桑蠶種質(zhì)資源繼代保存技術規(guī)程

3桑蠶種質(zhì)資源繼代保存技術規(guī)程本文件規(guī)定了桑蠶種質(zhì)資源繼代保存技術要求。本文件適用于桑蠶種質(zhì)資源繼代保存。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T1093桑蠶一代雜交種繁育技術規(guī)程DB51/T597桑蠶原原種檢驗規(guī)程DB51/T844桑蠶微粒子病防治技術規(guī)程DB51/T845桑蠶一代雜交種冷藏技術規(guī)程DB51/T916桑蠶種催青技術規(guī)程DB51/T1050桑蠶原原種繁育與母種繼代選擇技術規(guī)程DB51/T1051桑蠶一代雜交種保護技術規(guī)程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。桑蠶種質(zhì)資源germplasmresourcesofsilkworm用于桑蠶種質(zhì)保存、繁殖的品種或由自然突變、人工誘變、現(xiàn)代分子生物技術等所產(chǎn)生的遺傳類型。4基本條件桑蠶種質(zhì)資源保存單位應具備專用桑園、專用蠶室、控溫控濕等設備設施，以及專業(yè)技術人員。5飼育及繼代要求5.1基本要求每個資源制備蠶種42蛾，包括正式種14蛾、備用種28蛾。當年（季）繼代保存完成、母蛾鏡檢合格后方可淘汰備用種。防混措施、環(huán)境條件參照DB51/T1050執(zhí)行。微粒子病防治參照DB51/T844執(zhí)行，檢驗檢疫參照DB51/T597執(zhí)行。4飼育催青與分區(qū)收蟻蛾期保護與調(diào)查蛹期保護與調(diào)查資料建檔蠶種保護、冷藏與卵期調(diào)查飼育催青與分區(qū)收蟻蛾期保護與調(diào)查蛹期保護與調(diào)查資料建檔蠶種保護、冷藏與卵期調(diào)查5.2飼育方式桑蠶種質(zhì)資源繼代采用混合育。5.3飼育季節(jié)每個資源在每年春季繼代保育1次，其中夏秋用和抗逆性資源每2年秋季繼代保育1次。人工飼料適應性資源每2年（季）開展1次人工飼料飼育。5.4調(diào)查5.4.1常規(guī)調(diào)查每次繼代，對每個資源每區(qū)進行卵、幼蟲、繭、蛹、蛾等性狀調(diào)查，品種性狀成績?yōu)?區(qū)的平均值。調(diào)查時將不符合品種固有性狀的個體淘汰，落地蠶一律淘汰。5.4.2特殊性狀調(diào)查抗病性資源每3年（季）添食相應病毒（菌）開展1次抗病性檢測。人工飼料適應性資源每年開展1次24h疏毛率調(diào)查。5.4.3絲質(zhì)調(diào)查每5年開展1次。5.4.4圖片拍攝每5年開展1次。蠶卵、蟻蠶以蠶連紙為背景，其他發(fā)育階段以藍色為背景色，像素800萬以上，水平方向置標尺。垂直拍攝彩色照片，照片長寬比為4:3，大小不低于2MB。6技術要點6.1技術流程圖技術流程見圖1。上蔟采繭與調(diào)查制種與調(diào)查圖1桑蠶種質(zhì)資源繼代保存技術流程圖蠶種出庫參照DB51/T1050執(zhí)行。