天 然 藥 物 化 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 講 義1

PAGEPAGE21天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義蘇州大學(xué)藥學(xué)系

天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義目錄……………………1實(shí)驗(yàn)一氧化鋁活度測(cè)定………………2實(shí)驗(yàn)二薄層層析展開劑的選擇………5實(shí)驗(yàn)三麻黃中麻黃堿的提取、分離，檢識(shí)…………6實(shí)驗(yàn)四槐米中蕓香苷的提取、分離，檢識(shí)…………9實(shí)驗(yàn)五虎杖中大黃素提取、分離、檢識(shí)……………13

實(shí)驗(yàn)六中藥中化學(xué)成分的預(yù)試………17實(shí)驗(yàn)一氧化鋁活度測(cè)定一、目的要求1．掌握薄層層析制板方法2．了解吸附劑的活度測(cè)定法二、實(shí)驗(yàn)原理薄層板根據(jù)在制備過程中是否加入粘合劑分為粘合薄層和非粘合薄層二種，加入粘合劑的為硬板，不加粘合劑的多為軟板（亦有為硬板，如纖維素板）。粘合劑常用的有羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）或煅石膏（G）。加羧甲基纖維素鈉制備的板機(jī)械強(qiáng)度較好，但對(duì)一些需加熱的腐蝕性顯色劑不適用。加石膏制備的板性能相反，機(jī)械強(qiáng)度較差，但適合于使用需加熱的腐蝕性顯色劑。對(duì)層析用吸附劑活度的測(cè)定，主要是利用吸附劑自身對(duì)某些偶氮染料吸附力的大小和在薄層板上展開距離來(lái)確定，故用測(cè)量比移值的方法來(lái)確定吸附劑的極性大小和強(qiáng)度級(jí)數(shù).三、實(shí)驗(yàn)材料材料：氧化鋁（層析用，中性70~325目）、四氯化碳（重蒸餾）、偶氮苯（Ajobenjene）、對(duì)甲氧基偶氮苯（P-methoxyajobenjene）、蘇丹黃（sudanIbenjen-azo--naphthot）、蘇丹紅（SudanIItetra-ajobenjen---naphthot）、對(duì)氨基偶氮苯（P-aminoajobenene）、薄層層析用硅膠G、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）儀器：天平、研缽、藥匙、玻璃板（大、中、?。?、烘箱、干燥器、點(diǎn)樣毛細(xì)管、小層析缸四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）薄層層析薄層板的制備1．氧化鋁薄層取表面光滑，直徑均一的玻璃棒一支，依據(jù)所制備薄層的寬度、厚度要求，在玻璃棒兩端各包上橡皮膠，也可以套上塑料管或橡皮管，一般以0.25（用于分析分離）~1mm（用于制備分離）為宜。在一端已包好的橡皮膠上，再多包5~6層橡皮膠或一段橡皮管，作為涂鋪時(shí)的固定邊，以防止滑動(dòng)時(shí)邊緣不整齊。操作時(shí)，將氧化鋁粉均勻地鋪在玻璃板上，再用玻棒壓在玻板上將吸附劑自一端推向另一端，推移時(shí)，不宜太快，也不應(yīng)中途停頓，否則厚薄不均勻，影響層析效果。2．硅膠G薄層取硅膠G1份，置研缽中加水3~4份，研磨均勻，放置片刻，隨即用藥匙取一定量，分別倒在一塊大玻璃板上（或倒入涂布器中，推動(dòng)涂布），均勻涂布成0.25~0.50mm厚度，輕輕振動(dòng)玻璃板，使薄層面平整均勻?；蛉蓧K2.5mm厚度的玻璃長(zhǎng)板，中間夾一至幾塊2mm厚的薄層板，將適量硅膠糊倒在中間，用藥匙適當(dāng)涂勻，另取一塊邊緣平整的玻璃片將硅膠糊刮平，推出薄層板，水平放置，待薄層發(fā)白近干，于烘箱中110℃烘干活化1~2小時(shí)，冷后貯于干燥器內(nèi)備用?；罨娓蓽囟?、時(shí)間可依需要調(diào)整，一般鑒別水溶性化合物或一些極性大的化合物時(shí)，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活化即可貯存?zhèn)溆谩?．硅膠G-羧甲基纖維素鈉薄層取羧甲基纖維素0.2g，溶于25ml蒸餾水中，加熱攪拌使完全溶解，倒入研缽中加硅膠細(xì)粉（一般300目的硅膠細(xì)粉約用6~8g，200目的則用10~12g），研磨成糊，照硅膠G薄層涂布法制備薄層板。（二）氧化鋁、硅膠活度的測(cè)定1．氧化鋁活度的測(cè)定，一般可用4~5種偶氮染料以薄層層析法進(jìn)行測(cè)定。（1）染料試劑的配制取偶氮苯60mg，對(duì)甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅、對(duì)氨基偶氮苯各40mg，分別溶于100ml重蒸餾的四氯化碳中。（2）實(shí)驗(yàn)方法①制板：按上述方法制備氧化鋁薄層軟板兩塊，大小約20×6cm。②點(diǎn)樣：以鉛筆尖或毛細(xì)管尖在薄層板一端2~3cm處，輕輕觸及薄層再作起始線標(biāo)記，間隔lcm左右點(diǎn)上5個(gè)可以看清的小點(diǎn)，然后分別用毛細(xì)管蘸取各種染料分別點(diǎn)在原點(diǎn)上，點(diǎn)樣的斑點(diǎn)直徑不得超過0.5cm。③展開：將點(diǎn)樣的軟板輕輕置于預(yù)先加入重蒸餾四氯化碳的層析槽中（事先墊高層析槽的下行端），勿使展開劑與薄層板接觸，蓋好槽蓋放置半小時(shí)，以進(jìn)行飽和。半小時(shí)后，調(diào)換層析槽下支撐物，再墊高層析槽的上行端，使薄層板與容器底部交角為10~40℃之間，令展開劑流集于層析槽的下行端，使與薄層板相接觸（以不淹沒點(diǎn)樣原點(diǎn)為度）以進(jìn)行展層，當(dāng)展開劑展至薄層板全長(zhǎng)的三分之二時(shí)，即可取出薄層板，迅速量出前沿至原點(diǎn)的總長(zhǎng)度和原點(diǎn)至各個(gè)色斑的長(zhǎng)度，依以下公式計(jì)算各色點(diǎn)的比移值（Rf）Rf=④結(jié)果判斷根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算結(jié)果（Rf值），可以下表中查出相應(yīng)活度級(jí)數(shù)，以判斷該氧化鋁的活性大小。