海南長臀鮠種質(zhì)

2DB46/TXXXX—2022海南長臀鮠種質(zhì)本文件規(guī)定了本標準規(guī)定了海南長臀鮠Cranoglanismultiradiatus(Koller,1927)的學名與分類、分布與生態(tài)習性、形態(tài)特征、生長與繁殖特性、遺傳學特性和檢測方法。本文件適用于海南長臀鮠的種質(zhì)鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T18654.1養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第1部分檢驗規(guī)則GB/T18654.2養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第2部分抽樣方法GB/T18654.3養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第3部分性狀測定GB/T18654.4養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第4部分年齡與生長的測定GB/T18654.6養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第6部分繁殖性能的測定GB/T18654.12養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第12部分染色體組型分析GB/T18654.14養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第14部分DNA含量的測定3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4學名與分類4.1學名海南長臀鮠Cranoglanismultiradiatus(Koller,1927)。4.2俗名白骨魚、骨魚、角魚。4.3分類隸屬于硬骨魚綱（Osteichthyes）、鲇形目（Siluriformes）、長臀鮠科（Cranoglanididae）、長臀鮠屬（Cranoglanis）。5分布與生態(tài)習性3DB46/TXXXX—2022海南長臀鮠分布于海南省的南渡江、昌化江等流域，主要棲息于河流中下層區(qū)域，常棲息于江河、水庫底層的石縫或坑中。肉食性，以淡水雙殼貝類、小魚蝦等為食。6形態(tài)特征6.1外部形態(tài)頭胸部較粗，腹部和尾部側(cè)扁，腹部平坦?？谇拔?、弧形、上頜比下頜稍長。須4對，鼻須和上頜須各1對，頦須2對，鼻須可伸達眼后緣，上頜須可伸達胸鰭中部，外頦須可伸達眼后緣至胸鰭基部，內(nèi)頦須可伸達眼部。背部稍隆起，具背鰭和脂鰭各1個，背鰭較短小，具較長的鋸齒狀硬棘，起點位于胸鰭起點之后。脂鰭較小，后端游離。胸鰭具鋸齒狀硬棘，基部上方有一個呈三角形的匙骨突，胸鰭末端可伸達腹鰭，肛門起點位于臀鰭起點前方。臀鰭基長，不與尾鰭相連；尾鰭叉形，上下葉幾乎齊平。體色為銀灰色或黑褐色，體色從背部至腹鰭基部逐漸變淡，腹部白色，各鰭均呈灰色。（海南長臀鮠外部形態(tài)如圖1所示）。圖1海南長臀鮠外形圖6.2可數(shù)性狀6.2.1背鰭鰭式6.2.2臀鰭鰭式3-33～35。6.2.3胸鰭鰭式6.2.4腹鰭鰭式6.2.5鰓耙數(shù)17～18（左側(cè)第一鰓弓外側(cè)的鰓耙數(shù)）。4DB46/TXXXX—20226.2.6脊椎骨41～44。6.3可量性狀海南長臀鮠可量性狀的實測比例值見表1。表1海南長臀鮠可量性狀比例值項目體長／體高3.64±0.31體長／頭長3.80±0.38體長／尾柄長12.88±6.38體長／尾柄高11.20±1.25頭長／吻長2.33±0.23頭長／眼徑4.47±1.50頭長／眼間距2.68±1.03尾柄長／尾柄高1.06±0.436.4內(nèi)部構(gòu)造特征6.4.1鰾鰾3室，分前室、左后室和右后室，前室較大，前室分別與兩個后室相連，但兩個后室之間不連通末端尖。6.4.2腹膜暗灰色。6.4.3性腺性腺為1對，位于魚體腹面兩側(cè)；性成熟個體的卵巢呈長袋狀，精巢呈樹枝狀，繁殖期成熟的雌魚的卵巢呈暗黃色，卵巢中有已成型呈暗黃色游離的卵粒，輕擠腹部可擠出游離的卵子，雄魚精巢呈乳白色，精液很難擠出。7生長與繁殖特性7.17.1生長海南長臀鮠體長與體重的關(guān)系符合指數(shù)函數(shù)，關(guān)系式見式（1）。W=0.0062L3.38，R2=0.9945 式中：5DB46/TXXXX—2022W――體重，單位為克（g）；L――體長，單位為厘米（cm）。7.2繁殖特性7.2.1性成熟年齡自然條件下，3齡初次性成熟，體重規(guī)格為：雌魚0.6kg，雄魚1.0kg。7.2.2繁殖季節(jié)繁殖期為每年的3月～10月。