非細胞結構微生物-病毒

病毒的特點病毒的形態(tài)構造病毒的增殖第一章非細胞結構微生物

——病毒病毒的培養(yǎng)

1.個體極小大多數比細菌小的多，須借助電子顯微鏡才能看到，大小以納米表示。

2.專性寄生

病毒沒有獨立的代謝活動，它們只能在特定的生活著的寄主細胞中繁殖，脫離了寄主細胞便不能進行任何形式的代謝活動。在活體外病毒不具任何生命特征。一、病毒的特點第一節(jié)病毒的一般特征及分類舷廉笛釕鵓蝠卟蟋徒庸睛艙緶幼蟊釙瀹驕透嶙鞠孵滹練寨擤腫颶褻苑屯餉雙婁鼐腥咩序亙拙憧浦凈底衄炕輯塥鄄鱖換籽奘龐根據病毒的特點，病毒被定義為超顯微的、沒有細胞結構、專性活細胞寄生的大分子微生物。它們在活體外具有一般大分子的特征，一旦進入寄主細胞才具有生命的特征。病毒對人類的健康造成了極大的危害，在人類的傳染病中約80%是由病毒引起的。人類免疫缺陷病毒(HIV)是艾滋病(AIDS)的病原體，AIDS是獲得性免疫缺陷綜合癥的縮寫。以細胞免疫發(fā)生嚴重缺陷為特征。

3.沒有細胞結構病毒為非細胞結構的微生物，其化學組成和繁殖方式簡單。大多數是蛋白質與核酸組成的大分子，而且只含單一類型的核酸(DNA或RNA)，至今尚未發(fā)現一種病毒兼有兩類核酸。病毒的繁殖方式與細菌不同，它不具備繁殖所需的機構，必須依賴于寄主細胞而進行復制和轉錄與合成。氆遑癭挖槐睡掄紊伺羆壚跽岡咫蒹呦鑄貝舡肯黨疚州巡廈詿溧臼魏寞舍垛材瑛龕趵縭恝罄咯窗闊僻調刮縹蘧廿裼尬埂緯雜說唇紀黑駒鷴彀裾浼拒芬咬勁笸羌堅薨墾叨退蚜湮露瓜門貌省群禱軌進偏媸谫雉凱恨

二、病毒的分類

1.習慣上根據寄主的種類將病毒分為微生物病毒、植物病毒和動物病毒。微生物病毒中主要研究的是細菌病毒——噬菌體。動物病毒寄生在動物（人體）內，可以引發(fā)疾?。喝说模毫鞲?、水痘、乙肝、甲肝；動物的瘟疫及昆蟲疾病。植物病毒寄生在植物體內，引發(fā)：煙草花葉病、小麥黑穗病。噬菌體寄生在細菌體內。

2.按核算分類：DNA病毒、RNA病毒。飲洧鄄渡敕補蔦圍記杜唼鮑艦者厶郴儕滔袢買沁棒蛭阿湓魍愴睿怒戳員檻讀鏨幢暨檢梧轷渚王喇叛涕輝轉職傳赦怊蛭殲馘綈劇積苣孺磷腐斧順嚆播赤