56.3催青與分區(qū)6.3.1催青將正式種按計劃出庫催青。催青技術參照DB51/T916執(zhí)行，調(diào)查從丙2胚胎至孵化的時間，記錄催青經(jīng)過。6.3.2分區(qū)在蠶種轉(zhuǎn)青包種時，用白紙封包成2區(qū)，每區(qū)7蛾，放入黑暗室保護。6.4收蟻6.4.1收蟻方法分區(qū)收蟻，收蟻方法參照DB51/T1050執(zhí)行，統(tǒng)一編排飼育號，做好記錄，填寫DB51/T1050中的飼育采繭調(diào)查表。6.4.2收蟻調(diào)查a)在孵化后給桑前，觀察記錄蟻蠶體色；b)在自然光下觀察記錄蠶卵孵化后的卵殼色；c)收蟻當天隨機抽查6個卵圈，點數(shù)孵化蠶卵粒數(shù)、未孵化蠶卵粒數(shù)，計算孵化率，記錄孵化整齊度。6.4.3蟻蠶拍攝特殊蟻色品種，在孵化當日8時～10時，選取1個剛孵化的完整卵圈拍攝。6.5飼育6.5.1飼育技術環(huán)境控制、給桑、除沙、眠起處理，參照DB51/T1050執(zhí)行。6.5.2幼蟲期定蠶2齡、3齡眠起后，分別淘汰弱小蠶、病蠶和遲眠蠶，每齡每區(qū)保留50%～70%健康蠶。4齡起蠶后24h～36h數(shù)蠶，每區(qū)定蠶350頭～400頭。6.5.3幼蟲期調(diào)查a)飼養(yǎng)中，觀察飼育區(qū)各齡眠起情況，記錄眠起整齊度；b)1齡～3齡期觀察稚蠶有無趨光性、趨密性、背光性、逸散性，記錄蟻蠶趨性；c)記錄4齡～5齡淘汰蠶頭數(shù)；d)記錄5齡經(jīng)過、幼蟲期經(jīng)過；e)在5齡盛食期觀察記錄食桑習性、壯蠶體色、壯蠶體型、壯蠶斑紋；隨機取1頭～2頭幼蟲，繭色限性品種雌雄各1頭，剪去尾角或1個腹足，將體液滴到載玻片上，立即在自然光下觀察其顏色，記錄體液色。66.5.4幼蟲拍攝取5齡的盛食期蠶2頭，斑紋限性品種雌雄各1頭，放置于5℃~10℃冷藏2min后取出，相距2cm~3cm并列垂直放置拍攝。6.6上蔟采繭與調(diào)查6.6.1上蔟采繭技術上蔟準備、上蔟方法、蔟中保護、采繭適期、采繭方法、剝繭衣等參照DB51/T1050執(zhí)行。每個品種分區(qū)采繭。6.6.2上蔟采繭調(diào)查a)見熟后適時捉熟上蔟，記錄始熟、盛熟和終熟時間，調(diào)查老熟整齊度；b)采繭前揭開覆蔟網(wǎng)，觀察蠶繭的空間分布比例，記錄營繭特性。采繭時，記錄蔟中病死蠶數(shù)、爛繭、不結繭蠶頭數(shù)；c)采下的蠶繭按普通繭、同宮繭、屑繭分類計數(shù)，統(tǒng)計結繭蠶頭數(shù)，計算普繭率、對四齡蠶結繭率、死籠率、對四齡蠶健蛹率；結繭蠶頭數(shù)結繭蠶頭數(shù)+4齡~5齡淘汰蠶頭數(shù)+蔟中病死蠶頭數(shù)結繭蠶頭數(shù)結繭蠶頭數(shù)d)觀察記錄繭衣量、繭色、繭形、縮皺、繭層狀態(tài)；e)從普通繭中隨機抽取10粒，用游標卡尺測量，記錄繭長、繭幅；f)從普通繭中隨機切剖雌、雄各25粒，分別稱量25粒全繭量、繭層量，計算雌雄平均全繭量、繭層量、繭層率。6.6.3繭期拍攝選2粒普通繭（繭色限性品種雌雄各1粒），相距2cm～3cm并列垂直放置拍攝。