抗體偶聯(lián)藥物藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則

2 5 6 7 1靶向特異性抗原的抗體或抗體片段與有效載荷（payload）通過連接子（linker）偶聯(lián)而成的一類創(chuàng)新型抗體藥物。與傳統(tǒng)抗體藥物相比，ADC產(chǎn)品兼具傳統(tǒng)小分子藥物強(qiáng)效作用及抗體藥物的靶向性，以降低全身毒性并更有選擇性地將有效載荷遞送至腫瘤細(xì)胞、腫瘤微環(huán)境或其他靶細(xì)胞中。近年來，隨著抗體、有效載荷、連接子、偶聯(lián)技術(shù)和分析ADC產(chǎn)品的研發(fā)，制定本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則基于當(dāng)前提出建議性技術(shù)要求，旨在為研發(fā)單位提供技術(shù)指導(dǎo)。申請人亦可基于產(chǎn)品研發(fā)的實(shí)際情況，采用其他等同或更有效的技術(shù)和方法開展研究，但是應(yīng)符合藥物研發(fā)的規(guī)律，并提供證明其科學(xué)性和適用性的資料。隨著技術(shù)的發(fā)展、認(rèn)知的深入和經(jīng)驗(yàn)的積累，本指導(dǎo)原則的相關(guān)內(nèi)容將逐步本指導(dǎo)原則主要適用于由抗體/抗體片段和有效載荷2其他偶聯(lián)藥物如抗體偶聯(lián)核素藥物、多肽偶聯(lián)藥物、抗體的結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣，對于已有成熟的技術(shù)指導(dǎo)原則覆蓋的組成部分（如小分子部分、抗體部分等），本指導(dǎo)原則將不ADC產(chǎn)品的藥學(xué)研究應(yīng)符合《中華人民共和國藥品管理法》、《藥品注冊管理辦法》、《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）的相關(guān)要求，臨床試驗(yàn)用樣品的生產(chǎn)應(yīng)符合現(xiàn)行版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》臨床試驗(yàn)產(chǎn)品設(shè)計(jì)方面，ADC產(chǎn)品雖然通常被認(rèn)為是大分子藥物，但其具有大分子和小分子的雙重屬性，靶抗原、抗體、全性和有效性的關(guān)鍵因素。因此，ADC產(chǎn)品的安全性和有效性有賴于對上述組分的慎重選擇、多方面優(yōu)化以及合理的組合，需從靶向性、在體內(nèi)循環(huán)中的穩(wěn)定性以及生物學(xué)生產(chǎn)工藝方面，ADC產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝通常涉及裸抗生產(chǎn)環(huán)節(jié)。產(chǎn)品開發(fā)過程中，可基于“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”和3“風(fēng)險評估”等理念，開展工藝設(shè)計(jì)和工藝開發(fā)工作。需制劑）作為一個整體，綜合考慮整體生產(chǎn)工藝的雜質(zhì)、病處方開發(fā)方面，與抗體藥物相比，ADC分子可能具有疏水性較高、表面電荷不規(guī)則、構(gòu)象穩(wěn)定性差、異質(zhì)性高等特點(diǎn)，給處方開發(fā)帶來了更多的復(fù)雜性和不穩(wěn)定因素。質(zhì)，偶聯(lián)過程也可能影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性（如導(dǎo)致構(gòu)象變化、聚集和降解等），因此，制劑處方開發(fā)需找到合適的配方，平衡裸抗、小分子和偶聯(lián)的穩(wěn)定性，密切關(guān)注制劑質(zhì)量研究和控制方面，ADC產(chǎn)品的分子結(jié)構(gòu)、作用機(jī)制和質(zhì)量研究與控制策略均具有其獨(dú)特性，不同產(chǎn)品因設(shè)計(jì)理念和生產(chǎn)工藝不同，質(zhì)量研究和質(zhì)量控制方面也存在雜、異質(zhì)性強(qiáng)、包含多種產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)，除了抗體藥物具有的關(guān)鍵質(zhì)量屬性外，還會引入與小分子、偶聯(lián)工藝等相關(guān)的其他關(guān)鍵質(zhì)量屬性，需采用適宜的技術(shù)手段或?qū)⒍喾N分析手段相結(jié)合的策略，將結(jié)構(gòu)特性、純度和雜質(zhì)、異質(zhì)性、生物學(xué)活性、有效載荷分布等關(guān)鍵質(zhì)量4ADC產(chǎn)品作為創(chuàng)新型抗體藥物，研發(fā)和生產(chǎn)需遵循藥物研發(fā)的一般規(guī)律，在保證臨床基本安全性的前提下逐步完善、持續(xù)優(yōu)化。根據(jù)藥物研發(fā)生命周期的規(guī)律，在不同研發(fā)階段以及上市后的過程中，采用基于科學(xué)和風(fēng)險評估臨床試驗(yàn)申報階段，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注影響臨床安全性的因素，以保障臨床受試者的安全。