親水改性的聚丙烯無紡布優(yōu)化脂肪移植純化技術(shù)的研究

親水改性的聚丙烯無紡布優(yōu)化脂肪移植純化技術(shù)的研究目的自體脂肪顆粒移植是目前整形外科領(lǐng)域應(yīng)用非常廣泛的一種治療手段。自體脂肪具有零排斥,來源豐,易獲取,價格低且安全等優(yōu)點,是臨床上治療面部年輕化和體表軟組織凹陷的一種非常理想的填充材料。但是,臨床預(yù)后體積保持率的不確定性也是困擾臨床醫(yī)生的一大難題。既往有關(guān)文獻研究的結(jié)果與結(jié)論也尚未統(tǒng)一。本研究是在以往學(xué)者研究的基礎(chǔ)上,綜合靜置法、離心法和棉紗布過濾法的優(yōu)點和缺點,制作出一種過濾材料,為臨床純化處理顆粒脂肪提供一種新思路。方法1、通過熔噴和紡粘工藝將聚丙烯顆粒制作成纖維直徑細,孔徑小的SMS(紡粘-熔噴-紡粘)非織造纖維膜,經(jīng)水處理劑吸附固著成膜法親水改性,制作出包括SMS非織造布、熱風(fēng)導(dǎo)流層,SAF(超吸水纖維)芯吸層和底層的聚丙烯SMS非織造布濾墊。對SMS非織造纖維層進行基本性能的測試。2、根據(jù)國家現(xiàn)有的醫(yī)療器械和醫(yī)用材料的GB/T16886系列標(biāo)準(zhǔn),對SMS非織造纖維膜進行生物相容性的初步評價,包括細胞毒性試驗(瓊脂擴散法和浸提法)、皮內(nèi)刺激試驗、熱原試驗等。3、采用CCK-8測定吸光度值法繪制細胞增殖-毒性生長曲線,應(yīng)用Muse細胞分析儀測定材料對細胞生長凋亡的影響。將ASCs在SMS非織造纖維膜上培養(yǎng),觀察細胞在材料表面的生長情況。4、比較不同純化方法在單位時間內(nèi)的純化效率/效力和不同持續(xù)時間內(nèi)的純化效率/效力;比較不同純化方法對脂肪細胞結(jié)構(gòu)完整性的影響;鑒定棉紗布過濾法純化后的脂肪組織中是否混有棉纖維;不同純化方法獲取脂肪組織中含SVF數(shù)量和活細胞比例的比較;流式細胞儀定量分析比較SMS非織造布濾墊組和棉紗布濾墊組獲取的SVF中間充質(zhì)干細胞百分比。比較材料濾墊法和棉紗布濾墊法在體內(nèi)實驗中局部炎癥因子的變化。結(jié)果1、通過熔噴-紡粘工藝制得了SMS非織造纖維面層,其熔噴纖維直徑只有1um,過濾的平均孔徑是15.1um,表面粗糙度為2.290um(棉紗布為16.845um),親水改性后接觸角為46.20°,液體穿透時間為4.15秒。并制得了SMS非織造布濾墊。2、細胞毒性試驗(瓊脂擴散法和浸提法)、皮內(nèi)刺激試驗、熱原試驗均提示SMS非織造纖維膜均有良好的生物相容性。3、ASCs與材料共培養(yǎng)后,細胞生長呈近似“S”形,與對照組相比無明顯差異。細胞在材料上培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)細胞并未在材料表面生長。Muse細胞分析儀也未發(fā)現(xiàn)材料對細胞有促凋亡作用。4、處理相同時間(3min)純化效率:離心組(67.1±2.18)%>SMS10材料濾墊組(53±2.21)%>棉紗布濾墊組(47.8±1.13)%,純化效力:SMS10材料濾墊組(86.4±1.58)%>棉紗布濾墊組(79.3±1.62)%>離心組(70.4±2.07)%;處理不同時間(1min,2min,3min)純化效力:材料濾墊組,1分鐘(83.2±1.10)%<2分鐘(86.4±1.67)%<3分鐘(87.2±1.10)%,其中,持續(xù)1分鐘和2分鐘的純化效力有統(tǒng)計學(xué)差異,p<0.01,持續(xù)2分鐘和3分鐘的純化效力無統(tǒng)計學(xué)差異,p>0.05。棉紗布濾墊組,1分鐘(81.2±1.10)%<2分鐘時(83.2±1.10)%<3分鐘時(86.0±1.41)%,其中,持續(xù)1分鐘和2分鐘的純化效力比較有統(tǒng)計學(xué)差異,p<0.05,持續(xù)2分鐘和3分鐘純化效力比較也有統(tǒng)計學(xué)差異,p<0.01。不同純化方法獲取的脂肪細胞在形態(tài)和數(shù)目比較上無明顯差異。隨機選取經(jīng)棉紗布濾墊處理過的脂肪組織切片中的深染組織,未發(fā)現(xiàn)混有棉纖維。不同純化方法獲取的脂肪組織中含SVF細胞數(shù)目比較:材料濾墊組>棉紗布濾墊組>離心組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.01但活細胞比例無明顯差異,p>0.05。流式細胞儀分析發(fā)現(xiàn)純化處理后的脂肪組織中所含的間充質(zhì)干細胞數(shù)目:材料濾墊組>棉紗布濾墊組,但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義,p>0.05。體內(nèi)實驗提示:材料濾墊組和棉紗布濾墊組的移植脂肪在不同時間點炎癥因子的濃度和周脂素蛋白免疫染色無明顯差異。且形態(tài)上觀察,12周后,脂肪組織的平均空泡直徑要小于對照組,雖然單位面積上平均空泡數(shù)量沒有差別。結(jié)論1、本實驗通過紡粘-熔噴技術(shù)獲得了預(yù)期的SMS10非織造纖維膜,經(jīng)過親水處理制作出了符合臨床需求的復(fù)合層濾墊。2、根據(jù)國家目前醫(yī)療器械和醫(yī)用材料的GB/T16886系列標(biāo)準(zhǔn),SMS10材料的生物相容性良好。3、親水改性后SMS10材料未發(fā)現(xiàn)對細胞的增殖及生長有毒性影響,也未發(fā)現(xiàn)材料對細胞有促凋亡作用。4、SMS10材料濾墊法