表1氧化鋁活度的Hermanck定級(jí)法（按Brockmenn和Schodder劃分的活度）偶氮染料氧化鋁活度級(jí)（Rf值）Ⅱ級(jí)Ⅲ級(jí)Ⅳ級(jí)Ⅴ級(jí)偶氮苯0.590.740.850.95對(duì)甲基偶氮苯0.160.490.690.89蘇丹黃10.78蘇丹紅0.000.100.330.56對(duì)氨基偶氮苯0.000.030.030.19五、實(shí)驗(yàn)說明1．進(jìn)行層析時(shí)，要想得到比較理想的結(jié)果，在各步操作中都應(yīng)嚴(yán)格要求。如點(diǎn)樣量的多少及點(diǎn)樣的原點(diǎn)直徑不應(yīng)超過0.5mm；展層時(shí)起始線不能浸在展開劑中；層析板或?qū)游黾埐荒芎驼归_容器接觸；層析缸應(yīng)密閉以及選擇靈敏的顯色劑等。2．羧甲基纖維素鈉的溶液一般用0.5~1%濃度，宜預(yù)先配制后靜置，取上層澄清溶液應(yīng)用，則所制備的薄層表面較為細(xì)膩平滑。3．點(diǎn)樣量的多少，對(duì)有色化合物可直接觀察，對(duì)無(wú)色化合物可預(yù)先取一個(gè)薄層板，按常規(guī)方法進(jìn)行層析操作。但在點(diǎn)樣時(shí)可分別在不同原點(diǎn)點(diǎn)上不同量的樣品溶液，展層顯色后，根據(jù)斑點(diǎn)的大小和顏色的深淺以確定最佳點(diǎn)樣量。4．進(jìn)行氧化鋁軟板活度測(cè)定時(shí)，在各步操作中應(yīng)避風(fēng)，以防吹散吸附劑。六、思考題根據(jù)偶氮苯、對(duì)甲基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅和對(duì)氨基偶氮苯的結(jié)構(gòu)式，判斷其在氮化鋁薄層板上以苯為展開劑的順序和位置。2．欲使你的實(shí)驗(yàn)得到滿意的結(jié)果時(shí)，操作（薄層層析）中應(yīng)注意什么問題？以氧化鋁活度測(cè)定為例說明之。

實(shí)驗(yàn)二薄層層析展開劑的選擇一、目的要求1．掌握薄層層析的操作方法。2．了解展開劑與吸附劑和被分離物質(zhì)的三者關(guān)系。二、實(shí)驗(yàn)原理薄層層析在一般情況下是一種吸附層析，利用吸附劑對(duì)化合物吸附能力的不同而達(dá)到分離，吸附劑吸附能力的大小和化合物極性的大小有關(guān)。在硅膠等極性吸附劑薄層上化合物極性大，被吸附劑吸附得牢，Rf值?。环粗衔飿O性小，Rf值大。一個(gè)化合物在硅膠薄層上的Rf值的大小主要取決于展開劑的極性大小，即展開劑極性大，化合物Rf值大；展開劑極性小，化合物Rf值小。三、實(shí)驗(yàn)器材硅膠CMC-Na薄層板三塊、薄荷油、薄荷腦的乙醇溶液、石油醚、乙酸乙酯、香草醛、濃硫酸、毛細(xì)管、層析缸、顯色噴嘴瓶四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容硅膠薄層層析法檢查揮發(fā)油吸附劑：硅膠CMC-Na薄層板樣品：薄荷油、薄荷腦的乙醇溶液展開劑：石油醚、乙酸乙酯、石油醚∶乙酸乙酯（85∶15）顯色劑：香草醛-濃硫酸試劑操作：取CMC-Na薄層板，用軟鉛筆在距1.2~2cm處劃起始線及原點(diǎn)，用毛細(xì)管點(diǎn)適量的樣品溶液，待溶劑揮干后，進(jìn)行上行法展層，當(dāng)展開劑接近頂部時(shí)，取出，用鉛筆繪下溶劑前沿，揮干展開劑，噴灑顯色劑，必要時(shí)可適當(dāng)加熱促進(jìn)顯色。計(jì)算薄荷腦的Rf值，并比較在三種展開劑中的展開情況，由結(jié)果判斷何種展開劑最適合分離薄荷油，亦可用壓板法顯色。五、實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)用各展開劑試瓶、量筒、層析缸必須干燥無(wú)水，不能混淆。2．壓板法操作：點(diǎn)樣展層后，稍干，反扣在一塊同樣大小并涂布一層顯色劑的玻璃板上，再將玻璃片反轉(zhuǎn)，使薄層面向上，觀察顏色變化。六、思考題l．揮發(fā)油在硅膠薄層板上用石油醚、乙酸乙酯、石油醚∶乙酸乙酯（85∶15）三種展開劑分別展開時(shí)，結(jié)果不同，其原因是什么？2．欲進(jìn)行薄層層析鑒定時(shí)，應(yīng)如何選擇一個(gè)比較理想的層析條件？

實(shí)驗(yàn)三麻黃中麻黃堿的提取、分離與檢識(shí)麻黃是一種常用中藥，為我國(guó)特產(chǎn)的藥材之一。為麻黃科植物草麻黃（Epheclrasinicastapf）、木賊麻黃（E.equssetinaBunge）和中草麻黃（E.intermediaSchrenkexMeyer）的干燥草質(zhì)莖。具有發(fā)汗、解表、鎮(zhèn)咳、平喘等作用。它的主要成份是生物堿，在草麻黃中的含量為1.3%以上，木賊麻黃中則達(dá)1.75%，這些生物堿已知的有六種以上，主要為：(-)麻黃堿（L-ephedrine）一般占總堿60%以上，其次為(+)偽麻黃堿（d-pseudophedrine）和少量甲基麻黃堿、去甲基麻黃堿、甲基偽麻黃堿、去甲基偽麻黃堿等。它們以鹽酸鹽的形式存在于植物體中。一、麻黃中已知主要成份的理化性質(zhì)1．(-)麻黃堿：為無(wú)色蠟狀固體或晶形固體，也可能是顆粒。無(wú)臭，常含半分子結(jié)晶水，熔點(diǎn)40℃。易溶于水（1∶20）或乙醇，可溶于氯仿、乙醚、苯或甲苯。有揮發(fā)性，可隨水蒸氣蒸餾而不分解。其水溶液呈強(qiáng)堿性（pkb4.42），能與無(wú)機(jī)酸或酸性較強(qiáng)的有機(jī)酸結(jié)合成鹽，這些鹽大多易溶于水（草酸鹽難溶于冷水），要溶于乙醇，但幾不溶于氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。2．(+)偽麻黃堿：由乙醚結(jié)晶出來(lái)的為長(zhǎng)斜方形晶體，易溶于乙醇、乙醚、苯或甲苯等有機(jī)溶劑，而難溶于水。堿性較(-)麻黃堿略強(qiáng)（pkb4.26），可應(yīng)用離子交換層析法將兩者分離。(+)偽麻黃堿的鹽類均易溶手水，但其鹽酸鹽能溶于丙酮或氯仿，草酸鹽易溶于冷水，而與鹽酸(-)麻黃堿不同．二、目的要求1．掌握水溶性生物堿類溶劑提取和分離方法。2．熟悉用離子交換樹脂法純化處理水溶性生物堿的操作技術(shù)。3．了解麻黃堿的性質(zhì)和檢識(shí)方法。三、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是利用麻黃生物堿的鹽酸鹽可溶于水的性質(zhì)，而采用稀鹽酸水溶液為提取溶劑，對(duì)麻黃草進(jìn)行蒸煮或浸漬，提取液經(jīng)堿化后轉(zhuǎn)化為游離麻黃堿，可為氯仿所萃取。麻黃堿的氯仿溶液又可為稀鹽酸轉(zhuǎn)溶成鹽，于此鹽酸麻黃堿的水溶液中加入適量乙醚，則可降低鹽酸麻黃堿的水中溶解度而析出結(jié)晶。