例如，外源因子的控制，應(yīng)從起始物料（如細(xì)胞基質(zhì)、其他生產(chǎn)用原材料等）、生產(chǎn)過程控制、放行檢測等綜合考慮，避免外源因子的污染；臨床樣品制備工藝應(yīng)具備初步的穩(wěn)健性，建立初步的中間體控制項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)，重點(diǎn)關(guān)注臨床樣品生產(chǎn)過程對病毒安全、微生物安全、無菌保障等方面的控制；采用代表性樣品開展質(zhì)量研究，安全性和活性等分析方法的開發(fā)和確認(rèn)，結(jié)合平臺經(jīng)驗(yàn)、產(chǎn)品知識以及多批次檢測數(shù)據(jù)擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，基于產(chǎn)品特點(diǎn)和生產(chǎn)工藝對雜質(zhì)進(jìn)行合理控制；開展初步的穩(wěn)定性研究，研究結(jié)果應(yīng)能支持臨床試驗(yàn)的開展；結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)選擇合適的容器密封系統(tǒng)，基于穩(wěn)定性考察數(shù)據(jù)和供應(yīng)商的可提取物數(shù)據(jù)等對相容性進(jìn)行風(fēng)險評估。非臨床研究是評估產(chǎn)品在人體使用安全性的重要參考依據(jù)，需特別關(guān)注臨床試驗(yàn)用樣品與非臨床研究用樣品在生產(chǎn)工藝和質(zhì)量方面的對比或橋接分析，原則上，臨床試驗(yàn)用樣5品的質(zhì)量應(yīng)不低于非臨床研究用樣品的質(zhì)量或不低于經(jīng)過臨床試驗(yàn)期間，基于工藝開發(fā)和對產(chǎn)品質(zhì)量屬性的理解，需逐步確認(rèn)關(guān)鍵工藝步驟和工藝參數(shù)、生產(chǎn)過程中的控制項(xiàng)目和關(guān)鍵質(zhì)量屬性等，建立穩(wěn)定的生產(chǎn)工藝和完善的質(zhì)量控制體系。研發(fā)期間，生產(chǎn)用原材料、生產(chǎn)工藝、品的結(jié)構(gòu)、生產(chǎn)工藝和供應(yīng)鏈等的復(fù)雜性對評估變更的潛在影響提出了額外的挑戰(zhàn)，變更計(jì)劃的評估和實(shí)施應(yīng)更為謹(jǐn)慎。各類變更方案的實(shí)施需建立在與研發(fā)階段相適應(yīng)的可比性研究基礎(chǔ)上，可比性研究應(yīng)基于風(fēng)險評估原則并參考ICHQ5E等相關(guān)指導(dǎo)原則的要求進(jìn)行，靈敏的分析方法合理評估變更對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，尤其應(yīng)關(guān)注上游工藝變更造成的裸抗、小分子的質(zhì)量屬性的差異上市申報階段，經(jīng)過工藝開發(fā)和系統(tǒng)完整的工藝驗(yàn)證，確定關(guān)鍵工藝步驟和關(guān)鍵工藝參數(shù)，并對關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行控制，以確保商業(yè)化生產(chǎn)工藝能持續(xù)、穩(wěn)定地生產(chǎn)出符合目標(biāo)質(zhì)量的產(chǎn)品。藥學(xué)研究數(shù)據(jù)應(yīng)能支持產(chǎn)品的安全、有效和質(zhì)量可控性。同時，制定上市后生產(chǎn)工藝持續(xù)確認(rèn)6ADC產(chǎn)品是大分子和小分子結(jié)合的創(chuàng)新型抗體藥物，從產(chǎn)品的設(shè)計(jì)、生產(chǎn)工藝和處方開發(fā)、質(zhì)量研究和控制、穩(wěn)定性研究等方面均面臨諸多挑戰(zhàn)。產(chǎn)品的開發(fā)從起始物料、工藝開發(fā)到質(zhì)量控制等都涉及化學(xué)和生物學(xué)等多學(xué)科參與，其分子結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)過程復(fù)雜多樣，產(chǎn)品異質(zhì)性高，體形式、有效載荷、連接子以及新的偶聯(lián)策略也在不斷涌化的特點(diǎn)。此外，ADC產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝包含多個生產(chǎn)環(huán)節(jié)，存在較高的變更復(fù)雜性。因此，需基于產(chǎn)品和工藝的特點(diǎn)，險管理理念，科學(xué)利用風(fēng)險評估工具，從分子設(shè)計(jì)、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性等多因素進(jìn)行風(fēng)險評估。根據(jù)風(fēng)險評估結(jié)果，結(jié)合對產(chǎn)品和工藝的理解制定相應(yīng)的風(fēng)險控制策略。