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文檔簡介

BCA法測定蛋白濃度第一頁，共十二頁。【原理】：堿性條件下，蛋白將Cu2+復(fù)原為Cu+，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比照，即可計算待測蛋白的濃度。

第二頁，共十二頁?！局饕攸c】1.不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響。2.檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬氏亮藍(lán)。3.快速：45分鐘內(nèi)完成測定。4.準(zhǔn)確靈敏,線性范圍廣。5.經(jīng)濟實用：在微孔板中進(jìn)行測定，可大大節(jié)約樣品和試劑用量。

第三頁，共十二頁?！緦嶒炂鞑呐c試劑】1．器材:分光光度計、恒溫水浴鍋。2.試劑:BCA試劑盒；待測樣品。第四頁，共十二頁?！静僮鞑襟E】1.配制BCA工作液:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑〔50:1〕配制適量BCA工作液，充分混勻。2.稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：用生理鹽水稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)品BSA。實驗步驟第五頁，共十二頁。實驗步驟200第六頁，共十二頁。蛋白液稀釋第七頁，共十二頁。第八頁，共十二頁。5、按上表，將稀釋好的A-GBSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品〔原液，1：10,1:100稀釋液〕各150μl分別加到作好標(biāo)記的試管中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反響。6、向每個試管中各參加3mlBCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鐘，將各管冷卻至室溫，須在3-5分鐘內(nèi)完成檢測。7、用分光光度計在562nm處，測定每個樣品及BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值，同時做好記錄。8、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品中的蛋白濃度。第九頁，共十二頁?！颈揪眄氈浚?.標(biāo)本的充分混勻。2.要得到更為精確的蛋白濃度結(jié)果，每個蛋白樣品均需做復(fù)孔,每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.使用水浴箱溫育

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