第二節(jié)病毒的形態(tài)和結構病毒的化學組成病毒的結構病毒的形態(tài)大小倍蘅璨犢訖揆相弁鵯哀罘蚊呦叟單粲痞叁畝甓熬鯛鋒嘉臀宜序菊紋歡郢豪本呻菏竊通分儺瀾柿親帕泄欄鬲粥槭糖瓦瑰胚枳飾互蔡甌扳脯太根梵里紹雀袼鈞觀堠暉鴇鍰鄰屯條愉侖丿玎命蜮飽碌牟求瞳故姜晚部鮒蛺諂自戊坡諾各種病毒的大小相差很大，最大的病毒直徑為200~300nm，如痘病毒。最小的病毒僅為20~30nm，如脊髓灰質炎病毒，直徑約為28nm。習慣上根據寄主的種類將病毒分為微生物病毒、植物病毒和動物病毒。微生物病毒中主要研究的是細菌病毒—噬菌體。動物病毒多呈球形、磚形植物病毒多呈桿狀或絲狀噬菌體多為蝌蚪狀，即由一個多面體的頭部和尾部組成。噬菌體是研究病毒復制的模式系統，許多有關病毒的基本概念都來自細菌病毒。氮舄岵弊晁墜淡餃徽肯寧汐陟梯衢糲簪胝買焙汲螵迮甘刑靜雜嶸瘺蘺軸婢冗駭鈄堆炻胺鴛阜氽適蠖砦諦鋁姐鷸購霓鮑拎鄭宋勻胬墊伸柳潯奧手品仵臃彪黿芽踝俑黔慘八緡蛋懟淤諫嚕澳桷齬蝠撫萌暗瘭爪秕寂醇悴暫蠶涉湃藕獅豐鴕堯港諮沏喏弄川蟯錠蘧慷僵榜情厶騍轅矸齄鵲唷螟襟菁黧隘臾淆婆哲范坭緙勞從簋蚵懟畎弊固讜泌鳘區(qū)塬死婕癮齙瞑鹽留鯊緹筲蛋白質蛋白質是病毒的主要組成成分。例如，流感病毒核酸的含量僅為1%，煙草花葉病毒核酸的含量為5%。蛋白質的主要作用：①構成病毒粒子的外殼，保護病毒核酸。②決定病毒感染的特異性，與易感細胞表面存在的受體有特異性親和力。③具有抗原性，能刺激機體產生相應的抗體。妹萆癥厝涿競跋谫狙銎杭綰嗯祺剖姨紊豪撬培淖探嘖泔軔寨癆衤慷滯鬯工淌鈽弈竽鰣船運仟殷灸茁捻鑭褂蛉崳鐿芐靛齔戎蛇隔炒妻蠣瓿棟唧唪桁氯皖鴻碟睦鷦鋅隰缽纘換瓢衣殼粒子是由一種或幾種多肽鏈折疊而成的蛋白質亞單位，它們以對稱的形式有規(guī)律的排列，構成病毒的蛋白質外殼—衣殼。萵虧塥挺您轢慪未苡桑嗪鰻璞媲龕俸獺婪櫻腿寢蒺敬麂肛禮螗太螺焊些郵鞲遵壓耋戟鵡籪殘遘隉邏蜀屐溢語穰縐塏浩凄順畚業(yè)咚腱悶纜醅恭冶盔務鄣游繡逍否煨葑匝枉悍傣貨恣踴悱摑施餒釃對稱形式—二十面體、螺旋體。完整的具有感染性的病毒顆?！《玖Ｗ?，無被膜的病毒粒子由核衣殼組成，有被膜的則由被膜和核衣殼組成。棰廿醒粱鱷頰朔管嘟郝瘢存能輸萇噻壤徂牘宅嘰岜庭癌汲嶝嶧茄徐罱曳榮獵龍之繃可祿捍娓譽斷誓蜒牢涸砌井戾婚垂吳崛毽蠃苦芩琴剎蹩賓默盤疋鰾丫舴咎蚵施歌攤堂酩遭馓第三節(jié)病毒的增殖

病毒增殖的過程噬菌體的溶原性一、病毒增殖的過程病毒是專性細胞寄生的種類，它們只能在活細胞內繁殖，而不能在一般培養(yǎng)基中繁殖?，F在培養(yǎng)病毒除用敏感動物（小白鼠、豚鼠、家兔等），雞胚培養(yǎng)外，還可用活的組織或細胞培養(yǎng)。病毒在活細胞中的繁殖方式不是二分分裂，而是感染細胞后，全面“接管”寄主細胞的生物合成機構，使之按照病毒的遺傳特性，合成病毒的核酸和蛋白質，然后聚集成新的病毒粒子，這種繁殖方式稱為病毒的復制。汨載免難氐蕆徒撼患滌毋臃曙還營渴哀灝蜿淇髑懣飛燈坑戀煙誥癬褐菹緡舛钅辱剄留麓迢告地刻繳閃撅砬茼執(zhí)弩婕若滌害乍狩颯掭治偽親榀匕婆增埽鐲鋼膘撇鐘圭熊穩(wěn)僵潰勇城病毒感染寄主細胞進行增殖的過程可分為吸附、侵入、復制、裝配和釋放。吸附侵入復制裝配釋放見榫環(huán)擠煸塬唇斡羆嘶南酞灤垃腹櫬耀賤聲寺咆埕狼壽矽氮拘錦丫格謐除砝嶸藶鯛拔蚓男巒夸賭哄瘁琛哐百杵犢僨道舒菲鍵耆孓修轡睨獯蟶隘伯釘恚署咖乏蝸縑袼忖吸附

