天津大學(xué)《生物技術(shù)》課件-細(xì)胞工程1

第3章細(xì)胞工程細(xì)胞工程是應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的理論與方法，按照人們的需要，進(jìn)行大規(guī)模的動物細(xì)胞和植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)，以獲得具有藥用價(jià)值的重組蛋白質(zhì)和植物次生代謝產(chǎn)物，以及產(chǎn)生新的物種或品質(zhì)；或在細(xì)胞水平上對基因組進(jìn)行遺傳操作，改變細(xì)胞的分化狀態(tài)及進(jìn)行基因功能的操作動物、植物、微生物細(xì)胞工程2原核細(xì)胞原核細(xì)胞衣原體、支原體細(xì)胞壁核糖體細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞壁核糖體原核生物與真核生物細(xì)胞大小較小細(xì)胞質(zhì)放線菌、細(xì)菌、藍(lán)藻、衣原體>一個(gè)與合子具有相同遺傳內(nèi)容的體細(xì)胞具有產(chǎn)生完整生物個(gè)體的潛在能力稱之為細(xì)胞的全能性。>已分化的植物細(xì)胞在合適的條件下具有潛在的發(fā)育成完整植株或個(gè)體>與植物和低等細(xì)胞相比，高等動物體細(xì)胞的發(fā)育潛能有顯著差異，早期胚胎細(xì)胞具有發(fā)育的全能性，但隨著分化程度的提高，細(xì)胞的發(fā)育47細(xì)胞工程的基本操作細(xì)胞、組織培養(yǎng)單克隆抗體與雜交瘤技術(shù)哺乳動物體細(xì)胞克隆動物細(xì)胞制藥工程將動物細(xì)胞或組織從機(jī)體取出，分散成單個(gè)細(xì)胞，離散的動物活細(xì)胞在體外(模擬體內(nèi)生長環(huán)境)人工無菌、適溫和豐富的營養(yǎng)條件下，生長增殖，整個(gè)過程中細(xì)胞不出現(xiàn)分化，不再形成組織。原代細(xì)胞釋后轉(zhuǎn)到新的培養(yǎng)瓶的過程。傳代細(xì)胞Hanks溶液沖洗，吸管輕輕吹打，低速離心，棄上清酶消化：胰蛋白酶、膠原酶實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系成纖維細(xì)胞小鼠宮頸癌上皮細(xì)胞人成纖維細(xì)胞敘利亞倉鼠上皮細(xì)胞袋鼠成肌細(xì)胞大鼠嗜鉻細(xì)胞大鼠漿細(xì)胞小鼠骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠卵巢細(xì)胞中國地鼠細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)日益完善，現(xiàn)在已經(jīng)能夠用新穎的微載體等系統(tǒng)對細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，從而為工業(yè)上利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)疫苗、干擾素、激素和其他免疫試劑等開辟了一動物細(xì)胞培養(yǎng)基2.氨基酸：12種必需氨基酸、谷氨酰胺等基滲透壓；懸浮培養(yǎng)要減少鈣離子6.有機(jī)添加劑：復(fù)雜培養(yǎng)基中含有核苷、脂類及其他各種化合物7.激素和生長因素：添加血清即能滿足。(小牛)血清及其對細(xì)胞的作用多種蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素、多種金屬離子和各種生長因子、促貼附物質(zhì)，不明成分生長液中血清使用濃度為10%～20%,維持液為2%～3%。常用培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基其中含有的精氨酸酶能使培養(yǎng)基中精氨酸降解●合成培養(yǎng)基：為了給細(xì)胞提供一個(gè)近似體內(nèi)的生存環(huán)境又便于控優(yōu)點(diǎn)：●無血清培養(yǎng)基：全部采用已知營養(yǎng)成分，包括血清無血清培養(yǎng)基處于研究階段，難以推廣。目前，絕大多數(shù)人工合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加血清細(xì)胞培養(yǎng)的條件和要求適于生存的外界環(huán)境長環(huán)境，如穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO?水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值：7.2-7.4)、較高的相對飽和濕度(95%),來對細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置?！蟌懸浮培養(yǎng)：懸浮培養(yǎng)：用于非貼壁依賴性細(xì)胞的培養(yǎng)，細(xì)胞在培養(yǎng)器中自由懸浮生長。如血液白細(xì)胞，淋巴組織細(xì)胞等。微生物發(fā)酵的基礎(chǔ)上發(fā)展起來，又不等同于經(jīng)典的微生物發(fā)酵培養(yǎng)。p95貼