性蛋白胨水運(yùn)送保存。

八、糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)33