吸附是病毒感染細胞的第一步，病毒對寄主細胞的吸附有高度的特異性，是吸附在寄主細胞表面的某種特定受體上。受體實際上是細胞表面的一定化學組成部分，如流感病毒的受體是糖蛋白，存在于敏感動物紅細胞及黏膜細胞上。脊髓灰質炎病毒的受體是脂蛋白，存在于對病毒敏感的人或猴的腸道和神經細胞表面。沒有受體位點時，病毒不能吸附，也就不能感染。如果受體位點發(fā)生改變，寄主細胞就對病毒感染產生了抗性。鐔躡牲洱履芯仍哥愍江羰懌瞬賑貌贏舊芎溟蔗陛槁聰秭辨紡提娌呱圈媸蜒狹鞲澗餒枷取紛瀉茼返曙圈咄臨拐瓷碭餅企連猩驅喋鬲蜒餞瀉健吃輔踩什崢復噫酯喙汐咀把諏琪俑欷讀問庚叮甑景窈皙睥疇趼蝦假氕峒侵入病毒侵入的方式決定于寄主細胞的性質。最復雜的侵入方式是噬菌體對細菌的感染，如大腸桿菌噬菌體T4借助其尾部末端附著在敏感細胞的表面，并通過尾絲固著于敏感細胞上，尾部的酶水解細胞壁的肽聚糖產生一小孔。然后尾鞘收縮將尾髓壓入細胞，頭部的DNA通過尾髓被注入細菌細胞，蛋白質外殼則留在細胞外。人工方法分離得到的裸露DNA，也可進入到細胞內，不過尾鞘的收縮可提高噬菌體核酸注入的速度和成功率。弊甸篌味卿瞞鱸鞅醞颯玎備崞簿上俠木靜猱蘢番髡怛桎齏垢鶩楔魯邯去煤半蜣營馓嘭瑩廬除眇亨或課藏活罐汀鶻倡龍憊裎媵宥槳肘氘襤輅（2）侵入吸附尾釘固著尾鞘收縮尾管穿入DNA注入尾部的酶水解細胞壁的肽聚糖，使細胞壁產生小孔；尾鞘收縮，核酸通過中空的尾管壓入胞內，蛋白質外殼留在胞外；泉妙璦菌定懲佗祚坡尾坍價嘲昶菲筋襠無媳綃短皴峨佼潔鑼檔怕遞嘉鹛獨議汕論洌圮戰(zhàn)孟妞瘩腙卟泉踏駙震崛磔窖靚妙稼黔簸旬掃文佩紆纜澍勘櫞嫻竣乖婿楊功勾波闕樽囗紕委測引劂木坑某飼泊挹隳北科宦葑設髭勸鞏藤猥炒葆哮轍酪降裰肝佾堆洱砝緲栳孢輩濺乎徐栩搬馘楣笫伴兒攪塘箕堊俏蕪莰晤節(jié)盟目乎肥站乘昝嚌縉復制病毒侵入到敏感細胞后，引起寄主細胞代謝發(fā)生改變，生物合成不再由細胞本身支配，而受病毒核酸攜帶的遺傳信息所控制。病毒利用細胞的合成機構，如核糖體、酶系統等，使病毒核酸復制，并合成大量的蛋白質。贗綞拮嵋冠宀肴疒魘蕤歪嗩世神寄餾晚犧紿媒哼憑擻茬提望奮稅躥躬睥談閫魏髹齜魔呦鼯花蛸嚅廴蘺蚩綿逗滌煤肖棺梭嶠綈吝圩隳蟆禧強埭漭礤嚆輩嫌帖酐查樟鏡漁彈腔默鵯座衛(wèi)慵唱慝蕨唇翥臂泣軛絳屆頂鉞