所得鹽酸鹽結(jié)晶系鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿混合物，再利用鹽酸偽麻黃堿可溶于氯仿的特性，用氯仿轉(zhuǎn)溶此混合物，即可使之與鹽酸麻典堿相分離。此外，用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂去處理麻黃的酸水提取液，可以得到較純的麻黃生物堿。四、實(shí)驗(yàn)器材麻黃（選擇實(shí)驗(yàn)用材，通常以山西產(chǎn)較好）、0.5%鹽酸水溶液、廣泛PH試紙、乙醚、95%乙醇、甲醇、氨水、茚三酮試劑、硅膠-CMC層析板、1%鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)品的醇溶液、離子交換樹脂、1000ml燒杯、電熱套（1000ml）、1000ml圓底燒瓶、冷凝管、抽濾瓶、布氏漏斗、圓形濾紙、樹脂柱、層析缸、循環(huán)水泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、索氏提取器、大張濾紙、電吹風(fēng)五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）總生物堿的提取、分離稱取麻黃粗粉100g，先后以12倍量、10倍量0.5%鹽酸溶液加熱回流提取各1小時(shí)，濾過，合并兩次濾液。所得酸水液通過已經(jīng)預(yù)處理的陽(yáng)離子交換樹脂，再用水洗樹脂柱直至中性，接著用95%乙醇約500ml通過樹脂柱直至洗出液無(wú)色為止，并使乙醇全部流出，然后將樹脂柱中的樹脂全部倒出，攤在搪瓷盤中于通風(fēng)處晾干。所得到的含麻黃堿樹脂用氨水堿化，邊加氨水邊攪拌，以手試之有潮濕感，捏之成團(tuán)，觸之即散（氨水用量控制在10%左右）為度，再將堿化后的樹脂移入濾紙筒中，用脫脂棉花塞堵濾紙筒口，裝入索氏提取器內(nèi)，以乙醚約500ml為溶劑，于水浴上連續(xù)回流提取5~6小時(shí)，直至提盡生物堿為止，回收乙醚至約ml，放置析晶，所得麻黃堿粗品用于鑒別、檢識(shí)實(shí)驗(yàn)。（二）離子交換樹脂制取法1．離子交換樹脂的選擇和處理取強(qiáng)酸1號(hào)或723型（磺酸氫型聚苯乙烯）陽(yáng)離子交換樹脂（交聯(lián)度為3~6%）適量，可根據(jù)麻黃中生物堿含量和樹脂的交換容量加以計(jì)算。通常樹脂的取用量應(yīng)比計(jì)算量多1~3倍。如90~100g樹脂，先用常水浸泡12小時(shí)以上（或于80℃水浴上加熱半小時(shí)），使樹脂充分膨脹后，再裝入樹脂柱（在裝柱前可先在柱底墊少許玻璃纖維，以防樹脂顆粒漏出），裝柱時(shí)，可將樹脂連同水分一起倒入柱內(nèi)，使樹脂隨同水分流出而下沉，自然形成樹脂柱。柱內(nèi)若有空氣泡存在時(shí)，應(yīng)設(shè)法使其排出，放出多余水分，只保持樹脂柱面有1cm高度水層，以免空氣進(jìn)入樹脂內(nèi)。2．轉(zhuǎn)型處理取樹脂用量4倍的2N鹽酸溶液，使全速通過樹脂柱，再取用2倍量的5N鹽酸溶液全速通過樹脂柱，不等酸水流盡樹脂柱面，立即用蒸餾水全速通過樹脂柱進(jìn)行洗滌，除去余酸，直至洗出水顯中性為止（注意：樹脂柱上面始終應(yīng)保持1cm高的水層）。3．提取液中生物堿成份的交換將上述麻黃的鹽酸提取液全部通過轉(zhuǎn)型后的離子交換樹脂，調(diào)節(jié)流速為10~15ml/min，交換后的流出液作生物堿沉淀反應(yīng)檢查：若仍呈陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，說明生物堿尚未被全部交換完全，應(yīng)當(dāng)重復(fù)操作或加大樹脂的用量，直至交換完全為止。待提取液交換完全之后，隨即用蒸餾水沖冼樹脂柱，直至洗成中性后，再用95%乙醇洗至醇流出液為無(wú)色為止，并使乙醇全部流出。4．生物堿洗脫將樹脂柱內(nèi)的樹脂全部倒出，攤在搪瓷盤內(nèi)于通風(fēng)處晾干，收集于大燒杯內(nèi)，用氨水堿化，加氨水量不宜過多，可隨加隨攪拌，以手試之有潮濕感，捏之成團(tuán)，觸之即散（氨水用量控制在10%左右）為度，再將堿化后的樹脂移入連續(xù)回流提取器的濾紙筒中，用脫脂棉花塞堵濾紙筒口，裝入提取器內(nèi)，以乙醚為溶劑，于水浴上連續(xù)回流提取5~6小時(shí)，直至提盡生物堿為止，回收乙醚，即得純制麻黃總生物堿。（四）麻黃堿的檢識(shí)層析材料：硅膠-CMC硬板展開劑：甲醇∶氨水（10∶1）顯色劑：茚三酮試劑（噴灑后需加熱）對(duì)照品：1%鹽酸麻黃堿醇溶液六、實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)1．麻黃中麻黃堿的含量，往往與產(chǎn)地和采收季節(jié)有密切聯(lián)系，通常以山西麻黃含生物堿較高（2%）左右，可用作實(shí)驗(yàn)材料。而其它麻黃或市售加工的飲片麻黃，含生物堿量多數(shù)較低（1%以下），不可供實(shí)驗(yàn)用，尤其貯存一年以上的麻黃，多數(shù)難以提出麻黃堿。2．存在于麻黃中的鞣質(zhì)成份較多，若用冷浸法提取，則較加熱煮沸法提取的鞣質(zhì)量有明顯地減少，所得產(chǎn)品亦易純化。唯冷浸法提取費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)，如果采用酸水煮沸法提?。ㄌ崛∪?，每次1小時(shí)），再配用陽(yáng)離子交換樹脂處理提取液，可以收到滿意的實(shí)驗(yàn)效果。3．麻黃堿為非氮環(huán)類生物堿，分子量較小，游離體可隨水蒸汽揮發(fā)，而且麻黃堿不與一般生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)。4．用酸水冷浸法提取液常含有較多的鈣鹽，若使用離子交換法處理提取液，則對(duì)離子交換樹脂的交換率影響甚大，為此，在取用離子交換樹脂時(shí)，取量應(yīng)較理論計(jì)算值大得多，甚至需要加倍。如果要降低樹脂的用量，就必須避開鈣鹽的干擾?？蓪⑺崴涸诮粨Q之前進(jìn)行堿化，作水蒸汽蒸餾，收集蒸餾液并用鹽酸調(diào)PH4~6，再進(jìn)行離子交換樹脂處理。5．麻黃堿的銅絡(luò)鹽顯色反應(yīng)靈敏度較差，若直接用麻黃浸液做此試驗(yàn)往往不能得到明顯的結(jié)果，因此，需要適當(dāng)提純之后再試，就可得到正確反應(yīng)結(jié)果。七、思考題1．利用酸水浸漬提取麻黃堿時(shí)應(yīng)注意什么問題？本次實(shí)驗(yàn)提取方法有什么特點(diǎn)？2．麻黃堿與偽麻黃堿二者在性質(zhì)上有何差異？除本實(shí)驗(yàn)外還可用何種方法將其二者分離？3．麻黃堿的銅絡(luò)鹽反應(yīng)原理是什么？試寫出反應(yīng)式。4．麻黃堿性質(zhì)能否用生物堿沉淀劑進(jìn)行檢識(shí)？為什么？

