TCAICC 03-2023 生乳中多菌靈的快速檢測 膠體金免疫層析法

ICS67.050Z備案號：全 聯 農 業(yè) 產 業(yè) 商 會 標 準生乳中多菌靈的快速檢測膠體金免疫層析法Rapiddetectionofcarbendaziminrawmilk—Colloidalgoldimmunochromatography送審稿2023-12-31發(fā)布 2024-01-01實施全聯農業(yè)產業(yè)商會發(fā)布PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次目 次 I前 言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術語和定義 1原理 1試劑與材料 1儀器與設備 2分析步驟 2結果判定 3結果確認 3性能指標 4其他 4附 錄 A（規(guī)范性）快速檢測方法性能指標計算 5前 言本文件按照GB/T1本文件由全聯農業(yè)產業(yè)商會提出。本文件起草單位：全聯農業(yè)產業(yè)商會、內蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）邦科技股份有限公司、北大荒研究院（北京）有限公司、西北大學丹慧、惠光朋、田桂艷、張坤、李靜本文件為首次發(fā)布。PAGEPAGE1生乳中多菌靈的快速檢測膠體金免疫層析法范圍本文件規(guī)定了生乳中多菌靈的膠體金免疫層析快速檢測方法。本文件適用于生乳中多菌靈的快速定性測定。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法國市監(jiān)食檢規(guī)〔2023〕1號市場監(jiān)管總局關于規(guī)范食品快速檢測使用的意見術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。原理（T線）試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。試劑甲醇（CH3OH）。CAS1，純度≥98%。表1 多菌靈參考物質的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質量多菌靈Carbendazim10605-21-7C9H9N3O2191.19注：或等同可溯源物質。溶液配制（100（5.1.2）1精確至0.01mg），置于小燒杯中，用甲醇（5.1.1）溶解，定量轉移至10mL容量瓶中，再用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為100μg/mL的多菌靈標準儲備液。-20℃避光保存，有效期6個月。（1（100μg/mL）（5.2.1）0.110mL（5.1.1）1μg/mL的多菌靈標準工作液。臨用新配。材料多菌靈膠體金免疫層析試紙條，適用基質為生乳。需在陰涼、干燥、避光條件下保存。金標微孔（含膠體金標記的特異性抗體）。試紙條。儀器與設備0.01mg。6.2 移液器：10μL～200μL、100μL～1000μL。迷你金屬浴。膠體金讀數儀（可選）。分析步驟試樣制備取適量有代表性樣品充分混勻。試樣提取以生乳為基質的樣品可直接上樣檢測或根據產品說明書稀釋后檢測。測定步驟吸取200μ5..15103℃溫育5in，將檢測試紙條（5.3.2）樣品端垂直向下插入金標微孔中，35℃溫育5min，取出試紙條，對結果進行判定。注1：測定步驟建議按照試紙條說明書。注2：結果判定可使用膠體金讀數儀，讀數儀的具體使用參照儀器使用說明書。質控試驗每批樣品應同時進行空白試驗和加標質控試驗?？瞻自囼灧Q取空白試樣，按照7.2和7.3步驟與樣品同法操作。加標質控試驗準確移取空白試樣1.96mL放入離心管中，加入0.04mL多菌靈標準工作液（1μg/mL）（5.2.2），使試樣中多菌靈濃度為20μg/L，按照7.2和7.3步驟與樣品同法操作。結果判定目視判定通過對比質控線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進行結果判定。目視判定示意圖見圖1。陰性結果質控線（C線）顯色，檢測線（T線）顏色深于質控線（C線或與質控線（C線）顏色基本一致，表明樣品中多菌靈含量低于方法檢出限，判定為陰性。陽性結果（C線（T線（C線無效質控線（C線）不顯色，無論檢測線（T線）是否顯色，表明操作不正確或試紙條已失效，檢測結果無效。圖1 目視判定示意圖讀數儀測定按讀數儀說明書要求操作，直接讀數并進行結果判定。質控試驗要求空白試驗測定結果應為陰性，加標質控試驗測定結果應為陽性。結果確認當檢測結果為陽性時，采用參比方法進行確證。性能指標檢出限：20μg/L。10.2 靈敏度：≥95%。10.3 特異性：≥90%。假陰性率：≤5%。假陽性率：≤10%。注：性能指標計算方法見附錄A。交叉反應率：苯菌靈≤80%，阿苯達唑≤15%。其他本方法參比方法為GB/T20772-2008《動物肌肉中461種農藥及相關化學品殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》（包括所有的修改單）。附 錄 A（規(guī)范性）快速檢測方法各個性能指標計算方法見表A.1。表A.1 快速檢測方法性能指標計算方法樣品情況a檢測結果b總數陽性陰性陽性N11N12N1.＝N11＋N12陰性N21N22N2.＝N21＋N22總數N.1＝N11＋N21N.2＝N12＋N22N＝N1.＋N2.或N.1＋N.2顯著性差異2)2(12－21－1)2/(12＋21)，自由度(df)＝1靈敏度(p＋)/%p＋＝N11/N1.×100特異性(p－)/%p－＝N22/N2.×100假陰性率(pf－)/%pf－＝N12/N1.×100＝100－靈敏度假陽性率(pf＋)/%pf＋＝N21/N2.×100＝100－特異性相對準確度c/%(N11＋N22)/(N1.＋N2.)×100注：N為任何特定單元的結果數，第一個下標指行，第二個下標指列。例如，N11表示第一行，第一列；N1.表示所有的第一行，N.