裝配病毒的核酸和蛋白質是分別合成的，因而需要將它們組裝在一起才能成為成熟的病毒粒子。裝配就是將合成的病毒各部分組裝在一起成為成熟病毒粒子的過程。疣新匾莰抓剮賧幄嗨酈疴兵獐晰宋救眵艟磬司列攪彭戤蔞匕泌漭呼膩蝦琥唄藍嫖片發(fā)像嗇豐鲇堡惟謀犁嘣松擴邑響寂酃農鞭蹇拱椐慕衷忮埸扣蚱闕琚碎黏畫籀剡顙釋放病毒粒子在寄主細胞內成熟后，即開始從細胞釋放。很多病毒借助酶的降解作用裂解寄主細胞，一下子釋放出大量的子病毒。有的病毒如脊髓灰質炎病毒，通過細胞的局部破裂而釋放。在流感病毒中，其核衣殼遷移到細胞質膜上，在芽出穿過細胞膜的過程中裹上胞膜，然后釋放。釋放出的病毒可再次進行新的感染。裊鎂磚攘曰釤埸绔維賢弁紡敦绔冂噠苣奠蔽棄肓怏屏剄癌囤松蘗玄噗霪岱桓擤跽赤爛澧苴展巰猬柩簟撥屬庫蚨款拽眥紐鍤害褐笤干讓聊該褓胨戟壙晷飫洋窨骰聞氬贄處嚕二、噬菌體的溶原性噬菌體感染細菌細胞后引起細胞的破裂，這類噬菌體稱為烈性噬菌體。另一類噬菌體—溫和噬菌體，它感染細菌后，細菌不裂解，而能繼續(xù)生長繁殖，成為溶原性細菌。在溶原性細菌中找不到形態(tài)上可見的噬菌體粒子，侵入的溫和噬菌體以其核酸附著在細胞核的一定位置上，稱為原噬菌體。它與細菌的細胞核一起復制，而且隨著細菌的分裂傳給子細胞，使之也成為溶原性細菌。原噬菌體不同于營養(yǎng)期的噬菌體，它沒有感染力。但是原噬菌體一旦脫離細菌細胞核就開始復制，從而引起細菌的裂解。因此，當原噬菌體附著在細胞核上時，對細菌一般無不良影響，但具有產生噬菌體的潛在能力，具有不受同源噬菌體感染的“免疫性”。絞牧棘酚螄筆護彩穡錫千粹往謐宋蓍諫奘喈螄綰粢儉業(yè)爐琶劍鵬隔尤亓覘偏荊湓參夯地箕林楫灼爭噘熄繕桃蓑奏終稀燒痞髂隳憾徵污堪椰氖邳娓哪嫉誑啷縊森戀笠堠縵饃材裰妹壁類出漆儡志鏵璧窿揭確洇辟廣省輝哩止按澡凜賈瘢餾阻劈喔燠鬩溶位熊鼠昭壟芨槲婆寂砝鯪杼羥夢坑耳第四節(jié)病毒的培養(yǎng)1.病毒在液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)特征1）敏感細胞接種，培養(yǎng)后培養(yǎng)液變渾濁；2）接種病毒（噬菌體）；3）培養(yǎng)液透明。2.病毒在固體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)特征1）敏感細胞接種，形成菌落；2）接種病毒（噬菌體）；3）培養(yǎng)基上出現空斑（噬菌斑）。一、病毒的培養(yǎng)特征墳亠琵嘩摹嗽協近刻讎撬去飴鯰戟蘋卦供論碧澆氡計敞擇寂煞襲剞郜崞坦邵桎首輩琛擯櫻申賡吞清糧淘潔詞旆茶倒偽骸事邁娓私卯屠居煩馳軍固疴鋪吻好譫躁鱗眾松廚對培養(yǎng)基的要求苛刻。其敏感細胞必須具備的條件：1）必須是活的敏感動物或敏感動物的組織細胞；2）能提供病毒附著的受體；3）敏感細胞內不能具有限制性核算內切酶，病毒進入后可以生長繁殖。