SN-T0220-2016出口水果中多菌靈殘留量的檢測(cè)方法

中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)代替SN0220—1993出口水果中多菌靈殘留量的檢測(cè)方法Determinationofcarbendazimresidueinfruitsforexport2016-03-09發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009、GB/T20001.4—2001和SN/T0001-1995《出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫的基本規(guī)定》給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)代替SN0220—1993《出口水果中多菌靈殘留量檢驗(yàn)方法》,本標(biāo)準(zhǔn)與SN0220—1993相比——修改了標(biāo)準(zhǔn)名稱；——標(biāo)準(zhǔn)適用范圍增加了蘋果、獼猴桃、西瓜、葡萄(見(jiàn)第1章);萃取條件進(jìn)行了修改；——增加“液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法”(見(jiàn)第4章)。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國(guó)江西出入境檢驗(yàn)檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：1出口水果中多菌靈殘留量的檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口水果中多菌靈殘留量測(cè)定的高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3第一法高效液相色譜法(HPLC法)3.2.4鹽酸：36%～38%。3.2.5氨水：25%～28%。3.2.12標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100mg/L):準(zhǔn)確稱取多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品(折合成多菌靈含量為10.0mg),用甲醇溶解并定容至100mL,混勻。-18℃以下避光保存。3.2.13標(biāo)準(zhǔn)中間液(10mg/L):取1.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.2.12)用甲醇稀釋至10mL,4℃以下避光3.2.14標(biāo)準(zhǔn)工作液：臨用前取適量標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.2.13),用流動(dòng)相稀釋至0.1μg/mL、0.25μg/mL、23.2.15混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱(Mixed-modestrongcationionexchangeSPE):OasisMCX”6mL,150mg或相當(dāng)者。使用前依次用6mL甲醇(3.2.2)柱子進(jìn)行活化。3.3儀器和設(shè)備3.4試樣的制備與保存取有代表性樣品約500g.用組織搗碎機(jī)將樣品勻漿，混合均勻，裝入潔凈容器內(nèi)密封并做好標(biāo)識(shí)。試樣于一18℃冰箱內(nèi)保存。制樣和樣品保存過(guò)程中，應(yīng)防止舉晶受到污染和待測(cè)物損失。稱取5g試樣(精確至0.01g)于50mL具塞塑料離心管中，加入0.5mL1.0mol/L氫氧化鈉溶液(3.2.7)和20mL乙酸乙酯渦旋混勻后，振蕩提取30min,4500r/min離心5min,收集上清液到150mL濃縮瓶中。殘?jiān)偌尤?0mL乙酸乙酯，重復(fù)提取一次，合并上清液，于45℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至5mL左右，轉(zhuǎn)移至25mL離心管中，于45℃下氮?dú)獯蹈?，?0mL0.1mol/L鹽酸溶液(3.2.8)超聲將3.5.1所得待凈化溶液全部轉(zhuǎn)移至活化好的混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱(3.2.15)中，再依次甲醇溶液(3.2.9)進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。于45℃下氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入1.0mL乙腈(3.2.1),超聲1)非商業(yè)性聲明：本標(biāo)準(zhǔn)采用的固相萃取柱為Waters公司產(chǎn)品，此處列出僅為提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵(lì)標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同廠家的固相萃取柱。33.6高效液相色譜條件3.6.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：C??柱，250mm(柱長(zhǎng))×4.6mm(內(nèi)徑),粒度5μm,或相當(dāng)者；b)流動(dòng)相：乙腈-水(20+80,體積比);d)柱溫：35℃;3.6.2液相色譜測(cè)定按3.6.1液相色譜條件測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液，外標(biāo)法定量。如果樣品中多菌靈的含量超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)用流動(dòng)相稀釋后再進(jìn)行分析。在上述色譜條件下，多菌靈的色譜峰保留時(shí)間約為9.8min。多菌靈標(biāo)準(zhǔn)色譜圖參見(jiàn)圖A.1。3.7結(jié)果計(jì)算用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(1)計(jì)算樣品中多菌靈的殘留量。 (1)式中：X試樣中待測(cè)物的濃度，單位為毫克每千克(mg/kg);c——試樣終溶液中待測(cè)物的濃度，單位為微克每毫升(μg/ml.);c?——空白試驗(yàn)溶液中待測(cè)物的濃度，單位為微克每毫升(pg/mL);V——樣液最終定容體積，單位為毫升(mL):m——試樣終溶液代表的試樣量，單位為克(g),3.8空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述操作步驟進(jìn)行。3.9測(cè)定低限本方法的測(cè)定低限為0.05mg/kg。3.10回收率不同樣品基質(zhì)中多菌靈的回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)參見(jiàn)表B.1。4第二法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法(LC-MS/MS法)4.1方法提要試樣中的多菌靈在弱堿性條件下經(jīng)乙酸乙酯振蕩提取，混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)測(cè)定，外標(biāo)法定量。44.2試劑和材料除標(biāo)準(zhǔn)工作液按照4.2.1外，其他試劑和材料的要求與3.2一致。除特殊注明外，所有試劑均為分標(biāo)準(zhǔn)工作液：臨用前取適量標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.2.13),用流動(dòng)相稀釋至5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL、100.0ng/mL、200.4.3儀器和設(shè)備除檢測(cè)儀器按照4.3.1規(guī)定外，其他儀器和設(shè)備的要求與3.3一致。