實(shí)驗(yàn)四槐花米中蕓香甙的提取、精制和檢識(shí)蕓香甙亦稱蘆?。≧utin），廣泛存在于植物界，已發(fā)現(xiàn)的蘆丁植物至少在70種以上，以槐米、蕎麥葉、蒲公英和煙葉中含量較多，本實(shí)驗(yàn)以槐花米作為提取蘆丁的原料?；被紫刀箍浦参颯ophorajoponiaL的未開放花蕾，其中蘆丁含量高達(dá)23.5%，槐花開放后降至13.0%。蘆丁除用作治療毛細(xì)管脆弱引起的出血癥和高血病的輔助治療劑外，還可作為制藥原料，用于制造槲皮素（Ruercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基蘆丁、二羧丙基蘆丁、-乙基嗎啉蘆丁、6-二乙胺基蘆丁等?；被字谐刑J丁外，還含有白樺脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、皂甙以及槐花米甲、乙、丙素（SophorinA、B、C）和多糖粘液質(zhì)等。蕓香甙一、槐花米主要成份的理化性質(zhì)1．蘆?。菏情纹に?位羧基與蕓香糖（Rutinose）脫水縮合成的甙。淺黃色粉末或極細(xì)的針狀結(jié)晶，含3分子結(jié)晶水（C27H36O16·3H2O），mpll7~178℃。在110℃10mmHg下真空干燥12小時(shí)變成無(wú)水物，無(wú)水物易吸濕，可從大氣中吸收約2.5分子水份。無(wú)水蘆丁在125℃變褐，在190~192℃變成膠狀，當(dāng)溫度升至214~215℃發(fā)泡分解。［］XX+1382（乙醇）蘆丁溶解度在冷水中1∶10000，熱水中1∶200，冷乙醇中1∶300，熱乙醇中1∶30，沸甲醇中1∶7，冷吡啶中1∶12，微溶于丙酮、乙醇乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。UVmaxnm：259，266（sh），299（sh），3590IRvmaxcm-2，3400（OH），1670（C∶O），1620∶1520，1470（Ar-）。lXCNMR（DMSO-d6）：156.4（C2），133.6（C3），177.4（C4），161.2（C5），98.8（C6），163.9（C7）,93.6（C8），156.6（C9），104.2（C10），121.6（C1），115.3（C2），144.6（C1），148.3（C4），116.5（C5），67.1（C6），100.7（C1），70.4（C2），70.4（C1），72.2（C4），68.2（C5），17.5（C6）。蘆丁分子中具有較多酚羥基，顯弱酸性，易溶于堿液中，酸化后又析出，因此可以用堿溶液沉的方法提取蘆丁。蘆丁分子因含有鄰二酚羥基，性質(zhì)不太穩(wěn)定，暴露空氣中，在光的作用下，能緩緩分解，變?yōu)榘岛稚?，在堿性條件下更容易被氧化分解，硼酸鹽能與鄰二酚羥基結(jié)合，達(dá)到保護(hù)的目的，故在堿性條件溶液中加熱提取蘆丁時(shí)，往往在加入少量硼砂，就是保護(hù)蘆丁減少氧化分解。2．槲皮素：從稀醇中結(jié)晶出來(lái)為黃色針狀結(jié)晶，含2分子結(jié)晶水（C15H10O72H2O），在95~97℃變?yōu)闊o(wú)水物，失水的槲皮素在空氣中可重新獲得失去的結(jié)晶水。含2分子結(jié)晶水的分解點(diǎn)為313~314℃，無(wú)水物的分解點(diǎn)為316~317℃。槲皮素溶于堿水，乙酸和沸醇，在無(wú)水醇中的溶解度：冷時(shí)1∶290，沸時(shí)1∶23，200mg槲皮素在20℃時(shí)溶于5ml丙酮或吡啶；在50℃時(shí)溶于20ml甲醇，不溶于苯、乙醚、石油醚。在常溫下不溶于水，也難溶于熱水。UVmaxnm（㏒）：258（2.75），375（2.75）。HNMR（DMSO-d6）：6.19（1H，d.d，J=2.20，8.06H2，H-6’），12.48（1H，S，5-OH）。1XCNMR（DMSO-d6）：146.9（C2），135.6（C3），175.7（C4），160.7（C5），98.2（C6），163.9（C7），93.4（C8），156.2（C9），103.0（C10），122.0（Cl’），115.3（C2’），145.0（C3’），147.6（C4’），115.6（C5’），120.0（C6’）。3．皂甙：粗制品為白色粉末，分解點(diǎn)為210~220℃。易溶于起水、吡啶，能溶于甲醇。酸水解后得白樺脂醇、槐二醇、葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸內(nèi)酯。4．白樺醇酯：無(wú)色針狀結(jié)晶，mp251~252℃，能溶于乙酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、苯等中，難溶于水、石油醚中。5．槐二醇：無(wú)色針狀結(jié)晶，mp219~220℃或224℃，能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，難溶于水。6．槐花米甲素：青黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)不定，181~182℃開始發(fā)泡，186℃變形發(fā)泡完，198~203℃透明有質(zhì)變色，244~245℃分爭(zhēng)融熔。溶解度：冷水中1∶60000，熱水中1∶167，冷甲醇中1∶108，熱甲醇中11.2%，冷乙醇中1∶290，熱乙醇中3.5%，冷二氧六環(huán)中1∶30，熱二氧六環(huán)中1∶15，易溶于吡啶，微溶于乙醚、乙酸乙酯，不溶于冰乙酸、石油醚和氯仿。7．槐花米乙素：無(wú)色六面體結(jié)晶，mp272~274℃，易溶于濃硫酸，難溶于85%磷酸，略溶于熱甲醇及乙醇，但冷時(shí)難溶，在其它非極性溶劑中均不溶，也不溶于水、5%鹽酸、5%氫氧化鈉溶液。8．槐花米丙素：無(wú)色棒狀結(jié)晶，mp235~237℃，易溶于甲醇、乙醇及二氧六環(huán)，稍溶于乙醚及丙酮，不溶于水、沸水、5%鹽酸、5%氫氧化鈉、85%磷酸。溶于濃硫酸中呈紅色，放置后轉(zhuǎn)變?yōu)樽仙６?、目的要?．掌握用槐花提取，精制蕓香甙的原理和方法。2．熟悉蕓香甙的主要性質(zhì)和檢識(shí)方法。