風(fēng)險控制策略的修訂應(yīng)貫穿于產(chǎn)品的全生命周期，隨著新知識、生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的積累和對產(chǎn)品質(zhì)量屬性理解的深料，包括起始物料、生產(chǎn)過程中使用或添加的物料（如培養(yǎng)基及其添加成分、純化試劑、偶聯(lián)試劑、偶聯(lián)酶等）、輔料以及生產(chǎn)用耗材（如培養(yǎng)袋、儲液袋、移液管路、濾7膜等）等。生產(chǎn)用物料與產(chǎn)品的質(zhì)量、安全性和有效性密切相關(guān)，應(yīng)建立良好、規(guī)范的質(zhì)量管理體系，并參照《中生產(chǎn)過程中使用的細(xì)胞基質(zhì)應(yīng)符合《中國藥典》通則“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理及質(zhì)量控制”和“生物制品生產(chǎn)檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”的相關(guān)要求；使用的其他生產(chǎn)用物料應(yīng)符合《中國藥典》通則“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制”和ICHQ11的相關(guān)要求。對于化學(xué)結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝較為復(fù)雜的起始物料，應(yīng)結(jié)合起始物料的生產(chǎn)工藝，對其質(zhì)量進(jìn)行全面的分析和合理生產(chǎn)過程中使用的耗材和容器，如一次性生物反應(yīng)器、超濾膜包、過濾器、管路等，應(yīng)具有穩(wěn)定的物理和化學(xué)特性，耗材與直接接觸的溶液、中間產(chǎn)物等有良好的相容性?；诤牟牡牟馁|(zhì)、使用階段、供應(yīng)商檢測報告等開展風(fēng)險評估或相應(yīng)的相容性研究。此外，ADC生產(chǎn)過程中如果需要添加一定比例的有機(jī)溶劑，則生產(chǎn)過程中直接接觸的材料（如一次性反應(yīng)袋、超濾膜包、生產(chǎn)設(shè)備等）應(yīng)能夠耐受有機(jī)溶劑且浸出物需符合相關(guān)要求，同時需關(guān)注浸出物8（一）生產(chǎn)工藝開發(fā)ADC產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝通常包括裸抗生產(chǎn)、小分子生產(chǎn)、ADC原液生產(chǎn)和制劑生產(chǎn)等多個生產(chǎn)環(huán)節(jié)。應(yīng)遵循藥物生（QualityTargetProductProfi工藝與質(zhì)量之間的相關(guān)性，逐步完善工藝，完成從實(shí)驗(yàn)室到商業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的開發(fā)過程，逐步確定關(guān)鍵質(zhì)量屬性、工藝步驟和關(guān)鍵工藝參數(shù)。基于風(fēng)險分析，建立全過程的控制策略，合理設(shè)定生產(chǎn)過程中的控制，尤其是生產(chǎn)過程中外源因子污染和關(guān)鍵中間產(chǎn)物的質(zhì)量控制。產(chǎn)品生命周期中，生產(chǎn)工藝應(yīng)隨著工藝技術(shù)的進(jìn)步和對產(chǎn)品理解的深入不斷優(yōu)化。工藝優(yōu)化應(yīng)基于變更類型和開發(fā)階段，充分評估變更對產(chǎn)品安全性和有效性的影響，參考相關(guān)指導(dǎo)原則針對工藝優(yōu)化開展相應(yīng)的可比性研究，以保證產(chǎn)品質(zhì)量。對于光敏感性的小分子，在特定光照波段或高強(qiáng)度照射下會發(fā)生化學(xué)結(jié)構(gòu)的變化，而這種化學(xué)結(jié)構(gòu)變化可能會要在生產(chǎn)過程中采取適當(dāng)?shù)拇胧ㄈ缟a(chǎn)環(huán)境采用黃光替代白光，中間體儲存容器避光等），并在制劑灌裝過程以小分子（包括半合成來源）的生產(chǎn)工藝開發(fā)，應(yīng)參照9化學(xué)原料藥的要求開展，可參考《化學(xué)藥物原料藥制備和計(jì)連接子、有效載荷和ADC分子的合成/工藝路線，參照并制定小分子的合成工藝和質(zhì)量控制策略。對于含有多手性中心的連接子和有效載荷，應(yīng)關(guān)注手性中心是否會影響ADC產(chǎn)品的生物學(xué)活性，對手性雜質(zhì)進(jìn)行合理控制。小分的安全性、有效性等方面的影響，通過風(fēng)險評估的方式進(jìn)裸抗的生產(chǎn)工藝開發(fā)應(yīng)參考《中國藥典》、《人用單際通用有關(guān)技術(shù)要求開展研究。裸抗與常規(guī)抗體藥物生產(chǎn)工藝類似，但是部分基因工程改造過的用于定點(diǎn)偶聯(lián)的裸抗生產(chǎn)工藝可能會由于其修飾基團(tuán)的特點(diǎn)而有所不同。因此，裸抗除了需關(guān)注常規(guī)抗體生產(chǎn)的風(fēng)險點(diǎn)外，還需要從考慮裸抗的N末端賴氨酸殘基水平以及裸抗溶液中的氨基酸注裸抗的半胱氨酸相關(guān)變異體（如二硫鍵、三硫鍵、游離巰基等）水平。