免疫實驗小鼠分離_第1頁
免疫實驗小鼠分離_第2頁
免疫實驗小鼠分離_第3頁
免疫實驗小鼠分離_第4頁
免疫實驗小鼠分離_第5頁
已閱讀5頁，還剩4頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

實驗三小鼠脾單個核細胞的分離

—密度梯度離心法

實驗原理：

根據(jù)物理學中顆粒沉降原理，不同密度的物質(zhì)顆粒在其沉降運動中可因其密度的差別而處于不同的分布位置。利用此原理可設計一定密度的液體界面，將外周血中各種不同密度的細胞通過離心沉降而達到使其彼此分離的目的。

單個核細胞（PBMC）=淋巴細胞（95%）+單核細胞已知小鼠PBMC的密度約為1.088（人類約為1.077），而紅細胞與粒細胞的密度均大于1.088（人類均大于1.090）用密度為1.088±0.001（人類為1.077±0.001）的Ficoll分離液（PBMC密度略低于分離液）則可通過密度梯度離心方法，在分離液界面上收集PBMC。實驗原理：器材：（1）水平式離心機（2）顯微鏡（3）血球計數(shù)板、血蓋片（4）試管、滴管（5）定量移液器（6）刻度離心管（7）擦鏡紙試劑：（1）小鼠脾臟細胞懸液（2）淋巴細胞分離液（市售，密度：1.088±0.001）（3）生理鹽水（0.9%氯化鈉注射液）（4）白細胞稀釋液（5）0.4%錐蘭染液器材與試劑：操作步驟：將1ml小鼠脾細胞懸液混勻，用滴管沿盛有2ml淋巴細胞分離液的試管壁輕輕鋪于分離液面上。將該試管置水平式離心機中離心（1800rpm）15分鐘。（一定要平衡）操作步驟：離心后的各成份在試管中的分布位置如下圖：用滴管小心地直接插入白色絮狀的細胞層（含PBMC），吸出界面層細胞，移入另一試管內(nèi)。1.0881.088稀釋的懸液稀釋的懸液操作步驟：加入足量生理鹽水（N.S），用滴管輕輕上下混勻，然后離心（1000rpm）10分鐘，棄去上清液，將沉淀細胞充分搖勻，再用N.S洗滌1次。用0.3mlN.S將沉淀細胞稀釋，搖勻。取細胞懸液1滴加入等量白細胞稀釋液于另一試管中充分混勻，用計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)，計算出單個核細胞濃度（個/ml）。檢查細胞活力：取細胞懸液一滴加入等量錐蘭溶液于另一試管中充分混勻，用載玻片在顯微鏡下計數(shù)50~100個單個核細胞中著色的死細胞數(shù)。

單個核細胞濃度（個/ml）

（4大方格細胞總數(shù)）

4

細胞活力（%）

實驗結(jié)果記錄與分析

分離后活細胞數(shù)分離后細胞總數(shù)×10×2×103一大方格=1×1×0.1=0.1mm31

l=1mm31ml=1000mm3操作注意事項

分離液與脾細胞懸液的比例，一般以1:2~1:3為宜。分離時所取的離心速度與時間，因各臺離心機的離心半徑而異，需事先通過預試驗決定。加入脾細胞懸液時應十分小心，注意保護試管內(nèi)的界面，勿使混淆而影響

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論