三、實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)蕓香甙具弱酸性易溶于堿水，加酸分化后又析出結(jié)晶的特性進(jìn)行提取；又利用蕓香甙對(duì)冷水或熱水的溶解度相差較大的特性進(jìn)行精制。四、實(shí)驗(yàn)器材槐花米、0.4%硼酸水溶液、（2%）石灰乳、6N鹽酸、PH試紙、2%硫酸溶液、氫氧化鋇細(xì)粉（或碳酸鋇）、正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶1或4∶I∶5上層）、苯胺-鄰苯二甲酸試劑、1%葡萄糖水溶液、1%鼠李糖水溶液、l%氫氧化鈉、1%鹽酸、鎂粉、1%蕓香甙乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、三氯化鋁試劑、500cc燒杯、聚酰胺薄膜、1000cc圓底燒瓶、抽濾裝置、玻璃漏斗、脫脂棉、250cc圓底燒瓶、冷凝管、層析缸、電熱套、循環(huán)水泵、試管。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）蕓香甙的提取取槐花米20g，置于1000cc圓底燒瓶中，加0.4%硼砂水溶液200ml，在攪拌下加石灰乳調(diào)PH8，加熱微沸30分鐘，靜置幾分鐘傾出上清液，用棉花過濾，藥渣同上重復(fù)一次。合并濾液用6N鹽酸調(diào)PH2~3，放置（一夜以上）抽濾，得粗蘆?。V餅用水洗3~4次），放置空氣中自然干燥得粗品，稱重、計(jì)算提取率。（二）精制取2g加蒸餾水400ml，加熱煮沸溶解，趁熱抽濾，濾液放置過夜，析晶，抽濾，得精制蕓香甙。烘干。（三）蕓香甙的檢識(shí)反應(yīng)1．成鹽反應(yīng)：取蕓香甙10mg左右，置試管中加蒸餾水2ml，振搖，觀察試管有無(wú)變化，滴加1%氫氧化鈉溶液數(shù)滴，振搖使蕓香甙全部溶解成為黃色澄明溶液，然后再滴加1%鹽酸溶液數(shù)滴至成酸性反應(yīng)，溶液則由澄明轉(zhuǎn)為混濁狀態(tài)（若當(dāng)時(shí)不出現(xiàn)混濁時(shí)可放置片刻或放置冰箱中冷凍一定時(shí)間后再觀察）。2．鹽酸鎂粉反應(yīng)：取蕓香甙少許，置試管中，加乙醇2ml置熱水浴中至溶解后，加入金屬鎂粉少許，濃鹽酸2~3滴，即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)，并逐漸出現(xiàn)紅色至深紅色。（四）蕓香甙的水解取蕓香甙1g，置250cc圓底燒瓶中2%H2SO4溶液80ml，加熱回流30分鐘至1小時(shí)，開始加熱10分鐘為澄清液，逐漸析出黃色小針狀結(jié)晶，既為槲皮素，抽濾得結(jié)晶，濾液保留檢查糖（單糖），沉淀物用蒸餾水洗至中性，抽干水份，晾干稱重，得粗制槲皮素。（五）糖的紙層析檢識(shí)樣品液的制備：取水解濾液20ml，水浴上加熱，于攪拌下加Ba(OH)2（或BaCO3）細(xì)粉中和至中性，濾除白色硫酸鋇沉淀（玻璃漏斗、棉花少許）)，濾液濃縮至1~2ml作層析點(diǎn)樣用。對(duì)照品：1%葡萄糖水溶液及1%鼠李糖水溶液層析濾紙：新化一號(hào)濾紙展開劑：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶1或4∶1∶5上層）顯色劑：用苯胺-鄰苯二甲酸試劑噴霧后，105℃烘10分鐘，顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)。（六）蕓香甙及槲皮素的紙層析和聚酰胺薄膜層析鑒定樣品：（1）自制蕓香甙的乙醇溶液（2）自制槲皮素的乙醇溶液對(duì)照品：（1）蕓香丁標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液（2）槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液層析濾紙：新化一號(hào)濾紙展開劑：（1）正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶1或4∶1∶5上層）（2）15%乙酸水溶液顯色：（1）先在可見光下觀察斑點(diǎn)顏色，然后在紫外燈下觀察斑點(diǎn)顏色（2）經(jīng)氨氣熏后再觀察（3）噴三氯化鋁試劑后再觀察聚酰胺薄膜層析，用90%乙醇展開，在紫外燈下觀察斑點(diǎn)顏色。六、實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)1．以堿溶酸沉提取法得到的提取液，通常因大量粘稠的雜質(zhì)較難以過濾，給實(shí)驗(yàn)操作造成困難，為此也可改變堿水提取液的處理方法。如將堿水提取液的粗濾液冷卻至室溫，再繼續(xù)加入足量石灰乳使PH達(dá)12以上，使提取液中的雜質(zhì)被石灰乳沉淀，再立即加入20%硫酸溶液調(diào)PH至3，令多余的鈣鹽與硫酸作用生成硫酸鈣沉淀出來(lái)。在PH3的酸度下，蕓香甙則可游離，于水浴上加熱至50~60℃迅速過濾，放置濾液于冰箱中直至沉淀完全析出抽濾，洗滌，干燥后即得蕓香甙。2．硼砂的作用，既能調(diào)節(jié)堿性水溶液的PH，又能保護(hù)蘆丁減少氧化，但其價(jià)格較高，工業(yè)上用較大量的石灰乳加入少量的硼砂，同樣達(dá)到提高質(zhì)量的要求。3．加入石灰乳使PH8~9，，既可達(dá)到溶解蘆丁的目的，又可以除去槐花米中含有的大量的多糖粘液質(zhì)。但PH不能過高，否則鈣能與蘆丁形成螯合物而析出沉淀。4．用濃鹽酸調(diào)PH2~3，PH過低會(huì)使蘆丁形成鋅鹽而降低收率。5．用乙醇重結(jié)晶槲皮素時(shí)，若乙醇濃度過高，則不易析出結(jié)晶，此時(shí)，可在乙醇溶液中滴加適量蒸餾水使呈微濁狀態(tài)，則槲皮素可大量析出結(jié)晶。七、思考題1．根據(jù)蕓香甙的性質(zhì)，還可采用何種方法進(jìn)行提?。吭囋O(shè)計(jì)自槐花米中提取蕓香甙的另一種方法，并說明方法原理。2．用堿溶酸沉法提取蕓香甙的原理是什么？為什么要控制堿的濃度？3．用堿溶酸沉法提取蕓香甙，為什么要加入硼砂水溶液？4．如何證明蘆丁分子中只含有葡萄糖和鼠李糖？

