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文檔簡介

實驗六

PEG誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合

(必做，驗證性實驗）了解細(xì)胞融合的基本原理,并掌握PEG誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法實驗?zāi)康母攀黾?xì)胞融合細(xì)胞融合(cellfusion)是指兩個或多個細(xì)胞通過質(zhì)膜融合形成單個雙核或多核細(xì)胞的現(xiàn)象稱為細(xì)胞融合,結(jié)果產(chǎn)生雜交細(xì)胞(hybrid),親本相同的融合細(xì)胞稱為同核體(homokaryon),反之稱為異核體(heterokaryon).細(xì)胞融合在機體正常發(fā)育的各個時期都可以觀察到.上世紀(jì)60年代首次體外人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合獲得成功以來,由于其應(yīng)用的廣泛性和廣闊前景,已逐步發(fā)展成為重要的細(xì)胞工程技術(shù).人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合主要包括:病毒和化學(xué)融合劑以及電融合和激光融合等方法.細(xì)胞融合的意義細(xì)胞融合能把親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，甚至毫無親緣關(guān)系的生物體細(xì)胞融合在一起，為遠(yuǎn)緣雜交架起了橋梁，是改造細(xì)胞遺傳物質(zhì)的有力手段。它的意義在于從此打破了僅僅依賴有性雜交重組基因創(chuàng)造新種的界限，擴大了遺傳物質(zhì)的重組范圍。PEG誘導(dǎo)雞血細(xì)胞融合PEG是乙二醇的多聚物,存在不同分子量的多聚體,它可改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu),使兩細(xì)胞相互接觸部位的膜脂雙層中脂類分子發(fā)生疏散和重組,此時相互接觸的兩細(xì)胞的胞質(zhì)溝通成為可能,從而造成細(xì)胞之間發(fā)生融合.PEG介導(dǎo)細(xì)胞融合,其融合效果受以下幾種因素的影響:分子量及濃度、pH值、處理時間和溫度等.以雞血細(xì)胞為實驗材料，經(jīng)PEG誘導(dǎo)處理后，形成具有二個或多個核的細(xì)胞，可視為融合細(xì)胞.

實驗原理實驗材料及試劑材料：雞靜脈血試劑：生理鹽水；

GKN液；

Alsver液；

50%聚乙二醇采取雞血1200r/min,離心三次5min,5min,10min取混合液1mL混合液取血細(xì)胞沉淀取適量稀釋液滴加于載玻片鏡檢滴加PEG(稀釋液的1/2)靜置3分鐘加入適量GKN稀釋加入4mL生理鹽水加入Alsver液混合(1:4v/v)實驗操作流程實驗結(jié)果觀察時注意不同程度的融合現(xiàn)象。通常分為五個階段：兩細(xì)胞（或多細(xì)胞）接觸，粘連；細(xì)胞膜形成穿孔；兩細(xì)胞（或多細(xì)胞）的細(xì)胞質(zhì)連通；通道擴大，兩細(xì)胞（或多細(xì)胞）連成一體；細(xì)胞完全合并，形成一個含有兩個或多個核的細(xì)胞。

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