在裸抗（特別是雙特異抗體或多特異抗體）的工藝開發(fā)和控制中，還需關(guān)注產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（如二硫鍵響。對于裸抗溶液組分的開發(fā)，除了需要確保裸抗本身的穩(wěn)定性之外，還需要考慮與后續(xù)偶聯(lián)工藝的兼容性，避免計(jì)的理念，進(jìn)行工藝設(shè)計(jì)和開發(fā)工作。ADC原液的生產(chǎn)工抗體修飾部分根據(jù)采用的偶聯(lián)技術(shù)不同可能各不相同，抗體修飾的主要目的是在抗體上引入可供反應(yīng)的活性化學(xué)基團(tuán)，如通過還原劑打開抗體二硫鍵產(chǎn)生活性自由巰基；也可通過生物酶對糖鏈進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，在糖鏈上引入活性的關(guān)鍵步驟，因此需要根據(jù)偶聯(lián)技術(shù)和修飾反應(yīng)特點(diǎn)，開發(fā)合適的生產(chǎn)工藝，選擇和設(shè)定合理的中控策略。如修飾后裸抗需要純化的，應(yīng)引入合理的純化工藝；如在修飾過程中的試劑有引入外源病毒因子風(fēng)險的，其純化工藝應(yīng)充除研究；如修飾后裸抗按中間體管理的，還應(yīng)制定合理的中間體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并開展相應(yīng)的穩(wěn)定性研究，設(shè)定有效期等。偶聯(lián)反應(yīng)相對于抗體修飾步驟而言，有多個比較相似的技術(shù)平臺。通常是利用快速的化學(xué)反應(yīng)或酶促反應(yīng)將小分子偶聯(lián)在修飾后的裸抗的活性位點(diǎn)上，或者利用化學(xué)反應(yīng)和酶促反應(yīng)的特異性直接將小分子偶聯(lián)至裸抗的特定位點(diǎn)上。在此過程中，必須考慮裸抗、連接子和有效載荷的不同物理和化學(xué)特性。如抗體在緩沖水溶液中更穩(wěn)定，而大多數(shù)小分子是疏水性的，因此通常會使用有機(jī)溶劑（如二甲基亞砜、二甲基乙酰胺、乙腈等）輔助提高小分子在水溶液中的溶解性，以提高偶聯(lián)反應(yīng)的效率，但有機(jī)溶劑的使用可能會導(dǎo)致裸抗的不穩(wěn)定。偶聯(lián)反應(yīng)需特別關(guān)注有機(jī)溶劑的選擇，小分子的投料比例、pH、溫度、裸抗?jié)舛绕返母弋愘|(zhì)性，建議關(guān)注偶聯(lián)工藝中抗體二硫鍵的還原位點(diǎn)和還原比例（如適用）、偶聯(lián)位點(diǎn)和結(jié)合數(shù)量的控制、有效載荷的分布、雜質(zhì)的偶聯(lián)情況等，從而確定合理的工藝參數(shù)。定點(diǎn)偶聯(lián)應(yīng)基于其定點(diǎn)偶聯(lián)原理，關(guān)注可能的非目標(biāo)位點(diǎn)偶聯(lián)發(fā)生概率及其他副反應(yīng)情況。如涉及到酶催化的反應(yīng)，還應(yīng)關(guān)注酶催化劑引入的安全性風(fēng)險及其在ADC原液中的殘留風(fēng)險。若偶聯(lián)反應(yīng)中出現(xiàn)過量投料的操作，需開展相應(yīng)的工藝研究，并結(jié)合下游工藝進(jìn)行風(fēng)險評估。若涉及多步偶聯(lián)反應(yīng)，需關(guān)注影響各步偶聯(lián)效率的參數(shù)（如投料比等），避免因偶聯(lián)效率不高或投料不足產(chǎn)生高比例空載連接子偶聯(lián)抗體、藥物抗體偶聯(lián)比（Drug-to-注目標(biāo)位點(diǎn)和非目標(biāo)位點(diǎn)的偶聯(lián)情況；若涉及過量投料，純化的主要目的是去除生產(chǎn)工藝中所引入的工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)生的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。工藝相關(guān)雜質(zhì)主要包括殘留的修飾用試劑（如還原劑等）、催化劑、反應(yīng)酶、有機(jī)溶劑等；產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)主要為生產(chǎn)過程中所產(chǎn)生的聚體、片段、以及游離小分子及其衍生物、副反應(yīng)產(chǎn)物等。有些生分布。因此，應(yīng)根據(jù)純化的目的選擇純化手段和技術(shù)，并對生產(chǎn)過程中可能引入或產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行全面評估以確定條件下容易發(fā)生降解、聚集等，應(yīng)開展充分的研究選擇合適的劑型。目前一般選擇凍干制劑，為提高臨床用藥的便利性和安全性，基于對裸抗、小分子穩(wěn)定性的不斷研究與ADC處方開發(fā)應(yīng)基于對裸抗、有效載荷、連接子和ADC的理化性質(zhì)的深入理解，科學(xué)設(shè)計(jì)處方開發(fā)策略，采用合適的方法（如設(shè)計(jì)空間等），兼顧考慮裸抗、小分子的穩(wěn)定。