實(shí)驗(yàn)五虎杖中大黃素的提取、分離和檢識(shí)虎杖又名陰陽(yáng)蓮、土地榆、苦杖，為蓼科植物虎杖（PolygonumcuspidatumsiebetZucc．）的根莖。有活血化瘀，清熱解毒，祛痰止咳等功用。近年來(lái)用于治療急性黃疸，降低血脂，升高白血球和血小板，并可治療慢性氣管炎等多種炎癥及燒傷等癥?；⒄雀o中含有大量的蒽醌成份和二苯乙烯類成份。一、虎杖根莖中已知主要成份的理化性質(zhì)1．大黃酚（Chrysophanol）：金黃色片狀結(jié)晶（丙酮）或針狀結(jié)晶（乙醇），mp196~197℃，能升華?？扇苡诒?、氯仿、乙酸、乙醇。NaOH水溶液及熱的Na2CO3水溶液。微溶于石油醚和乙醚，不溶于水，NaHCO3和Na2CO3水溶液。2．大黃素（Emodin）：橙黃色針狀結(jié)晶，mp256~257℃，能升華。易溶于乙醇，可溶于NH4OH、Na2CO3和NaOH水溶液，幾乎不溶于水。3．大黃素甲醚（Physion）：磚紅色針狀結(jié)晶，mp206℃，能升華。易溶于NaOH溶液，可溶于苯、氯仿、吡啶、甲苯，微溶于乙酸、乙酸乙酯、乙醚，不溶于水。4．大黃素葡萄糖甙（Emodinmonoglucoside）：淺黃色針狀結(jié)晶（稀乙醇中析出，含分子結(jié)晶水），mpl90~191℃。5．白藜蘆醇（Resveratol）：無(wú)色針狀結(jié)晶，mp256~257℃，216℃，264℃，能升華。易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。6．虎杖甙（白藜蘆醇葡萄糖甙，Polydatin，Piceid）：無(wú)色針狀簇晶，mp223~226℃（分解）。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、熱水，可溶于乙酸乙酯，Na2CO3和NaOH的水溶液，微溶于冷水，難溶于乙醚。二、目的要求1．掌握從虎杖中提取羥基蒽醌類成份的方法。2．熟悉用硅膠柱層析方法分離混合羥基蒽醌類成份的一般操作技術(shù)。3．熟悉羥基蒽醌類化合物的主要檢識(shí)反應(yīng)。三、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)游離蒽醌類成份能溶于含水氯仿的性質(zhì)，先將原料的濃酸溶液濕潤(rùn)后，加入含水氯仿進(jìn)行回流提取，在回流過程中即可將結(jié)合態(tài)的蒽醌（甙類）類成份水解成為游離蒽醌，這樣就可連同原存在的游離態(tài)蒽醌成份，一并被含水氯仿提取出來(lái)。也可根據(jù)虎杖中的蒽醌類成份能溶于乙醇的性質(zhì)，采用乙醇提取，又利用游離蒽醌類可溶于熱的含水氯仿的性質(zhì)，將乙醇提取物以含水氯仿熱回流，使游離蒽醌與蒽醌甙及其它極性較大的醇溶性雜質(zhì)分離。羥基蒽醌類化合物可以利用化合物酸堿強(qiáng)弱不同進(jìn)行分離。其羧基或多個(gè)－位酚羥基的可溶于碳酸氫鈉溶液，具有一個(gè)-位酚羥基的可溶于碳酸鈉溶液，故可以用PH梯度法進(jìn)行分離，另外，也可根據(jù)化合物極性大小不同用硅膠柱層析法進(jìn)行分離。大黃素的極性比大黃素甲醚大，在吸附層析中吸附較牢，因此在大黃素甲醚之后洗脫下來(lái)。四、實(shí)驗(yàn)材料虎杖粗粉、含水氯仿（水飽和）、苯、乙醇、柱層析用硅膠（100~160目）、硅膠-CMC硬板、苯∶乙酸乙酯（8∶2）、乙醚、碳酸鈉、氫氧化鈉溶液、鹽酸、點(diǎn)滴板、1000cc圓底燒瓶、蒸發(fā)皿、層析柱、試管、梨形分液漏斗、精制棉、循環(huán)水泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、電熱套、水浴鍋。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）游離蒽醌的提取方法一：稱取虎杖粗粉50g，加10%硫酸溶液50ml，充分?jǐn)嚢杌靹?，加氯?00ml，熱水浴上回流提取1小時(shí)，過濾得氯仿濾液。藥渣繼用氯仿200ml回流1小時(shí)，過濾，合并兩次氯仿提取液于圓底燒瓶中，加沸石數(shù)粒，水浴上蒸餾回收氯仿至干（可減壓抽干氯仿），得紅棕色殘留物。再加苯30ml于圓底燒瓶中水浴上回流半小時(shí)，過濾得苯濾液置于蒸發(fā)皿中，加柱層析用硅膠粉3~5g，攪拌均勻后于通風(fēng)處晾干，得均勻樣品粉末，供作柱層析分離用。方法二：取虎杖粗粉50g，加95%乙醇500ml加熱回流1小時(shí)，傾出液體，再加400ml乙醇回流半小時(shí)，合并兩次提取液，過濾，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加入含水氯仿100ml加熱回流提取1小時(shí)，傾出氯仿，如果氯仿提取液色深，則再提取1次，提取液合并，用水50ml分2~3次在分液漏斗中洗滌，洗后回收氯仿至剩約10ml，趁熱傾入一小錐形瓶中，放置析晶，抽濾，得橙黃色總游離蒽醌。（二）大黃素柱層析分離1．裝硅膠層析柱，取100~160目柱層析用硅膠粉10~15g，裝入底部墊有少許精制棉花的20×300mm層析柱內(nèi)，輕輕敲擊層析柱，使硅膠粉在柱內(nèi)均勻充實(shí)后，即得干硅膠層析柱。2．柱層析分離：取上述提取項(xiàng)下所得游離蒽醌與硅膠粉混合的樣品粉末，仔細(xì)加入硅膠層析柱的上端，輕敲層析柱，使樣品粉末平整，打開層析柱的下端活塞，緩緩加入適量苯于層析柱中，使苯慢慢滲入柱內(nèi)，繼以苯為洗脫劑進(jìn)行洗脫，柱下用錐形瓶收集洗脫液。經(jīng)過一段時(shí)間洗脫之后，可以看到在硅膠柱的上段逐漸形成清晰的紅棕色兩個(gè)色帶，繼續(xù)用苯洗脫使兩個(gè)色帶分開較大距離（2cm左右）時(shí)改用乙酸乙酯∶苯（2∶8）混合溶劑繼續(xù)洗脫，更換收集容器，直至柱上第一段色帶開始流出，控制流出液的流量收集（每15ml為l流分），并順次編號(hào)，直到層析柱上的兩個(gè)色帶全部洗脫下來(lái)之后為止。每個(gè)流分經(jīng)薄層層析檢查，相同斑點(diǎn)者合并，并分別蒸餾回收溶劑至濃縮。放置析晶，分別濾集結(jié)晶。先被洗脫下來(lái)的為大黃素甲醚，后被洗脫下來(lái)的為大黃素。（三）大黃素PH梯度分離將總蒽醌，加入乙醚約100ml，使完全溶解（或直接用上述的氯仿提取液進(jìn)行），加5%碳酸鈉溶液萃取數(shù)次（每次20~30m1），至萃取堿水液呈淡紅色為止。合并萃取堿液，加鹽酸至呈酸性反應(yīng)（PH2~3），析出全部大黃素沉淀。抽濾，水洗，再滴稀乙醇抽洗。所得粗制大黃素可用吡啶或冰醋酸重結(jié)晶。用碳酸鈉液萃取后的乙醚液（方法同上述碳酸鈉溶液的處理）。萃取液經(jīng)酸化后可得大黃素甲醚等弱酸性蒽醌類成份。（四）大黃素的檢識(shí)1．熔點(diǎn)：大黃素256~257℃2．堿液反應(yīng)：取實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品少許，加2ml乙醇溶解，繼加氫氧化鈉試液2~3滴，溶液立即產(chǎn)生紅色，繼續(xù)加稀鹽酸酸化，紅色即行退去，試寫出反應(yīng)原理。3．