液質(zhì)AB3500操作規(guī)程

一、開(kāi)關(guān)機(jī)AA、開(kāi)機(jī)1.打開(kāi)UPS電源，打開(kāi)氮?dú)獍l(fā)生器（氣瓶），確認(rèn)Curtaingas的輸入壓力為0.4MPa，gas1/2為0.7MPa，exhuast為0.4MPa。2.打開(kāi)機(jī)械泵電源開(kāi)關(guān)（5500系列直接打開(kāi)質(zhì)譜主機(jī)電源，儀器自動(dòng)啟動(dòng)機(jī)械泵）3.等機(jī)械泵工作至少30min5.打開(kāi)質(zhì)譜主機(jī)電源開(kāi)關(guān)6.過(guò)夜抽真空BB、關(guān)機(jī)1.停止輸液：關(guān)停針泵或液相泵，或斷開(kāi)輸液管線（一般質(zhì)譜主機(jī)Standby后液相系統(tǒng)也自動(dòng)待機(jī)，輸液泵自動(dòng)關(guān)停，但建議操作人員再次確認(rèn)，必須保證沒(méi)有任何液體再泵入質(zhì)譜）2.使儀器待機(jī)，并滅活配置2.關(guān)閉質(zhì)譜儀主機(jī)電源開(kāi)關(guān)（5500系列只需按下電源開(kāi)關(guān)旁的VENT按鍵排放真空）3.機(jī)械泵繼續(xù)工作至少30min4.關(guān)閉機(jī)械泵上的電源開(kāi)關(guān)5.關(guān)閉氣體發(fā)生器或氣瓶二.儀器校準(zhǔn)與調(diào)諧本節(jié)包括如何在Analyst軟件中進(jìn)行手動(dòng)質(zhì)量校準(zhǔn)，一般儀器在開(kāi)關(guān)機(jī)后才需要做調(diào)諧或每個(gè)季度例行調(diào)諧。11、打開(kāi)analyst軟件，雙擊HardwareConfigure，在硬件配置HardwareConfigure菜單下單擊massSpecOnly(只連質(zhì)譜機(jī))，單擊Activeprofile激活儀器。硬件配置表中massSpecOnly出現(xiàn)綠勾后，表示質(zhì)譜儀主機(jī)與計(jì)算機(jī)通訊正常，關(guān)閉HardwareConfigurationEditor。3、雙擊左邊工具菜單NavigationBar中的ManualTuning，打開(kāi)一個(gè)空白質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置及運(yùn)行窗口，進(jìn)入手動(dòng)調(diào)諧模式：4、在project工具條中選擇installation--開(kāi)頭的項(xiàng)目文件夾5、點(diǎn)擊Fileopen6、選擇AcquisitionMethod打開(kāi)四極桿校準(zhǔn)方法文件列表(如：Q1PosPPG.dam，Q1NegPPG.dam，Q3PosPPG.dam，Q3NegPPG.dam方法文件，文件名有可能不同)。根據(jù)要校準(zhǔn)的目標(biāo)(Q1正離子、Q1負(fù)離子、Q3正離子、Q3負(fù)離子)選擇相應(yīng)的方法打開(kāi)。7、該方法會(huì)出現(xiàn)在質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置及運(yùn)行窗口：8、用針泵進(jìn)質(zhì)量校準(zhǔn)溶液，調(diào)離子源噴霧針位置到5mm處。對(duì)于不同儀器、測(cè)定極性，要用不同的PPG校準(zhǔn)溶液，針泵流速10ul/min9、采集PPG標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜數(shù)據(jù)：在質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置及運(yùn)行窗口中點(diǎn)擊Start，數(shù)據(jù)采集時(shí)在窗口下部出現(xiàn)兩個(gè)實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)圖：左邊TIC(總離子流圖)，右邊質(zhì)譜圖。待采集完成后，點(diǎn)擊resolution，再點(diǎn)擊advanced，彈出分辨率窗口，再在右邊質(zhì)譜圖中按鼠標(biāo)右鍵出現(xiàn)一菜單，選菜單中Openfile：10、單擊其中任一個(gè)PPG質(zhì)譜峰的圖(此圖邊框變藍(lán))，然后在在工具條下點(diǎn)擊Calibratefromspectrum按鈕（）11、在出現(xiàn)的MassCalibrationOptions窗口中，從Standard下拉菜單選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)品類型：PPGsPos(正離子)或PPGsNeg(負(fù)離子)；然后點(diǎn)擊12、儀器校準(zhǔn)結(jié)果圖中有三欄:上欄顯示此次校準(zhǔn)與理論值的質(zhì)量偏差(massshift)，中欄顯示所有PPG校準(zhǔn)峰的半峰寬(分辨率)，下欄顯示此次校準(zhǔn)與上次校準(zhǔn)所有PPG校準(zhǔn)點(diǎn)峰強(qiáng)度變化的百分比。