例如疏水性的小分子藥物與親水性的抗體偶聯(lián)可能會引起ADC的聚集或其他物理化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，因此ADC產(chǎn)品通常需要選擇合適的表面活性劑的類型和濃度，基于制劑的處方開發(fā)確定輔料的種類、用量和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。輔料需符合《中國藥典》通則“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料的質(zhì)量控制”的相關(guān)要求。若使用新型輔料，應(yīng)提交全面的研究資料，在缺乏人體安全性研究數(shù)據(jù)支持的情況下，需參照《新藥用輔料非臨床安全性評價指導(dǎo)原則》ADC制劑生產(chǎn)工藝一般包括原液解凍、除菌過濾、無菌灌裝、凍干（如適用）等步驟。根據(jù)研究情況確定生產(chǎn)規(guī)模和批量，明確批次的定義，關(guān)注上下游規(guī)模的匹配性盡量避免混批操作。如果制劑工藝過程涉及凍干工藝，還工藝開發(fā)期間隨著工藝步驟和參數(shù)的不斷優(yōu)化、規(guī)模放大、提高產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性等進(jìn)行生產(chǎn)工藝變更，變更的實(shí)施應(yīng)基于充分的可比性研究。可比性研究可參考ICH可比性研究方案或橋接計(jì)劃。在生產(chǎn)工藝放大和轉(zhuǎn)移過程中，需充分評估工藝放大和轉(zhuǎn)移對產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性的影響，根據(jù)藥物開發(fā)的階段，參考相關(guān)指導(dǎo)原則開展基于風(fēng)需特別關(guān)注放大和轉(zhuǎn)移前后關(guān)鍵質(zhì)量屬性如載藥分布、DAR值和偶聯(lián)位點(diǎn)的可比性，雜質(zhì)的去除能力、生物學(xué)活性等。早期開發(fā)階段，由于生產(chǎn)工藝還在開發(fā)和優(yōu)化，且相關(guān)知識、經(jīng)驗(yàn)和批次數(shù)量有限，可基于有限批次的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行可比性研究，但應(yīng)關(guān)注安全性和有效性相關(guān)的質(zhì)量屬性（如雜質(zhì)特征、DAR值、生物學(xué)活性等）。后期開發(fā)階段，隨著生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的積累和對產(chǎn)品工藝、質(zhì)量的深入理解，應(yīng)開展全面和充分的可比性研究，設(shè)定有足夠生產(chǎn)ADC產(chǎn)品生產(chǎn)工藝和供應(yīng)鏈的復(fù)雜性對評估變更的潛在影響提出了新的挑戰(zhàn)。裸抗、小分子的可比性評估還需的工藝確認(rèn)，并關(guān)注裸抗、小分子變更產(chǎn)生的質(zhì)量屬性的（二）生產(chǎn)工藝的確認(rèn)與驗(yàn)證工藝開發(fā)過程中，根據(jù)階段性研究目的不同，需開展與階段相適應(yīng)的生產(chǎn)工藝確認(rèn)或驗(yàn)證研究。工藝驗(yàn)證的目的是證明已經(jīng)確定的生產(chǎn)工藝能夠按照擬定的工藝條件持續(xù)穩(wěn)定生產(chǎn)出符合預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品。通過工藝表征識別每個工藝參數(shù)對產(chǎn)品質(zhì)量或工藝性能表現(xiàn)的影響關(guān)系，制定工藝控制策略，確保工藝的穩(wěn)健性。商業(yè)化生產(chǎn)工藝確定規(guī)范的工藝驗(yàn)證。ADC產(chǎn)品的工藝驗(yàn)證應(yīng)包括裸抗、小分裸抗、小分子的工藝驗(yàn)證可參考《中國藥典》及國內(nèi)外相關(guān)指導(dǎo)原則的要求開展，關(guān)注工藝的穩(wěn)健性和產(chǎn)品質(zhì)ADC原液和制劑的工藝驗(yàn)證是在充分理解生產(chǎn)工藝與關(guān)鍵質(zhì)量屬性關(guān)系的基礎(chǔ)上，確定生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵工藝參數(shù)和控制策略，采用代表性商業(yè)化生產(chǎn)工藝開展規(guī)范的工藝驗(yàn)證。驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝和風(fēng)險評估確定，一般包括工藝的一致性、工藝參數(shù)的穩(wěn)定性、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)的去除、產(chǎn)品質(zhì)量屬性批間一致性等。此外，驗(yàn)證研究可能還包括（但不限于）無菌工藝驗(yàn)證、除菌過濾驗(yàn)證、填料和膜包的使用壽命研究、運(yùn)輸驗(yàn)證、清潔驗(yàn)證、設(shè)施和設(shè)備驗(yàn)證等，生產(chǎn)過程中若存在中間產(chǎn)物的暫存，還應(yīng)對中間產(chǎn)物的暫存條件和時限進(jìn)行研究。