微生物的生長生長測定

微生物的生長生長測定生長是一個逐步發(fā)生的量變過程，繁殖是一個產(chǎn)生新的生命個體的質變過程。在高等生物里這兩個過程可以明顯分開，但在低等特別是在單細胞的生物里，由于細胞小，這兩個過程是緊密聯(lián)系又很難劃分的過程。生長和繁殖群體生長=個體生長+個體繁殖個體生長→個體繁殖→群體生長在一定時間和條件下細胞數(shù)量的增加（微生物群體生長）微生物生長:在微生物學中提到的“生長”，一般均指群體生長，這一點與研究大生物時有所不同。微生物生長量測定1.測生長量直接法2.測生長量間接法1.測生長量直接法測體積法：粗放型，在刻度離心管中測沉降量稱干重法：精確型，離心法和過濾法獲得菌體細胞，微生物的干重一般為其濕重的10％～20％測定多細胞及絲狀真菌生長情況的有效方法以E.coli為例，一般液體的培養(yǎng)物（culture）中，細胞濃度通常為2×109個／mL，100mL培養(yǎng)物約可得10～90mg干重的細胞；高密度培養(yǎng)（highcell-densityculture，HCDC）中，細胞產(chǎn)量最高記錄可達到174g/L。2.測生長量間接法

（1）比濁法

用分光光度法對無色的微生物懸浮液進行測定，一般選用450～650nm波段。實驗測量時應控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi)，否則不準確。

在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度（opticaldensity,即O.D.）表示菌量。

若要連續(xù)跟蹤某一培養(yǎng)物的生長動態(tài)，可用帶有側臂的三角燒瓶作原位測定，即不必取樣。（2）生理指標法

樣品中微生物數(shù)量多或生長旺盛，這些指標愈明顯，因此可以借助特定的儀器如瓦勃氏呼吸儀、微量量熱計等設備來測定相應的指標。

微生物的生理指標，如氮、碳、DNA、ATP等物質的含量，呼吸強度、耗氧量、酶活性、生物熱等與其群體的規(guī)模成正相關。常用于對微生物的快速鑒定與檢測

一種特定的微生物，每一個細胞中的ATP濃度幾乎是一個常數(shù)，所以測定這種微生物的ATP含量，即可知其細胞數(shù)。已知細胞數(shù)的微生物樣品測定ATP含量測定未知細胞數(shù)的微生物樣品的ATP含量換算出每個細胞所含的ATP量即可算出未知樣中細胞數(shù)ATP濃度的測定E＋L＋AMP＋H2O熒光素酶E還原型熒光素LH2E-LH2?AMP復合物ATPppiMg2＋＋＋＋＋光O2生物發(fā)光儀

在這個反應系統(tǒng)中，酶、熒光素和O2都過量時，光的強度與ATP的量成正比?？捎蒙锇l(fā)光儀測定光照強度，從而換算出ATP的濃度。

生物發(fā)光儀現(xiàn)用于各種樣品中細胞數(shù)的測定。Eg.臨床上測血液、尿液中的菌數(shù)；工業(yè)上發(fā)酵液中的菌數(shù)；環(huán)境污染狀況的測定等。二、計繁殖數(shù)測定繁殖，一定要一一計算各個體的數(shù)目。單細胞狀態(tài)的細菌和酵母菌放線菌和霉菌等絲狀生長的微生物計算其孢子數(shù)計算各個體的數(shù)目（一）計繁殖數(shù)直接法

1.計數(shù)板直接計數(shù)法

指采用計數(shù)板（細菌計數(shù)板或血球計數(shù)板），在光學顯微鏡下直接觀察微生物細胞并進行計數(shù)的方法。（計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量）計繁殖數(shù)法缺點：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數(shù)；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察.2.染色后活菌計數(shù)法

采用特定的染色技術進行活菌染色，然后用光學顯微鏡計數(shù)的方法?？煞謩e對活菌和死菌進行計數(shù)。Eg.美藍酵母活細胞→無色

死細胞→藍色Eg.細菌經(jīng)丫啶橙染色后，在紫外光顯微鏡下可觀察活細胞→橙色熒光死細胞→綠色熒光3.過濾計數(shù)法

當樣品中菌數(shù)很低時，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經(jīng)處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積中）的細菌數(shù)。4.涂片染色法應用：可同時計數(shù)不同微生物的菌數(shù)，適于土壤、牛奶中細菌計數(shù)。方法：用鏡臺測微尺計算出視野面積；取0.1ml菌液涂于1cm2面積上，計數(shù)后代入公式：

每ml原菌液含菌數(shù)=視野中平均菌數(shù)×(涂布面積/視野面積)×100×稀釋倍數(shù)（二）計繁殖數(shù)間接法

是一種活菌計數(shù)法，這是一種依據(jù)活菌在液體培養(yǎng)基中會使其變混或在固體培養(yǎng)基上（內(nèi)）形成菌落的原理而設計。最常用的是平板菌落計數(shù)法平板菌落計數(shù)法

可用澆注平板（pourplate）或涂布平板（spreadplate）等方法進行。采用培養(yǎng)平板計數(shù)法要求操作熟練、準確，否則難以得到正確的結果。最常用的一種方法。常用來測定牛奶、食品、水及其它材料中的含菌數(shù)。有些細菌如無法在固體培養(yǎng)基中生長或其他原因，可用液體稀釋法，借助統(tǒng)計學來判斷其活菌數(shù)。樣品充分混勻每支移液管及涂布棒只能接觸一個稀釋度的菌液同一稀釋度三個以上重復,取平均值每個平板上的菌落數(shù)目合適，便于準