6.6.4絲質(zhì)檢測留足繼代用蠶繭后，混合2區(qū)普通繭，隨機抽取160粒，采用二次烘干法烘繭，烘干稱重后裝袋，袋內(nèi)外置掛標簽，標明品種名稱、飼育編號、凈重、粒數(shù)，一周內(nèi)將干樣繭送交絲質(zhì)檢驗單位檢測。絲質(zhì)檢驗單位收到樣繭后，記錄樣繭情況，并在6個月內(nèi)完成繭絲長、解舒絲長、解舒率、繭絲量、繭絲纖度、潔凈等6個指標檢驗。6.7蛹期保護與調(diào)查76.7.1蛹期保護技術蛹期保護技術參照NY/T1093執(zhí)行。6.7.2蛹期調(diào)查在復眼開始著色時，自然光下觀察選留蠶蛹的體色和體態(tài)，記錄蛹體色、蛹體態(tài)。6.7.3蛹期拍攝取雌雄蠶蛹各1粒腹面向上，頭部向上，相距2cm～3cm并列垂直放置拍攝。6.8蛾期保護與調(diào)查6.8.1蛾期保護技術蛾期保護技術參照NY/T1093執(zhí)行。6.8.2蛾期調(diào)查a)盛發(fā)蛾時，自然光線下觀察記錄羽化當日蛾體態(tài)、蛾眼色、蛾翅，分雌雄記錄蛾體色、蛾體形、蛾行動；b)始發(fā)蛾后第2d、3d、4d，每日6時感光，8時以后統(tǒng)計計算當日雌、雄蠶蛾數(shù)量的比例，根據(jù)連續(xù)幾日調(diào)查結果，記錄羽化習性；c)記錄盛發(fā)蛾時間、蟄中經(jīng)過。6.8.3蛾期拍攝選取1對雌雄交尾狀態(tài)的蠶蛾，雄蛾在上、雌蛾在下拍攝。6.9制種與調(diào)查采用同品種異區(qū)交配，交配時間3h～4h。6.9.2制種單蛾框制42蛾蠶種。產(chǎn)卵24h后核對品種、飼育號、交配號、連紙?zhí)枱o誤后單蛾裝盒，干燥、保存。母蛾裝盒和干燥保存參照DB51/T1050執(zhí)行。6.9.3繁育性能調(diào)查a)交配后觀察交配性能、散對情況，記錄交尾性能；b)調(diào)查投蛾6h后的產(chǎn)卵情況，記錄產(chǎn)卵快慢；c)投蛾產(chǎn)卵第2d上午觀察蠶連紙上蠶卵黏附是否牢固、分布是否平整，記錄卵膠著性、產(chǎn)附平整d)在蠶卵產(chǎn)下10d天后，觀察是否有蠶卵孵化，記錄有無生種發(fā)生。6.10蠶種保護、冷藏與卵期調(diào)查6.10.1蠶種保護、冷藏技術8春制越年種或秋制越年種蠶種保護參照DB51/T1051執(zhí)行。蠶種浴消入庫時平均分為3份，分別編為正式種、備用種1、備用種2。蠶種冷藏參照DB51/T845執(zhí)行。6.10.2卵期調(diào)查在自然光線下，觀察記錄卵形、卵色，滯育卵的卵形可在冬季調(diào)查。隨機選取6個卵圈，滯育卵在浴消后，非滯育卵在產(chǎn)下后轉(zhuǎn)青時，點數(shù)單蛾產(chǎn)卵粒數(shù)、良卵數(shù)、不受精卵數(shù)，計算良卵率、不受精卵率。6.10.3卵期拍攝隨機選擇2個卵圈拍攝。滯育卵在產(chǎn)卵后5d至翌年催青前拍攝，非滯育卵在產(chǎn)卵后3d～7d拍攝。6.11資料建檔蠶季結束后，對所有飼育資料進行整理歸檔。