察采用不同批次的裸抗和小分子進(jìn)行偶聯(lián)的策略。此外，根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)，還需重點(diǎn)關(guān)注小分子相關(guān)雜質(zhì)的去除效果七、質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量研究需選擇代表性批次（如非臨床研究批次、臨床研究批次和/或商業(yè)化工藝批次等）和/或適當(dāng)生產(chǎn)階段的樣品作為研究對象，采用先進(jìn)的分析方法進(jìn)行研究，研究項(xiàng)目需全面、充分，盡可能涵蓋所有可能與產(chǎn)品安全性、有效性相關(guān)的項(xiàng)目。分析方法還應(yīng)關(guān)注樣品的處理和分析過程，避免樣品預(yù)處理等分析過程對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，原液/制劑部分，原液和制劑之間若存在質(zhì)量特性的差異，小分子的質(zhì)量研究可參考化學(xué)藥物相關(guān)指導(dǎo)原則開展，如《化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物殘留溶劑研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則》、《手性藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指除常規(guī)的雜質(zhì)分析外，還應(yīng)結(jié)合雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)等研究分析對后續(xù)工藝和終產(chǎn)品質(zhì)量的影響?；陔s質(zhì)的類型、結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)，結(jié)合去向（雜質(zhì)是否參與偶聯(lián)反應(yīng)）研究和清除（雜質(zhì)是否通過后續(xù)工藝被去除）研究等綜合評估風(fēng)險，制定合理的雜質(zhì)控制策略。由于在偶聯(lián)反應(yīng)完成后，可偶聯(lián)雜質(zhì)極難量化且難以去除，需重點(diǎn)關(guān)注可偶聯(lián)雜質(zhì)的風(fēng)險，應(yīng)制定嚴(yán)格的控制標(biāo)準(zhǔn)，并提供合理的依據(jù)。不可偶聯(lián)雜質(zhì)可根據(jù)后續(xù)工藝清除能力等建立合理的控制策略，裸抗質(zhì)量研究可參考《中國藥典》及相關(guān)指導(dǎo)原則，則上，裸抗的質(zhì)量研究要求和抗體藥物的要求基本一致，此外，還需對可能影響偶聯(lián)工藝的質(zhì)量屬性，如抗體的氧化水平等，進(jìn)行充分的研究和適當(dāng)?shù)目刂啤τ谕ㄟ^基因工程技術(shù)在抗體特定位點(diǎn)引入半胱氨酸或包含活性反應(yīng)基團(tuán)的非天然氨基酸進(jìn)行抗體修飾的，需對修飾位點(diǎn)進(jìn)行確證。雖然抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(Antibody-DependentCellularCytotoxicity，ADCC)、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用(ComplementDependent但可能也有一定的作用效力，應(yīng)基于抗體的類型、結(jié)構(gòu)改造等開展Fc功能研究，若對終產(chǎn)品的安全性或有ADC產(chǎn)品綜合了抗體藥物的靶向性和小分子藥物的強(qiáng)效作用（如細(xì)胞毒性等）的優(yōu)勢，但二者的偶聯(lián)也改變了彼此的物理化學(xué)特性，可能會引起藥物分子結(jié)構(gòu)、電荷等變化。因此，ADC產(chǎn)品除了需要關(guān)注大分子蛋白的質(zhì)量屬性和小分子相關(guān)的質(zhì)量屬性外，還需要增加偶聯(lián)引起的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，如DAR、載藥分布、偶聯(lián)位點(diǎn)（包括非目標(biāo)偶聯(lián)位點(diǎn)）、未偶聯(lián)的裸抗、游離小分子及其衍生物（如降解產(chǎn)物和/或與淬滅劑的反應(yīng)產(chǎn)物）、異質(zhì)性等的研究和控制。應(yīng)采用適宜的、先進(jìn)的分析技術(shù)，從結(jié)構(gòu)確證、理化性質(zhì)、生物學(xué)活性和雜質(zhì)研究等角度進(jìn)行全面的表征，并結(jié)合對裸抗的特性分析充分了解偶聯(lián)前后的相關(guān)特性變化（如高級結(jié)構(gòu)、翻譯后修飾、分子大小變異體、電荷變異體、抗原結(jié)合活性、Fc功能活性等），提供盡可能詳盡的信息以反映終產(chǎn)品的質(zhì)量屬性。