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BCA法測定蛋白濃度第一頁,共十二頁?!驹怼浚簤A性條件下,蛋白將Cu2+復(fù)原為Cu+,Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比照,即可計(jì)算待測蛋白的濃度。
第二頁,共十二頁。【主要特點(diǎn)】1.不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響。2.檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬氏亮藍(lán)。3.快速:45分鐘內(nèi)完成測定。4.準(zhǔn)確靈敏,線性范圍廣。5.經(jīng)濟(jì)實(shí)用:在微孔板中進(jìn)行測定,可大大節(jié)約樣品和試劑用量。
第三頁,共十二頁?!緦?shí)驗(yàn)器材與試劑】1.器材:分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋。2.試劑:BCA試劑盒;待測樣品。第四頁,共十二頁。【操作步驟】1.配制BCA工作液:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑〔50:1〕配制適量BCA工作液,充分混勻。2.稀釋標(biāo)準(zhǔn)品:用生理鹽水稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)品BSA。實(shí)驗(yàn)步驟第五頁,共十二頁。實(shí)驗(yàn)步驟200第六頁,共十二頁。蛋白液稀釋第七頁,共十二頁。第八頁,共十二頁。5、按上表,將稀釋好的A-GBSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品〔原液,1:10,1:100稀釋液〕各150μl分別加到作好標(biāo)記的試管中。推薦每個(gè)測定的樣本做2-3個(gè)平行反響。6、向每個(gè)試管中各參加3mlBCA工作液,充分混勻,37℃水浴中孵育30分鐘,將各管冷卻至室溫,須在3-5分鐘內(nèi)完成檢測。7、用分光光度計(jì)在562nm處,測定每個(gè)樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值,同時(shí)做好記錄。8、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。第九頁,共十二頁。【本卷須知】:1.標(biāo)本的充分混勻。2.要得到更為精確的蛋白濃度結(jié)果,每個(gè)蛋白樣品均需做復(fù)孔,每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.使用水浴箱溫育
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