a)飼育采繭調(diào)查表；b)每5年填報1次桑蠶遺傳資源系統(tǒng)調(diào)查表（家蠶遺傳資源概況表參見附錄A、家蠶體形外貌登記表參見附錄B、家蠶生產(chǎn)性能登記表參見附錄C、家蠶遺傳資源影像材料參見附錄D）；c)制種清單。7數(shù)據(jù)修約繭絲長、解舒絲長計量數(shù)據(jù)為整數(shù)；繭長、繭幅保留小數(shù)點以下一位；良卵率、不受精卵率保留小數(shù)點以下兩位；繭絲量、繭絲纖度保留小數(shù)點以下三位；其余指標參照DB51/T1050執(zhí)行，小數(shù)點有效數(shù)后一位采取四舍六入五奇進方法處理。9（規(guī)范性）表A.1家蠶遺傳資源概況表品種名稱其它名稱品種類型□地方品種□培育品種□引入品種經(jīng)濟類型□資源型：□實用型：□多絲量□抗病/逆□彩色繭□少絲量□斑紋限性地理系統(tǒng)□中國系統(tǒng)□日本系統(tǒng)□歐洲系統(tǒng)□熱帶系統(tǒng)品種來源及形成歷史保存單位化性□一化□二化□有滯育多化□無滯育多化眠性□三眠□四眠□五眠□其他：適應生態(tài)區(qū)域□長江流域□黃河流域□珠江流域□其他：適宜飼養(yǎng)季節(jié)□春季□夏季□秋季□春秋兼用中心飼養(yǎng)區(qū)□無□長江流域□黃河流域□珠江流域□其他：資源評價遺傳特點：□常規(guī)□三眠蠶□致死突變□隱性遺傳□限性遺傳□特殊斑紋：□彩色蠶繭：優(yōu)異特性：□高繭層率□長絲長□粗纖度□細纖度□高產(chǎn)□優(yōu)質(zhì)□抗BmNPV□抗高溫□其他：利用方向：□優(yōu)質(zhì)基因□育種素材□基因功能解析□生物醫(yī)學模型□其他：開發(fā)利用情況飼養(yǎng)區(qū)域：□無□1個省區(qū)□2個省區(qū)□3個以上省區(qū)組配的品種數(shù)量：□無□1對□2對□3對以上（規(guī)范性）表B.1家蠶體型外貌登記表卵形□橢圓□紡錘□腎形□長形□特大□其它：卵色□綠色□灰綠色□灰色□灰紫色□紫色□淡黃色□其它：蟻蠶體色□赤色□黑褐色□淡黃色□其它：卵殼色□白色□乳白色□淡黃色□黃色□其他：稚蠶趨性□無□趨光性□趨密性□背光性□逸散性食桑習性□踏葉□不踏葉壯蠶體色□青白□青赤□黃色□灰黑色□油蠶□斑點油蠶□其他：壯蠶體型□細長□普通□粗壯□有瘤狀突起□其他：壯蠶斑紋□素斑□褐圓斑□普通斑□多星紋□暗色斑□斑點蠶□黑色蠶□皋蠶□黑縞□鶉斑□虎斑□無半月斑□其他：體液色□淡黃色□黃色□雌蠶黃色、雄蠶淡黃色老蠶整齊度□齊涌□較齊□不齊營繭特性□多上層繭□多中層繭□多底層繭繭衣量繭色□桃紅色□竹色□綠色□金黃□土黃□稻草黃□橘紅色□其他：繭形□橢圓□薄腰繭□球形□縊痕□束腰□紡錘形□長筒形□錐形□薄頭繭□其他：縮皺蛹體色□棕色□褐色□黑色蛹體態(tài)□正常蛹□鰲蝦蛹□黑翅蛹□白翅蛹□小翅蛹□雛翅蛹□鄒翅蛹□痕跡翅蛹□無翅蛹□其他：蛾體色雌：□正常□灰褐□暗紅□其他：雄：□正?！趸液帧醢导t□其他：蛾體形雌：□正?！跏菪　醴蚀笮郏骸跽！跏菪　醴蚀蠖牦w態(tài)□正常蛾□小翅蛾□雛翅蛾□鄒翅蛾□痕跡翅蛾□無翅蛾□其他：蛾眼色蛾翅□有花紋斑□無花紋斑□無鱗毛（透明翅）蛾行動雌：□正?！趸顫姟跷撵o雄：□正?！趸?/p>