質(zhì)量研究應(yīng)至少包括以的分析方法對一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)、偶聯(lián)位點(diǎn)時需結(jié)合偶聯(lián)反應(yīng)的機(jī)理，采用適宜的分析方法，如肽圖譜法和質(zhì)譜分析法等，評估偶聯(lián)工藝對裸抗的結(jié)構(gòu)（如氨基酸序列覆蓋率完整性、二硫鍵連接、熱穩(wěn)定性等）、糖基化修飾和其他翻譯后修飾等的影響，尤其需關(guān)注包括互解、還原等方式結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用或串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）析方法的分辨率和結(jié)果的可靠性。對于修飾發(fā)生在半胱氨酸殘基上或工藝過程中使用了還原劑的產(chǎn)品，還應(yīng)考慮二抗體通常具有復(fù)雜的異質(zhì)性（如電荷變異體、分子大小變異體、糖基化和其他翻譯后修飾等），裸抗本身的異點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)的產(chǎn)品），需采用具有足夠分辨率的可靠分析方法進(jìn)行全面表征，以闡明產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)的多樣性。研究中需根據(jù)有效載荷和連接子的化學(xué)性質(zhì)、偶聯(lián)方式以及產(chǎn)采用適當(dāng)?shù)姆治龇椒?，如肽圖譜法和質(zhì)譜分析法，評估偶聯(lián)工藝對抗體一級結(jié)構(gòu)、糖基化修飾和其他翻譯后修飾等的影響。偶聯(lián)位點(diǎn)可能影響PK/PD和分子穩(wěn)定性，可高級結(jié)構(gòu)是抗體類藥物結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、發(fā)揮作用的基礎(chǔ)。高級結(jié)構(gòu)表征方法一般包括圓二色譜（CD）、傅里葉變換紅外光譜（FTIR）、熒光光譜、差示掃描量熱法（DSC）、分析型超速離心（AUC）等。相對于常規(guī)抗體，ADC的高級結(jié)構(gòu)分析可能會因?yàn)榕悸?lián)了化學(xué)藥物而變得更加復(fù)雜。如偶聯(lián)的有效載荷可能產(chǎn)生紅外、紫外或熒光響應(yīng)，則可能影響結(jié)果分析。偶聯(lián)前后的高級結(jié)構(gòu)若存在差異，在利用生物物理手段對比結(jié)構(gòu)差異的同時，需重點(diǎn)關(guān)注差異對DAR值表示每個抗體分子上偶聯(lián)的有效載荷的平均數(shù)鍵質(zhì)量屬性。根據(jù)連接子和有效載荷的化學(xué)性質(zhì)、偶聯(lián)方包括紫外-可見分光光度法（UV）、疏水高效液相色譜法（HIC-HPLC）、反相高效液相色譜法（RP-HPLC）、MS等。其中，小分子的疏水性和吸光度貢獻(xiàn)可能會干擾DAR通常是包含了不同位點(diǎn)偶聯(lián)和連接不同數(shù)量有效載荷的ADC分子混合物。藥物載藥量分布表示偶聯(lián)有不同數(shù)量的適當(dāng)方法，如HIC-HPLC、RP-HPLC、毛細(xì)管電泳（CE）分子大小變異體直接影響產(chǎn)品的有效性和安全性，與性增加、表面電荷分布改變以及熱穩(wěn)定性降低，導(dǎo)致ADC產(chǎn)品有更強(qiáng)的聚集傾向。應(yīng)采用適宜的方法，如分子排阻色譜法（SEC-HPLC)、十二烷基磺酸鈉-毛細(xì)管電泳（CE-SDS）、分子排阻-多角度靜態(tài)光散射（SEC-MALS）、互補(bǔ)性?？苫诋a(chǎn)品結(jié)構(gòu)特點(diǎn)等采用多種分析方法對分子交換色譜（IEX-HPLC）、毛細(xì)管等電聚焦電泳（CIEF）或全柱成像毛細(xì)管等電聚焦電泳（iCIEF）等方法研究電荷變合產(chǎn)品特性，如小分子的特性（尤其是電荷）以及偶聯(lián)位點(diǎn)的選擇（如賴氨酸、鏈間巰基、半胱氨酸等）等，考慮小分子可能與分離介質(zhì)產(chǎn)生非特異性的相互作用等情況，選擇適宜的一種或多種方法進(jìn)行分析。此外，偶聯(lián)過程可能會消耗裸抗上的電荷（如賴氨酸偶聯(lián)）或有效載荷-連接子引入電荷基團(tuán)，部分小分子存在結(jié)構(gòu)特殊性（如疏水性強(qiáng)、不同結(jié)構(gòu)間動態(tài)轉(zhuǎn)化等），導(dǎo)致單一的分析方法可能無法全面地反映電荷異質(zhì)性。應(yīng)在充分理解分析方法深層原理的基礎(chǔ)上，科學(xué)解讀分析結(jié)果，必要時可采用其他分析方法進(jìn)行補(bǔ)充分析，如采用肽圖譜法分析樣品不同的離子交換收集組分，間接評估偶聯(lián)對抗體本身電荷異質(zhì)性的生物學(xué)活性是反映產(chǎn)品質(zhì)量和臨床有效性的重要指標(biāo)?？苫诋a(chǎn)品特點(diǎn)和作用機(jī)制等，建立可反映體內(nèi)藥效機(jī)制的生物學(xué)活性分析方法，用于產(chǎn)品的功能活性研究。