DB13-T1384-1-2011飼料中4種β-內(nèi)酰胺類藥物的測定

ICS65.120

B46

DB13

河北省地方標準

DB13/T1384.1—2011

飼料中4種β－內(nèi)酰胺類藥物的測定

Determinationoffourkindsofβ-lactamsinfeed

DB13/T1384.1—2011

飼料中4種β－內(nèi)酰胺類藥物的測定

1范圍

本標準規(guī)定了飼料中青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林4種β-內(nèi)酰胺類藥物的液相色譜-

串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本標準適用于飼料中青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林的測定。

本標準的方法檢出限：青霉素G、青霉素V為1.0μg/kg；氨芐西林、阿莫西林為2.0μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。

3原理

試樣中的4種β-內(nèi)酰胺類藥物殘留，用OasisHLB或相當?shù)墓滔噍腿≈鶅艋?，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

儀測定，外標法定量。

4試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1甲醇：色譜純。

4.2乙腈：色譜純。

4.3乙酸：優(yōu)級純。

4.4乙腈+水（1＋3）：量取25mL乙腈與75mL水混勻。

4.5OasisHLB固相萃取柱或相當者：500mg，6mL。使用前分別用5mL甲醇和10mL水預處理，

保持柱體濕潤。

4.6青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林：純度≥99％。

4.7青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標準儲備溶液：準確稱取適量的每種標準物質(zhì)，分別

用乙腈配制成濃度為1.0mg/mL的標準儲備溶液。儲備液貯存在-18℃冰柜中。

4.8青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標準工作溶液：根據(jù)需要吸取適量青霉素G、青霉素

V、氨芐西林、阿莫西林標準儲備溶液，用空白樣品稀釋成適當濃度的基質(zhì)混合標準工作溶液。

5儀器

5.1液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

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5.3漩渦混勻器。

5.4固相萃取真空裝置。

5.5微量進樣器：25μL，100μL。

5.6刻度樣品管：5mL，精度為0.1mL。

5.7真空泵：真空度應達到80kPa。

5.8pH計：測量精度0.01。

5.9氮吹儀。

5.10高速離心機。

6測定步驟

6.1試樣溶液的制備

稱取5g試樣（精確到0.01g）置于100mL離心管中，加人45mL去離子水，于漩渦混勻器上快

速混合5min，以5000r/min離心10min，將上清液移至OasisHLB柱中，以小于或等于3mL/min的

流速通過固相萃取柱后，用5mL水洗柱，棄去全部流出液。在65kPa的負壓下，減壓抽干20min，最

后用3mL甲醇洗脫，收集洗脫液于刻度樣品管中，于40℃水浴中用氮吹儀吹干，用乙腈定容至1mL，

搖勻后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

6.2測定

6.2.1液相色譜條件

色譜柱：SunFireTMC183.5μm，150mm×2.1mm或相當者。

流動相及流速見表1。

柱溫：30℃。

進樣量：20μL。

表1液相色譜梯度洗脫條件

時間/min流速/（μL/min）水（含0.4％乙酸）/（％）乙腈/（％）

0.0020060.040.0

15.0020035.065.0

15.0120060.040.0

25.0120060.040.0

6.2.2質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）。

掃描方式：正離子掃描。

檢測方式：多反應監(jiān)測。

定性離子對、定量離子對，見表2。

其余質(zhì)譜條件見附錄A。

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DB13/T1384.1—2011

表2定性離子對與定量離子對

青霉素G青霉素V氨芐西林阿莫西林

定性離子對335/160351/160350/192366/114

（m/z）335/176351/192350/160366/208

定量離子對

335/160351/160350/160366/208

（m/z）

6.2.3液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測定

6.2.3.1定性測定

在相同試驗條件下，樣品中待測物質(zhì)與基質(zhì)標準溶液中對應物質(zhì)的保留時間偏差在±2.5％之內(nèi)；

樣品色譜圖中各定性離子對相對豐度與濃度接近的基質(zhì)標準溶液的色譜圖中離子相對豐度相比，若偏差

不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在該殘留。

表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度＞50＞20～50＞10～20≤10

允許的最大偏差±20±25±30±50

6.2.3.2定量測定

在儀器最佳工作條件下，用青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標準儲備溶液配成的基質(zhì)混

合標準溶液分別進樣，以標準工作溶液濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。用標準

工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林的響應值均應在儀器

測定的線性范圍內(nèi)。

在上述色譜條件下，青霉素G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林的總離子流圖與保留時間見附錄B。

6.3平行試驗

按上述步驟，對同一試樣進行平行試驗測定。

6.4空白試驗

除不稱取試樣外均按上述分析步驟進行。

7結(jié)果計算

從標準工作曲線上得到試樣中相應的β-內(nèi)酰胺類藥物濃度后，結(jié)果按公式(1)計算：

c×V×1000

X=………………（1）

m×1000

式中：

X——試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）。

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c——從標準工作曲線得到的試樣溶液中被測組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。

V——試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）。

m——最終試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

注：計算結(jié)果需將空白值扣除。

8精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術平均值的15％。

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AA

附錄A

（資料性附錄）

參考質(zhì)譜條件

A.1電噴霧電壓：5500V。

A.２霧化氣壓力：0.055MPa。

A.３氣簾氣壓力：0.079MPa。

A.４輔助氣流速：6L/min。

A.５離子源溫度：400℃。

A.６去簇電壓（DP），聚焦電壓（FP）、碰撞能量（CE）及碰撞室出口電壓（CXP），見表A.1。

表A.1去簇電壓，聚焦電壓、碰撞能量及碰撞室出口電壓

定性離子對定量離子對碰撞能量去簇電壓聚焦電壓碰撞室出口電

名稱

（m/z）（m/z）vvv壓/v

335/16020

青霉素G335/1604520011

335/17623

351/16020

青霉素V351/1604020011

351/19215

350/19223

氨芐西林350/1602020011

350/16020

366/11430

阿莫西林366/2082120011

366/20819

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BB

附錄B

（資料性附錄）

四種β－內(nèi)酰胺類藥物標準物質(zhì)的總離子流圖

1——阿莫西林，2.49min；

2——氨芐西林，9.80min；

3——青霉素G，12.70min；

4——青霉素V，13.49min。

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前言

本標準按照GB/T1.1－2009給出的規(guī)則起草。

本標準由河北省質(zhì)量技術監(jiān)督局提出。

本標準起草單位：河