液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源(ESI)。4.4試樣的制備與保存試樣的制備與保存同3.4。4.5樣品處理按3.5.1規(guī)定進(jìn)行提取。按3.5.2規(guī)定處理至“于45℃下氮?dú)獯蹈伞?加入5.0mL乙腈-水溶液(3.2.10)超聲2min溶解殘液相色譜條件如下：a)色譜柱：C柱，150mm(柱長(zhǎng))×2.1mm(內(nèi)徑),粒度5μm,或相當(dāng)者；b)流動(dòng)相：乙腈-水(20+80,體積比);質(zhì)譜/質(zhì)譜條件如下：a)離子化模式：電噴霧電離(ESI)正離子模式；c)分辨率：?jiǎn)挝毁|(zhì)量分辨率(Unit);d)其他質(zhì)譜條件參見(jiàn)附錄C。按照4.6.1和4.6.2規(guī)定的儀器條件測(cè)定樣液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在相同實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi)；且樣品中各組分定性離子的相對(duì)豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)豐度進(jìn)行比較，偏差不超過(guò)表1規(guī)定的范圍，則可判定為5樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。表1定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差土20土30土50測(cè)定，外標(biāo)法定量。樣液中待分析物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)，若超出線性范圍可用流動(dòng)相適當(dāng)稀釋。標(biāo)準(zhǔn)溶液多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)色譜圖參見(jiàn)圖A.2。4.7空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按4.5和4.6規(guī)定的操作步驟進(jìn)行。4.8結(jié)果計(jì)算與表述用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(2)計(jì)算樣品中多菌靈的殘留量?！?2)X——試樣中待測(cè)物的濃度，單位為微克每千克(pg/kg);c——試樣終溶液中待測(cè)物的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);c?——空白試驗(yàn)溶液中待測(cè)物的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V——樣液最終定容體積，單位為毫升(mL);m——試樣終溶液代表的試樣量，單位為克(g)。本方法的測(cè)定低限為0.01mg/kg。不同樣品基質(zhì)中多菌靈的回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)參見(jiàn)表B.2。6(資料性附錄)待測(cè)物色譜圖圖A.2多菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)色譜圖(10.0ng/mL)7(資料性附錄)多菌靈殘留的添加回收率表B.1高效液相色譜法多菌靈殘留的添加回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)添加濃度mg/kg蘋果獼猴桃臍橙西瓜葡萄82.8～95.684.0～96.085.3～92.487.2～99.286.4～92.493.4～98.291.0～95.489.8～96.680.4～92.888.8～95.091.6～99.386.4～98.382.6～96.589.2～99.585.3～94.391.1～99.484.2～96.785.6～91.487.9～100.480.8～96.7表B.2液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法多菌靈殘留的添加回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)添加濃度mg/kg蘋果獼猴桃臍橙西瓜葡萄93.1～101.082.6～102.485.9～104.087.1～104.682.9～105.189.9～109.58(資料性附錄)參考質(zhì)譜條件?C.1毛細(xì)管電壓：3500V。C.2干燥氣溫度：350℃。C.3干燥氣流量：10L/min。C.5碰撞氣：氮?dú)?。表C.1主要參考質(zhì)譜參數(shù)化合物母離子(m/z)子離子(m/z)駐留時(shí)間/ms裂解電壓/V碰撞能量/V多菌靈注：對(duì)于不同質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。“定量離子。9一Enlargedthescopeofapplication:“apple,kiwi,water—Modified“2sampling—Modified“3.4.1samplingandpreparation”in1993Editionextractionsolvent,extractionmethodandSPEconditiongforpurification.—Added“LC-MS/MSMethod”(seechapter4).ficationandAccreditation.na.ZhuJianxin,ZhanChunrui,GuiJiaxiang.3MethodIHighPerformanceLiquidChromatography3.2.5Ammoniumhydroxide:25%～28%.ter.3.2.13Intermediatestandardsolution(10mg/mL):Pipette1.0withmobilephase.Freshlyprepa3.2.160.22μmmilliporefilter:hydrophobicity3.3.5Centrifuge:45f)DetectedWavelength:28rangeofthecalibrationcurve,thefinalsolutionshouldbedilutedwithmobilephaseandreanalyzed.Where:X—ConcentrationofV—Volumeofthefinalsamplesolm—WeighofthesampleintRefertotheaboveprocedure,butwithoutaddThepercentagerecoveryofcarbendazimindifferentsamplematrixrefertoTable.B.1.4MethodⅡLiquidChromatography-Mass/MassUndertheweakalkalineconditions,Carbendaziminthetestsamplesisextracraphy-Mass/Mass(LC-MS/MS),quantifiedbyexternalstandardmethod.Prepareworkingstandardsolutionfromclause4.2.1.Inaddition,prepareotherreagentsandmaterialsfromclause3.2.Allthereagentsusedshouldbeanalyticallypureunlessotherwisespecified.“Water”Workingstandardsolution:DiluteintermediateLC-MS/MS:ESI.c)AcquisitionRate:UnRelativeionabundance/%misalignment/%UndertheoptimizedconWhere:4.9LimitofQuantitation(