7.2.3產(chǎn)卵類型性腺每年成熟1次，卵巢發(fā)育為非同步型，可多次分批產(chǎn)卵，卵具粘性。7.2.4懷卵量3齡以上個體相對繁殖力為10.4粒/g體重～14.2粒/g體重，個體的絕對繁殖力為0.6萬粒～1.3萬粒，卵徑為1.2mm～1.6mm。8遺傳學特性8.1細胞遺傳學特性8.1.1染色體數(shù)2n=76。8.1.2染色體臂數(shù)NF=94。8.1.3核型公式2n=4m+14sm+14st+44t。公式中：n：倍數(shù)，m：中部著絲粒染色體，sm：亞中部著絲粒染色體，st：亞端部著絲粒染色體，t：端部著絲粒染色體。海南長臀鮠染色體中期分裂相及組型參見附錄A。8.2分子遺傳學特性8.2.1DNA條形碼以線粒體細胞色素C氧化酶亞基Ⅰ(COⅠ)基因的特定區(qū)段作為海南長臀鮠DNA條形碼8.2.2COⅠ基因DNA條形碼6DB46/TXXXX—2022海南長臀鮠線粒體COI基因全序列共631個堿基，堿基組成比例為A占25.7%；C占28.1%；G占17.1%；T占29.2%。經(jīng)檢測海南長臀鮠種內(nèi)的序列歧異度D≤0.5%，種內(nèi)遺傳距離在0.000-0.002之間，海南長臀鮠DNA條形碼序列如下：1TGAGCCGGATAGTTGGCACAGCTCTTAGCCTACTAATTCGAGCAGAGCTAGCCCAACCTG6061GGGCCCTCTTAGGTGATGATCAGATTTACAATGTTATTGTTACTGCTCATGCCTTCGTAA120121TAATCTTCTTCATAGTAATACCAATTATAATTGGGGGCTTTGGAAACTGACTTGTTCCAC180181TAATAATTGGGGCACCCGACATAGCATTCCCCCGAATAAATAATATGAGCTTCTGACTCC240241TTCCCCCCTCTTTTTTACTGCTACTAGCCTCCTCCGGAGTCGAAGCCGGGGCCGGAACAG300301GATGAACTGTTTATCCTCCCCTTGCTGGAAACCTTGCACATGCCGGAGCTTCCGTAGACC360361TAACCATTTTCTCATTACATCTTGCAGGAGTCTCATCCATTCTAGGGGCCATCAACTTTA420421TTACAACTATTATTAACATAAAACCCCCAGCCACATCACAATATCAAACACCCTTGTTTG480481TCTGAGCTGTCCTAATTACAGCCGTTCTCCTTCTACTAGCCCTACCAGTACTAGCCGCTG540541GTATTACAATACTCTTAACAGACCGAAACCTAAACACCACATTCTTTGACCCTTCAGGTG600601GAGGAGACCCAATTCTTTACCAGCATCTTTT6319檢測方法9.1性狀檢測按GB/T18654.3的規(guī)定執(zhí)行。9.2年齡與生長檢測采用耳石鑒定年齡，按GB/T18654.4的規(guī)定執(zhí)行。9.3繁殖力檢測按GB/T18654.6的規(guī)定執(zhí)行。9.4染色體檢測按GB/T18654.12的規(guī)定執(zhí)行。9.5DNA含量檢測按GB/T18654.14的規(guī)定執(zhí)行。9.6DNA條形碼檢測9.6.1DNA提取取海南長臀鮠背部肌肉或魚鰭等組織，用手術(shù)剪剪碎，再用試劑盒提取其基因組DNA，溶解后放冰箱，-20℃保存?zhèn)溆谩?.6.2PCR擴增9.6.2.1DNA條形碼基因引物序列上游引物：5’-TTCTCCACCAACCACAARGAYATYGG-3’；7DB46/TXXXX—2022下游引物：5’-CACCTCAGGGTGTCCGAARAAYCARAA-3’。9.6.2.2擴增反應(yīng)體系反應(yīng)體系為50μL，其中Takara公司PremixTaq酶25μL，10μmol/L的引物2μL，DNA模板50ng，無菌ddH2O補足50μL。9.6.2.3擴增反應(yīng)條件94℃變性3min，1個循環(huán)；94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸45s，35個循環(huán)；72℃延伸10min，4℃保存。9.6.3序列測定PCR產(chǎn)物經(jīng)回收純化后，送基因檢測公司進行測序，使用一代ABI3730xl，Sanger測序儀進行測序，為保證測序的可靠性和準確性，采用雙向測序，并進行人工核對、校正。9.6.4結(jié)果計算序列歧異度(D)按式（2）計算D=序數(shù) 使用MEGA.7.0計算種內(nèi)遺傳距離。9.7判定規(guī)則按GB/T18654.1的規(guī)定執(zhí)行。8DB46/TXXXX