ADC產(chǎn)品的主要作用機(jī)制是通過裸抗與靶抗原結(jié)合，在靶細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外釋放有效載荷并發(fā)揮其生物學(xué)活性功能。應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆治龇椒ǎㄈ鏓LISA、表面等離子體共振法或生物層干涉法等）評估與目標(biāo)抗原的結(jié)合活性。選擇合適的表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞株開發(fā)基于細(xì)胞的生物學(xué)活性方法。性，或表現(xiàn)出效應(yīng)子結(jié)合功能相關(guān)的非特異性毒性，則應(yīng)產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)是指生產(chǎn)或儲存過程中產(chǎn)生的非預(yù)期產(chǎn)物。ADC產(chǎn)品潛在的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)一般包括聚集體、片段、二硫鍵錯配變異體（如適用）、未偶聯(lián)裸抗、雜質(zhì)偶聯(lián)ADC（如適用）、游離小分子及其衍生物（來源可能是工藝添加或降解產(chǎn)物）、副反應(yīng)產(chǎn)物等。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，建議采用適宜的方法對各類產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行分離和/或鑒輸送到靶細(xì)胞的藥物量，可能直接影響產(chǎn)品的有效性，且未偶聯(lián)裸抗含量的變化可能會導(dǎo)致療效發(fā)生變化。在放行檢測和穩(wěn)定性研究中，應(yīng)依據(jù)偶聯(lián)的有效載荷的性質(zhì)（如電荷、疏水性）選擇合適的分析方法對未偶聯(lián)裸抗的百分工藝相關(guān)雜質(zhì)是指生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì)，應(yīng)結(jié)合生產(chǎn)用原材料、生產(chǎn)工藝等鑒定潛在的工藝相關(guān)雜質(zhì)并根據(jù)情況進(jìn)行定性和/或定量研究，評估雜質(zhì)殘留的安全性風(fēng)險，必要時將具有潛在安全性風(fēng)險的雜質(zhì)殘留納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行控制?？赡馨ㄓ袡C(jī)溶劑、生物酶（如適用）、元素雜污染物系指生產(chǎn)過程中引入的顆粒物、微生物或其相關(guān)組分（如細(xì)菌內(nèi)毒素等）。生產(chǎn)過程中需采取措施避免引入污染物并對其進(jìn)行相應(yīng)的控制，同時在原液和制劑的采用適宜的物理、化學(xué)或免疫學(xué)方法測定含量。如采干擾，在供試品濃度計(jì)算中應(yīng)納入適當(dāng)?shù)男Ｕ蜃踊蛞肫渌匦苑治鲂杞Y(jié)合產(chǎn)品類型及劑型進(jìn)行控制，可能包括性狀、可見異物、異常毒性（如適用）、不溶性微粒、pH值、滲透壓摩爾濃度、裝量、復(fù)溶時間（如適用）、水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)作為產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要組成部分，一般基和特殊的質(zhì)量屬性，質(zhì)量控制策略應(yīng)基于對裸抗和小分子的開發(fā)經(jīng)驗(yàn)、質(zhì)量研究、對終產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性的理解以及對工藝認(rèn)識的不斷積累，結(jié)合非臨床和臨床數(shù)據(jù)，通過裸抗、小分子部分的控制策略與單獨(dú)作為抗體藥物或質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的檢驗(yàn)項(xiàng)目通常是在充分的質(zhì)量研究基礎(chǔ)上確定的，在保證產(chǎn)品安全有效方面有重要影響的質(zhì)量屬性。ADC原液和制劑一般包括性狀（如外觀、顏色）、鑒別、DAR值和藥物載量分布、純度和雜質(zhì)、生物學(xué)活性、含量、一般檢項(xiàng)等，特殊劑型需根據(jù)劑型特點(diǎn)增加額外的檢項(xiàng)。具體檢驗(yàn)項(xiàng)目還應(yīng)基于產(chǎn)品類型、生產(chǎn)工藝、穩(wěn)定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)限度通常基于安全性和有效性的考慮，其制定應(yīng)有合理的依據(jù)，一般需考慮產(chǎn)品特點(diǎn)、非臨床和臨床試驗(yàn)暴露情況、各個階段研究用批次數(shù)據(jù)、批間一致性研究數(shù)據(jù)、穩(wěn)定性研究等，還應(yīng)考慮所使用的分析方法分析方法的開發(fā)和驗(yàn)證應(yīng)遵循藥品開發(fā)的一般方法學(xué)