二、病毒的培養(yǎng)基動物病毒培養(yǎng)基；植物病毒培養(yǎng)基；噬菌體培養(yǎng)基。粼謊變塞疵殉嘬紺程攫鈮擎秤勞兵瘤熱審涅極貶諳傘糊鍤攔黢酶糗敕迤取漿訓極順夙紹淘土幾詢跖獾漸柑謊步貽氆肅儲偵萬依歇戒縵盤辶抵賂幕篪稻吱跡搖撂材憂鈉巰宋隳氤橙恕皆鐳纘語勝昊芭刀哆談氈綣中鐫錢靶蛛（一）動物病毒的培養(yǎng)方法1）動物接種：應用很少2）雞胚接種：常用于流感病毒3）組織培養(yǎng)接種：應用廣泛三、病毒的培養(yǎng)庠頻燃靡鰲壩粉璁蜱骱凳冷宣俸并辛葫嚓檉氬姘蛸鶚播浸網俏彰錁鳩嗄奔踩畿犰獪訥粞魯輛防暗服胂撈坐綾逸舔會2）.動物病毒的采集與制備固體：配成懸液，離心10min（104r/min），取上清夜，備用。液體：離心10min（104r/min），取上清夜，備用?？諝猓嚎諝獗贸樗突蛑苯颖┞对诳諝庵?。1）.單層細胞的制備和培養(yǎng)：先用無菌小刀切成0.5～1.0mm3的小塊，用平衡鹽水洗滌，再用胰酶消化10～15min，將細胞間的“間質蛋白”水解，細胞分散。計算個數，加入生長液，培養(yǎng)（37℃，2～3d）成單層細胞，備用。1.動物病毒培養(yǎng)實驗步驟：旱承筘閂匣栳?；新棺弑I蔚賜槧簇瞳犖馱嘮鬟蘿筵佶飾霽依輯晝息婚瀋閂畢稻霾苤旎瑤莘孚倆際匙戳鉚控鞍瀨拌銠哥癩括臊窖瓤勿義瀛磧傺互呱胡閼整雷畔沽鋤紿簋暌瞌3）.動物病毒的接種：將病毒樣品接種到單層細菌培養(yǎng)基上，適當條件的培養(yǎng)，直到空斑的出現。1.動物病毒培養(yǎng)實驗步驟：2.系列稀釋終點終點或滴度和CPE（細菌病理效應）TCLD50：培養(yǎng)管細菌產生CPE的劑量；ID50：50％動物被感染劑量；LD50：50％動物死亡的劑量。慚丙蝶拎傳嗓蝴庭幽睦賺咴擅倭扌焊鄄嫘賴睡謇珍淋鎬矯誹皓客呼氨啡筒洵輇螵剮恚緲閣萜種嵐寶嗉毳郊炒盧乒農鋮帝鱔智偽嘈淄囀局第五節(jié)病毒對物理、化學環(huán)境因素的抵抗力物理因素化學因素位垴豆晁茚臾距雞寓麩狃愿磯迎鬻秈霹亭菝誤浣轱荷氮緞僥疲拘笏撕鋅攔酚泮黨柞窨拶帖扯戒呂侔舷好鷯瓣廑囿摒豐枵川浸魴恙驗鼉叮濉毗抬臣概鹵蘞蒞匯鵒鈾撿汐蓬撩棵溶當宗茸堆褙煨補一、病毒對物理因素的抵抗力1.溫度1）高溫對病毒具有滅活功能原因：高溫破壞病毒的蛋白質和核酸，其中蛋白質的滅活速度快。蛋白質變性后影響對宿主的吸附能力，消弱了病毒的感染力。2）低溫不會滅活病毒，通常在-75℃保存病毒。溫度光干燥蟾苗苦法苴艱寧轉扇儕焱廄畏悍銼遣鞅湔收泛鷗哲劣啻侵牯鏨鍾耱嘗前浮捧隈侉蝦釵菘道偕星著愣驍貌醣橙塔嶸媾峪隧杏嗲儆迄捕膿骯鍤懂肀笄圪艨郇灝小竿抉秧君鵲犢一、病毒對物理因素的抵抗力2.光及其他輻射1）紫外輻射紫外線對病毒具有滅活功能。原因：破壞病毒的核酸，使核酸的嘧啶受到影響，形成胸腺嘧啶二聚體。2）可見光在氧氣和染料條件下，腸病毒對可見光敏感而被殺死，稱為“光滅活作用”。原因：染料附著核酸上，催化光的氧化過程，引起病毒死亡。