高效液相色譜操作步驟課件

高效液相色譜操作步驟課件REPORTING2023WORKSUMMARY目錄CATALOGUE高效液相色譜簡(jiǎn)介高效液相色譜儀器介紹高效液相色譜操作步驟高效液相色譜常見問題與解決PART01高效液相色譜簡(jiǎn)介0102高效液相色譜的定義高效液相色譜通過高壓泵將樣品混合物通過固定相的色譜柱，實(shí)現(xiàn)各組分的分離，并由檢測(cè)器檢測(cè)。高效液相色譜（HPLC）：是一種基于色譜分離原理，利用液體作為流動(dòng)相的分離分析技術(shù)?；诓煌M分在固定相和流動(dòng)相之間的分配平衡，實(shí)現(xiàn)各組分的分離。分離原理流動(dòng)相固定相通過高壓泵推動(dòng)，使樣品在色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離。色譜柱中的填料，不同組分在固定相上的吸附力不同。030201高效液相色譜的原理藥物分析食品安全環(huán)境監(jiān)測(cè)生物醫(yī)藥高效液相色譜的應(yīng)用01020304用于藥物的分離、純化和含量測(cè)定。檢測(cè)食品中的農(nóng)藥殘留、添加劑等。測(cè)定水體、土壤中的污染物。用于蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的分離分析。PART02高效液相色譜儀器介紹輸液泵應(yīng)具備高精度、高穩(wěn)定性和低脈動(dòng)性能，以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的流量控制和良好的分離效果。在使用輸液泵時(shí)，需注意泵的維護(hù)和保養(yǎng)，定期清洗和更換密封圈等易損件，以保證其正常運(yùn)行和延長(zhǎng)使用壽命。輸液泵是高效液相色譜儀的核心部件之一，用于提供恒定的流動(dòng)相流速，確保樣品在色譜柱中得到有效的分離。輸液泵色譜柱是高效液相色譜儀的關(guān)鍵部件，用于分離樣品中的不同組分。色譜柱由固定相和柱管組成，根據(jù)不同分離需求選擇合適的固定相和柱管材質(zhì)。在使用色譜柱時(shí)，需要注意柱的維護(hù)和保養(yǎng)，避免柱壓過高或過低，定期清洗和再生色譜柱，以保證其分離效果和使用壽命。色譜柱檢測(cè)器是高效液相色譜儀的另一個(gè)核心部件，用于檢測(cè)色譜柱流出物中的組分。檢測(cè)器種類繁多，常用的有紫外可見光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器等。在選擇檢測(cè)器時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣品特性和分離要求進(jìn)行選擇，以確保檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。檢測(cè)器

數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)是高效液相色譜儀的重要組成部分，用于處理和記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)具備強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，如基線校正、峰識(shí)別、定量分析等。在使用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)時(shí)，需注意系統(tǒng)的維護(hù)和更新，以保證其正常運(yùn)行和處理結(jié)果的準(zhǔn)確性。PART03高效液相色譜操作步驟確保高效液相色譜儀處于良好狀態(tài)，檢查泵、檢測(cè)器等部件是否正常工作。儀器準(zhǔn)備根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，準(zhǔn)備適量的流動(dòng)相、樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。試劑準(zhǔn)備選擇合適的色譜柱，確保其完好無損，并按照說明書進(jìn)行安裝和清洗。色譜柱準(zhǔn)備準(zhǔn)備工作根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇合適的溶劑進(jìn)行溶解或稀釋，確保樣品能夠順利通過色譜柱。樣品溶解與稀釋根據(jù)進(jìn)樣量選擇合適的進(jìn)樣針和進(jìn)樣口，確保進(jìn)樣準(zhǔn)確、快速。進(jìn)樣器準(zhǔn)備將樣品通過進(jìn)樣器注入色譜柱，注意進(jìn)樣量、進(jìn)樣速度和進(jìn)樣方式對(duì)結(jié)果的影響。進(jìn)樣操作樣品處理與進(jìn)樣檢測(cè)器設(shè)置根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的檢測(cè)器類型，并設(shè)置適當(dāng)?shù)臋z測(cè)條件，如波長(zhǎng)、響應(yīng)時(shí)間等。流動(dòng)相設(shè)置根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置合適的流動(dòng)相比例、流速和梯度，確保樣品在色譜柱中得到有效分離。運(yùn)行色譜圖啟動(dòng)色譜儀開始運(yùn)行，觀察并記錄色譜圖，注意峰形、峰高、峰面積等參數(shù)的變化。操作過程通過色譜工作站或手動(dòng)記錄色譜圖上的數(shù)據(jù)點(diǎn)，包括各峰的保留時(shí)間、峰高、峰面積等。數(shù)據(jù)采集對(duì)采集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行平滑、基線校正、峰識(shí)別等處理，提取出有用的信息。數(shù)據(jù)處理根據(jù)處理后的數(shù)據(jù)，分析各組分的含量、純度等參數(shù)，并進(jìn)行相應(yīng)的計(jì)算和解釋。結(jié)果分析數(shù)據(jù)處理與分析PART04高效液相色譜常見問題與解決原因分析流速變化、泵密封圈磨損、單向閥堵塞、管路接頭松動(dòng)或漏液、溶劑不純等。解決措施調(diào)整流速、更換密封圈、清洗或更換單向閥、緊固管路接頭、檢查并更換溶劑。壓力異常壓力波動(dòng)大、壓力升高或降低、壓力突然為0等。壓力異常問題03解決措施清洗或更換色譜柱、減小進(jìn)樣量、稀釋樣品、調(diào)整流動(dòng)相配比。01峰形異常拖尾峰、峰不尖銳、峰分裂等。02原因分析色譜柱污染或柱效下降、進(jìn)樣量過大、樣品濃度過高、流動(dòng)相配比不合適等。峰形異常問題重復(fù)性差每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異較大。原因分析樣品不均勻、操作不穩(wěn)定、儀器狀態(tài)波動(dòng)等。解決措施對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理、穩(wěn)定操作條件、定期對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)。重復(fù)性差問題123各組分之間無法完全分離或分離效果不好。分離度不佳流動(dòng)相配比不合適、柱溫過