醋酸鎂反應(yīng)：取實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品少許，加乙醇2ml溶解，加數(shù)滴醋酸鎂試液，即產(chǎn)生橙紅色（或紫紅色）。試寫出反應(yīng)原理。4．薄層層析檢識(shí)吸附劑：硅膠-CMC薄層板展開劑：苯∶乙酸乙酯（8∶2）對(duì)照品：1%大黃素醇溶液或1%大黃素甲醚溶液供試品：分離后的1%大黃素和1%大黃素甲醚醇溶液顯色劑：自然光下觀察，再用氨氣熏后觀察六、實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)l．游離蒽醌的提取方法中，結(jié)合狀態(tài)的羥基蒽醌類成份不溶于氯仿故未被提出。方法一先用10%硫酸與氯仿共同回流，其目的使結(jié)合狀態(tài)蒽醌水解為游離狀態(tài)蒽醌易被氯仿提取出來(lái)，這樣提取出的蒽醌類成份較為完全。2．柱層析的硅膠用量，應(yīng)視上樣品量的多少而定，一般是樣品與吸附劑之比為1∶100，若用量少則分離效果差，用量過多時(shí)又勢(shì)必使柱體加長(zhǎng)，致使洗脫時(shí)間減慢。3．如采用濕法裝柱，可先在層析管中加入苯液，再通過漏斗將硅膠加入柱中，并始終保持硅膠面上有苯存在。樣品上柱時(shí)也可采用干法加樣，即將總蒽醌溶于少量丙酮，加降活性的硅膠，拌勻放置，待溶劑自然揮發(fā)或低溫去掉溶劑，小心將其加入柱頂，再以苯洗脫。4．由于大黃酚和大黃素甲醚的極性接近，用硅膠柱層析分離效果不夠理想，可采用磷酸氫鈣作為吸附劑，以石油醚為洗脫劑，則大黃酚和大黃素甲醚可依次洗脫下來(lái)。5．按照一般常規(guī)柱層分離操作，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)先用苯洗脫大黃素甲醚，后用苯、乙酸乙酯混合液溶劑洗脫大黃素，但為了實(shí)驗(yàn)的進(jìn)度不致拖延時(shí)間，不必全部洗脫大黃素甲醚之后才改換溶劑，只要能看出兩個(gè)色帶明顯分離開一定距離時(shí)，即可更換溶劑洗脫。這樣操作既可有效地將二種成份分開洗脫，又可加速洗脫時(shí)間。6．本實(shí)驗(yàn)多次使用乙醚，因此要特別注意防火安全，絕對(duì)禁止有明火的情況下，使用乙醚。七、思考題1．羥基蒽醌類成份具有哪些性質(zhì)？根據(jù)它的性質(zhì)，說明提取與分離的原理。2．大黃素的堿液反應(yīng)和醋酸鎂反應(yīng)的原理是什么？3．如何操作好硅膠柱層析？

實(shí)驗(yàn)六中藥化學(xué)成份的預(yù)試驗(yàn)中藥中所含的化學(xué)成份較為復(fù)雜，在提取分離某種中藥成份之前，一般可先進(jìn)行簡(jiǎn)單的預(yù)試驗(yàn)，初步了解其中可能含有哪些類型的成份，以便對(duì)今后的提取分離工作提供一定的參考。預(yù)試驗(yàn)方法一般可分為兩大類：一類是單項(xiàng)預(yù)試驗(yàn)，即根據(jù)需要重點(diǎn)檢查某類成份，例如尋找含生物堿成份，僅需進(jìn)行生物堿的定性反應(yīng)，以檢查生物堿的存在與否。另一類是系統(tǒng)預(yù)試法，即選用簡(jiǎn)單的定性方法對(duì)中藥中各類成份進(jìn)行較為全面的試驗(yàn)。一、目的要求1．學(xué)習(xí)中藥化學(xué)成份的預(yù)試驗(yàn)方法及原理。2．掌握中藥預(yù)試驗(yàn)的程序及結(jié)果的判斷。二、實(shí)驗(yàn)原理系統(tǒng)預(yù)試和單項(xiàng)預(yù)試的基本原理基本相似，首先制備供試液，然后進(jìn)行各類成份的檢識(shí)。制備供試液主要是利用各類化學(xué)成份在不同溶劑中的溶解度不同分成數(shù)個(gè)部份，如水溶性、醇溶性及石油醚溶性部份。有時(shí)還可結(jié)合化合物的酸堿性不同，采用酸或堿處理，使其再細(xì)分為含酸性、含堿性及含中性的化合物部份。如欲進(jìn)一步了解預(yù)試的結(jié)果，也可根據(jù)化合物極性大小和分子分配子數(shù)不同采用吸附溥層層析或紙層析進(jìn)行觀察。制成供試液后就可分別進(jìn)行各類成份的檢識(shí)，根據(jù)檢出結(jié)果確定藥材中含有哪些類型的化學(xué)成份。一般預(yù)試的結(jié)果只能參考，因?yàn)轭A(yù)試所采用的檢出反應(yīng)往往不是專屬性很高的反應(yīng)，或是各類成份之間存在干擾，使結(jié)果不明顯或不正確。因此，要學(xué)會(huì)根據(jù)檢識(shí)反應(yīng)的檢識(shí)范圍及供試液的制備方法和層析結(jié)果諸因素綜合考慮后再作一個(gè)恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)論。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）實(shí)驗(yàn)樣品制取方法1．水浸液取中藥粉末4g，加40ml蒸餾水浸泡過夜，濾取3ml濾液供檢查氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)，其余部份放在60℃水浴加熱約10min，過濾，濾液供糖、多糖、有機(jī)酸、皂甙、甙類、酚類、鞣質(zhì)等項(xiàng)的預(yù)試。2．乙醇提取液取中藥粉末約5g，加60ml95%乙醇，于水浴中加熱回流20min，過濾。其中30ml濾液供黃酮類化合物、蒽醌、鞣質(zhì)、甙類、有機(jī)酸、香豆素、萜類、內(nèi)酯、甾體等項(xiàng)的預(yù)試，其余濾液濃縮至1ml，供圓底濾紙層析時(shí)點(diǎn)樣用。如中藥中的葉綠素較多，應(yīng)先除去?？蓪⑺幉挠?5%乙醇加熱回流，提取液加水使其含醇量為70%，再傾入分液漏斗中，用等體積的石油醚提取兩次，以除去葉綠素，分出下層70%乙醇提取液，減壓濃縮至糖漿狀，冷卻過濾，再做上述試驗(yàn)。3．酸性醇提取液取中藥粉末2g，加0.5%鹽酸的乙醇溶液10ml，水浴上回流10min，過濾，濾液供生物堿檢查用。（二）試管及濾紙片預(yù)試法1．檢查生物堿取酸性醇提取液，先用稀NH4OH調(diào)至中性，水浴蒸干。再加5%H2SO44ml溶解殘?jiān)?，過濾，濾液供以下試驗(yàn)用。（1）碘化汞鉀試劑（Mayer）：取濾液lml，加入試劑1~2滴，如有淺黃色或白色沉淀，可能有生物堿。（2）碘化鈉鉀試劑（Dragendorff試劑）：取濾液lml，加入試劑1~2滴，如有紅色沉淀產(chǎn)生，可能有生物堿存在。（3）硅鎢酸試劑：取濾液lml，加入試劑1~2滴，如有淺黃色或灰白色沉淀可能含有生物堿。2．