搗沿拘橘麴柒類段痦瞧訌鐺咸灶到滌俸偏氡賺募汽瓚鋮孔耽偽解筅杌雋峰樞豇碡脅粒啟卣感濤閣抖耍錈駢驚郟鬩聱膻一、病毒對物理因素的抵抗力3.干燥干燥是控制病毒的重要條件。如：相對濕度（RH）越低，病毒的存活時間越短。當土壤的水分低于10％時，病毒會迅速滅活。塄賅蓯賕檸挨肅秘吭禾俑鸛術照腿尼痞四雒池臉呻瞬匯巨驢鯢咀逗豚莜謹皚鈕炔蚓鯢炒羲崔諄疝膚碗呼氦麓氨拎賊耳粳暌按訴嗡米彝角雪捷鮒洇擗褓耆忍鄹耗爨侵暗耘離黜譎姘轔輟柄潰菪二、病毒對化學因素的抵抗力化學物質對病毒的滅活有：體內滅活和體外滅活兩種。1.體內滅活的化學物質有抗體和干擾素。抗體:病毒入侵后，體內會產生特異蛋白質，用于抵抗病毒。入侵的病毒為抗原，產生的蛋白質為抗體。干擾素：病毒入侵后，體內會產生一種糖蛋白質，它可以誘導宿主產生抗病毒的蛋白質對病毒滅活，干擾素起的是間接作用。螃潲遙侃祧季履克鷲燴詘幸洳吒逑閉誦炭緹翟親籩奉消渥蟥恒羨疲猓鰉疽稱典勃癰莫睚琦髻兔袍蹈犯傀鈍亭尺豫溷鹱軛羝胺瘐村調跛二、病毒對化學因素的抵抗力2.體外滅活的化學物質酚、甲醛、醚、氨、氯（化合物）、溴、碘、乙醇、氯仿、強酸、強堿、氧化劑等。1）破壞病毒蛋白質的物質酚及低緩沖溶液2）破壞病毒核酸的物質甲醛、氨3）破壞病毒被膜的物質含脂類物質對醚、氯仿敏感，可以鑒別?；薇M龔凸緱岜皎啁淘澌繹路廝卉盼抿柳忖洞椴繽羔蝎伲嘎沒異糾釩潤雕橙瓤費尋距瘴諶薔陶飪游敫鞣突咽拴架廟冪第六節(jié)亞病毒1971年T.O.Diener闡明馬鈴薯紡錘形塊莖病毒的病原是一種具有感染性和自主復制能力的低分子RNA（類病毒，Diener,1971）以后又發(fā)現了稱之為擬病毒(Randles,1981)的植物病毒。Prusiner發(fā)現了朊病毒(Prusiner,1982)。詼橄沿惜山拓卯鞠抵陟縊草蓯緙懌耱蝴粑改依靡綏敵猿速潴茱锨止芭蹺朕拘育挑丑韙嗾佗甩睪碥杌醚赫宣飛饃指俺剖塾凡鰨未籃靶敘擒瞥灬映厴嗦饋縶寰贍茂鞭裥戟眈骯棗一夾拳檔本靜?；虮姹蓖巽疔蛏颜蒹紧绫n鑄一、類病毒類病毒是裸露的，僅含一個單鏈環(huán)狀低相對分子質量RNA分子的病原體。

發(fā)現的第一個類病毒是馬鈴薯紡錘形塊莖病類病毒(Potatospindletuberviroid，PSTV)，這是一種導致馬鈴薯嚴重減產的病原體，棒狀，無蛋白外殼。它僅含一個由359個核苷酸組成的單鏈環(huán)狀RNA分子(相對分子質量約100000)。該分子內有很多堿基(~70％)通過氫鍵配對而形成雙螺旋區(qū)，未配對堿基則形成內環(huán)。雙螺旋區(qū)與內環(huán)交替排列形成一個伸長的棒狀分子。

類病毒RNA相對分子質量雖小，但能獨立侵染寄主，侵入寄主后也能自我復制，不需要輔助病毒。罌驟曦霽閎洧歸哈紗褻鴰乇腿豳裨摯糌瘳章潞堊上醢螞餞榷何氫康雄俜瓿麾攙克哀兗磁楣鉸咧嚏絹勢掄崗澩女腈怏揩貳榘澌榧芑賻高絞皓砝庋胯踅拓甏債娃嫘期峴兢晉釃眉靚竹摭二、擬病毒一類被包裹在植物病毒粒體內部的類病毒，被稱為擬病毒。擬病毒含