AA、手動(dòng)調(diào)整分辨率目標(biāo)是讓每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)都應(yīng)該落在兩條虛線之間，如果某些PPG峰寬超出分辨率范圍，應(yīng)進(jìn)行手動(dòng)調(diào)整。調(diào)整Offset值會(huì)影響分辨率，以中心實(shí)線為基準(zhǔn)，半峰寬偏大的調(diào)大offset值（考慮正負(fù)），半峰寬偏小的調(diào)小offset值（考慮正負(fù)），對(duì)Offset值調(diào)整幅度為每次0.003，改變offset值以后按Apply鈕。關(guān)閉當(dāng)前其他窗口回到采集窗口，重新點(diǎn)擊start采集數(shù)據(jù)（在開(kāi)始采數(shù)據(jù)時(shí)按Yes確認(rèn)要保存這些修改），重復(fù)9-12步直到所有點(diǎn)的分辨率合乎分辨率范圍。B、質(zhì)量校正當(dāng)offset值設(shè)定合適，所有PPG離子的分辨率在倆虛線范圍內(nèi)后，進(jìn)行最后的質(zhì)量校準(zhǔn)。再采集一次PPG數(shù)據(jù)（重復(fù)9到11步）；在MassCalibrationReport按Updatemasscalibration按鈕進(jìn)行更新，軟件系統(tǒng)會(huì)提示是否用新的校準(zhǔn)曲線替換已存在的校準(zhǔn)曲線，當(dāng)出現(xiàn)提示時(shí)，回答“YES”三.化合物參數(shù)優(yōu)化本節(jié)描述如何用針泵連續(xù)進(jìn)樣(10ul/min)，在ManualTuning窗口下優(yōu)化化合物參數(shù)。11、找母離子：Q1MS全掃描A、選擇你的project；雙擊NavigationBar下的Manual--Tuning；從ScanType下拉菜單中選擇：Q1Scan(Q1)；選擇極性：Positive(正離子)、Negative（負(fù)離子）；勾選Center/with選項(xiàng)；設(shè)置采集時(shí)間Duration:5min；在表格中Center（Da）欄填入待優(yōu)化化合物的分子量，With(Da)欄填6，Time（sec）填1；左側(cè)Source/Gas項(xiàng)用以下推薦值：CUR10，IS:5500(正離子)或-4500（負(fù)離子），TEMGS115，GS20，iheon；Compound項(xiàng)用以下推薦值：DP60，EP10或默認(rèn)值；B、運(yùn)行針泵（10ul/min）,點(diǎn)擊start采集數(shù)據(jù)，待左側(cè)窗口TIC序號(hào)穩(wěn)定后再繼續(xù)采集1min，點(diǎn)擊stop，在TIC圖上按住鼠標(biāo)左鍵托選最后1min譜圖，再雙擊選中的譜圖，在下方彈出窗口記錄目標(biāo)化合物峰的中心對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)分子量作為該化合物的準(zhǔn)確分子量。2、找子離子：ProductIonScan（MS2）A、在當(dāng)前方法文件的ScanType下選擇ProductIonScan（MS2）；去除Center/with選項(xiàng)；在Productof欄填入上一步找到的母離子的準(zhǔn)確分子量；在表格中start(Da)欄填50，stop(Da)欄填入質(zhì)量大于母離子分子量即可，Time（sec）填1；檢查Source/Gas項(xiàng)是否與Q1掃描時(shí)相同（CAD默認(rèn)值即可)；Compound項(xiàng)設(shè)定DP60，EP10或默認(rèn)值，CE5，CXP15或默認(rèn)值；B、點(diǎn)擊start采集數(shù)據(jù)，手動(dòng)調(diào)節(jié)CE值（每次增加5），直到右側(cè)質(zhì)譜圖中母離子的信號(hào)約只有最強(qiáng)碎片離子信號(hào)三分之一左右，再保持繼續(xù)采集1min，點(diǎn)擊stop，在左側(cè)TIC圖上按住鼠標(biāo)左鍵托選最后1min譜圖，再雙擊選中的譜圖，在下方平均譜圖中記錄兩個(gè)最強(qiáng)的碎片離子分子量。