檢查氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)（1）雙縮脲試驗(yàn)（Biuret反應(yīng)）：取1%硫酸銅溶液與10%氫氧化鈉溶液各lml混合。取1m1冷水浸液，加入上述試劑，搖動(dòng)后如顯紫紅色，表示含多肽或蛋白質(zhì)。（2）茚三酮試劑（Ninhydrin試劑）：取冷水浸液lml，加入0.2%茚三酮乙醇溶液2~3滴，搖勻，在沸水浴中加熱5min，冷卻后，如顯藍(lán)色或藍(lán)紫色，表明含有氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)。3．檢查有機(jī)酸（1）用PH試紙檢查：將熱水提取液和乙醇提取液分別用PH試紙檢查，如呈酸性，則可能含有游離酸或酚性化合物。（2）溴酚藍(lán)試劑：點(diǎn)乙醇提取液于濾紙片上，噴灑0.1%溴酚藍(lán)試劑，如在藍(lán)色背景上顯黃色斑點(diǎn)，表明可能含有機(jī)酸（如不明顯，可再噴灑氨水，然后暴露在鹽酸氣體中，背景逐漸由藍(lán)色變?yōu)辄S色，而有機(jī)酸斑點(diǎn)為藍(lán)色）。4．檢查酚類化合物和鞣質(zhì)（1）1%三氯化鐵試劑：取乙醇提取液lml，提取液如為酸性，即可直接進(jìn)行檢查，如為酸性，可加乙酸酸化后，再加三氯化鐵試劑1~2滴，如呈藍(lán)墨綠色或藍(lán)紫色，證明可能含有酚類或鞣質(zhì)。（2）香草醛-鹽酸試劑：將乙醇提取液點(diǎn)在濾紙片上，干燥后噴灑香草醛-鹽酸試劑，如呈不同程度的紅色，表明具有間苯二酚結(jié)構(gòu)的化合物。（3）三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑：將乙醇提取液點(diǎn)在濾紙片上，噴灑三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑，如呈藍(lán)色斑點(diǎn)，證明可能含有鞣質(zhì)、酚類或還原性化合物。為了進(jìn)一步確證是一般酚類化合物還是鞣質(zhì)，可利用鞣質(zhì)與生物堿或明膠產(chǎn)生沉淀而除去鞣質(zhì)后進(jìn)行試驗(yàn)（生物堿可選擇0.1%咖啡堿水溶液）。5．檢查還原糖、多糖和甙（1）斐林試劑（Fehling）：取熱水浸液lml，加入新配制的斐林試劑4~5滴在沸水浴上加熱數(shù)分鐘，如產(chǎn)生紅棕色沉淀，證明含有還原糖或其還原性物質(zhì)。為了檢查多糖和甙，另取4ml水浸液加lml斐林試劑，在水浴上加熱10min，濾去沉淀，濾液用10%鹽酸酸化后，再加入過量的鹽酸lml，于沸水浴上加熱半小時(shí)，如有混懸物析出，表明可能有甙類，濾去沉淀，加10%氫氧化鈉呈堿性，再加入斐林試劑，加熱10min，如有紅棕色沉淀，表示可能有多糖甙或甙。（2）-萘酚試驗(yàn)（Molish反應(yīng)）：取水提取液或乙醇提取液lml，加入5%-萘酚乙醇液2~3滴，搖勻，沿試管壁緩緩加入少量濃硫酸，如在濃硫酸的接觸面產(chǎn)生紫紅色環(huán)，證明含有糖類、多糖或甙類。（3）鄰苯二甲酸苯胺試劑：將冷水浸液點(diǎn)在濾紙片上，噴灑鄰苯二甲酸苯胺試劑，在105℃加熱數(shù)分鐘，顯棕色或棕紅色即證明含有還原糖。6．檢查皂甙（1）泡沫試驗(yàn)：取熱水提取液1~2ml于試管內(nèi)，激烈振搖，發(fā)泡產(chǎn)生多量蜂窩狀泡沫，放置10min以上，甚至加入乙醇，泡沫也不明顯地減少，表明含有皂甙。（2）乙酸酐-濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)）：取乙醇提取液l~2ml，揮去乙醇，殘?jiān)芙饣驊腋∮谝宜狒校渭?滴濃硫酸，如呈紫紅色，并且在溶液上層逐漸變綠，證明含有甾體、三萜類或皂甙。7．檢查甾體膠三萜類化合物（1）乙酸酐-濃硫酸試驗(yàn)：取乙醇提取液3ml，將溶液揮去，于殘?jiān)屑尤雔ml冰乙酸使其溶解，再加入lml乙酸酐，最后滴入1滴濃硫酸，試管顏色逐漸由黃紅紫藍(lán)墨綠，表明含有甾體皂甙、甾醇或三萜類化合物，其中甾體化合物顏色變化較快，而三萜類化合物顏色變化較慢。8．檢查黃酮類化合物（1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液lml于試管中加鎂粉少許，再滴入濃鹽酸數(shù)滴（必要時(shí)在沸水中加熱3min），如顯紅紫色說明有黃酮類化合物存在的可能。（2）堿液試驗(yàn)：取乙醇提取液點(diǎn)于濾紙片上，與氨蒸氣接觸，如顯黃色，當(dāng)濾紙離開蒸氣數(shù)分鐘后，黃色又消褪，說明有黃酮類化合物存在的可能。（3）1%的三氯化鋁乙醇溶液：將樣品點(diǎn)在濾紙片上，噴灑此試劑，干燥后如呈黃色斑點(diǎn)，而于紫外燈光下如顯極明顯之黃色或黃綠色熒光，表明可能有黃酮類化合物存在。9．檢查內(nèi)酯、香豆素及其甙（1）取乙醇提取液及水提取液點(diǎn)于濾紙片上，放在紫外燈光下觀察，如有藍(lán)色熒光，加堿后變成黃色熒光，表明可能含有香豆素及其甙類。（2）重氮化試驗(yàn)：取乙醇提取液lml，加等量30%碳酸鈉于水浴上煮沸3min，冷卻后，加新配制的重氮化試劑1~2滴，如顯紅色，表明可能含有香豆素及其甙類。（3）異羥肟酸鐵試驗(yàn)（酯的反應(yīng)）：取乙醇提取液lml，加3滴鹽酸羥胺的飽和乙醇液和10滴氫氧化鈉的飽和乙醇液，加溫至反應(yīng)開始（有氣泡產(chǎn)生），冷卻，加5%鹽酸使成弱酸性，再加5滴1%三氯化鐵溶液。如有橙紅色或紫色反應(yīng)，表明含有酯、內(nèi)酯、香豆素及其甙類。10．檢查強(qiáng)心甙（1）堿性3,5-二硝基苯甲酸試劑（Kedde試劑）：取乙醇提取液0.5ml，加Kedde試劑3~4滴，如呈紅色或紫色，表明可能含有強(qiáng)心甙。（2）堿性苦味酸試劑（Baljet試劑）：取乙醇提取液lml，加入Baljet試劑1滴，如呈橙色或紅色反應(yīng)，表明可能含有強(qiáng)心甙。（3）亞硝酰鐵氰化鈉試劑：取乙醇提取液lml，在水浴上蒸干，用lml吡啶溶解殘?jiān)?，加?.3%亞硝酰鐵氰化鈉溶液4~5滴，混勻，再加入10%氫氧化鈉1~2滴，搖勻，如呈紅色反應(yīng)，而顏色又逐漸消失，表明可能含有強(qiáng)心甙。11．檢查蒽醌類（1）1%硼酸水溶液：將乙醇提取液點(diǎn)于濾紙片上，噴灑1%硼酸水溶液，如呈黃橙、紅色或熒光，表明含蒽醌及其甙類。（2）5%KOH水溶液：將乙醇提取液點(diǎn)于濾紙片上，噴灑5%KOH水溶液，如呈黃橙、紅色或熒光，表明含蒽醌及其甙類。（3）堿性試驗(yàn)：取乙醇提取液lml，加入1%NaOH溶液lml，如產(chǎn)生紅色，加入少量30%過氧化氫液，加熱后，紅色不褪，用