3、優(yōu)化離子對(duì)參數(shù)：MRMA、在當(dāng)前方法文件的ScanType下選擇MRM；在表格中Q1欄填母離子分子量，Q3(Da)欄子離子分子量，Time（msec）填50，ID欄填化合物名稱（信號(hào)強(qiáng)的離子對(duì)名稱后空格加1，信號(hào)弱的為2），每個(gè)離子對(duì)填一行；檢查Source/Gas項(xiàng)是否與Q1掃描時(shí)相同（CAD默認(rèn)值即可)；B、點(diǎn)擊EditRamp鈕，出現(xiàn)以下窗口，在parameter下拉菜單里選擇DP,用默認(rèn)值，點(diǎn)擊OK.C、點(diǎn)擊start開(kāi)始優(yōu)化，在右側(cè)質(zhì)譜圖上記錄峰輪廓最高的位置對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)的DP值，填入Compound的DP項(xiàng)。D、點(diǎn)擊EditRamp鈕，在parameter下拉菜單里選擇CE,用默認(rèn)值，點(diǎn)擊OK，點(diǎn)擊start開(kāi)始優(yōu)化，采集結(jié)束后在右側(cè)質(zhì)譜圖上按鼠標(biāo)右鍵并選擇相應(yīng)的離子對(duì)，記錄其峰輪廓最高的位置對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)的CE值，再在上方表格內(nèi)點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵選擇CE單擊，表格中則會(huì)顯示不同離子對(duì)的CE值一欄，填入剛才記錄的各離子對(duì)的最優(yōu)CE,最后點(diǎn)擊菜單Filesave即可保持該化合物參數(shù)，填入方法名稱即可.四、建立LC--MS方法（以島津液相為例）1、開(kāi)HPLC電源，將HPLC系統(tǒng)接上柱子，將出口管線與離子源連好。調(diào)離子源噴霧針位置到2mm處，雙擊HardwareConfigure，在硬件配置菜單下單擊4000+LC(液相與質(zhì)譜聯(lián)用)，單擊Activeprofile激活儀器。2、選擇你的Project；雙擊Buildacquisitionmethod，彈出方法模板。在模板左側(cè)點(diǎn)擊acquisitionmethod，模板右邊顯示對(duì)應(yīng)的參數(shù)，確認(rèn)synchronizationmode選擇LCSync。3、點(diǎn)擊方法模板左側(cè)的MRM,在模板右側(cè)ScanType下選擇MRM；在polarity下選擇化合物極性：Positive(正離子)、Negative（負(fù)離子）；Duration處填寫與液相分離相同的時(shí)間；在表格中Q1欄填母離子分子量，Q3(Da)欄子離子分子量，Time（msec）填50，ID欄填化合物名稱（信號(hào)強(qiáng)的離子對(duì)名稱后空格加1，信號(hào)弱的為2），在表格中右鍵分別點(diǎn)擊DP、EP、CE、CXP，填入之前優(yōu)化好的DP、CE；最后點(diǎn)擊Editparameter設(shè)置離子源參數(shù)：Source/Gas項(xiàng)用以下推薦值：CUR25，IS:5500(正離子)或-4500（負(fù)離子），TEM550，GS155，GS255，iheon；4、點(diǎn)擊模板左邊的shimadzuLCsystem，在右邊的pumps欄下，設(shè)置pumpingmode為binaryflow，total流速0.2-0.5，泵系統(tǒng)最大壓力；在timeprogram欄下設(shè)置液相梯度。最后點(diǎn)擊保存按鈕保存此方法并關(guān)閉方法窗口。五、建立采樣列表1、雙擊Buildacquisitionbatch，在右邊窗口sample項(xiàng)內(nèi)點(diǎn)擊addset，再點(diǎn)擊addsample，在彈出的窗口內(nèi)的number（進(jìn)樣樣品數(shù)）處填入需要進(jìn)樣的樣品個(gè)數(shù)，點(diǎn)ok。2、在加入的樣品列表內(nèi)依次設(shè)置samplename（樣品名稱）、rackcode（樣品架類型）、viaposition（樣品瓶的位置）、acquisition下拉菜單內(nèi)選擇之前建立的LC-MS方法、inj.volunme（進(jìn)樣體積）。3、在quantitation項(xiàng)下，在每個(gè)樣品后的下拉菜單內(nèi)選擇樣品類型，標(biāo)準(zhǔn)曲線