26.4免疫缺陷病檢驗技術講解

第二十六章

免疫缺陷病及檢驗教學目標1.掌握：

免疫缺陷病的概念、AIDS的免疫學特征及臨床特點（重難點）；體液免疫缺陷及細胞免疫缺陷的檢測。2.熟悉：AIDS的致病機制（難點）。3.了解：原發(fā)性免疫缺陷病的主要特征；吞噬細胞功能及補體系統(tǒng)的檢測。知識目標技能目標思政-素質(zhì)目標熟練進行AIDS檢驗技術的操作，正確判讀HIV抗體的檢測結(jié)果。責任心、質(zhì)控及生物安全意識、臨床免疫思維目錄二原發(fā)性免疫缺陷病

三繼發(fā)性免疫缺陷病四免疫缺陷病的檢驗技術一免疫缺陷病概述

免疫缺陷病的概念、分類和共同特點。原發(fā)性免疫缺陷病的概念及主要特征。繼發(fā)性免疫缺陷病的概念及常見誘因。獲得性免疫缺陷綜合征的概念、致病機制、免疫學特征和臨床特點。免疫缺陷病的檢驗技術。本章要點引起IDD的原因及臨床表現(xiàn)多種多樣，檢測方法也具多樣性，主要涉及淋巴細胞計數(shù)、外周血象檢查、細胞免疫、體液免疫、吞噬細胞和補體等方面的檢測。四免疫缺陷病的檢驗技術免疫缺陷病患者淋巴細胞數(shù)量正常或低下，吞噬細胞缺陷患者常伴有中性粒細胞數(shù)量減少。一、淋巴細胞計數(shù)和外周血象檢查皮膚試驗主要檢測T細胞的遲發(fā)型超敏反應能力（DTH），如果皮膚試驗顯示有DTH能力，表明受試者細胞免疫功能是完善的。T細胞功能體外試驗通常使用有絲分裂原刺激淋巴細胞的增殖、轉(zhuǎn)化試驗來判斷T細胞的功能。二、T細胞免疫缺陷病檢驗（一）T細胞功能檢測通常應用CD系統(tǒng)單克隆抗體，使用熒光顯微技術或流式細胞術對T細胞總數(shù)和亞群進行檢測。最常檢測的CD標志為CD3、CD4、CD8、CD25等。（二）T細胞數(shù)量及亞群檢測IgG、IgM和IgA可采用免疫比濁法和單向免疫擴散法。IgD和IgE由于含量甚微，可采用靈敏度較高的RIA和ELISA等技術測定。IgG亞類可用ELISA和免疫電泳法測定。三、B細胞免疫缺陷病檢驗（一）血清Ig的測定除嬰兒和AB型血外，其它人均有1：8（抗A）或1：4（抗B）或更高的天然抗體滴度，這種天然抗體屬IgM型。性聯(lián)無丙種球蛋白血癥、重癥聯(lián)合免疫缺陷和選擇性IgM缺陷癥患者可用此法進行判定。（二）同種血細胞凝集素（IgM）效價測定正常人接種疫苗后5～7天可產(chǎn)生特異性抗體（IgM），若再次免疫會使抗體滴度增高（IgG）。常用的抗原為傷寒菌苗和白喉類毒素，可在注射后2～4周測定抗體的滴度，了解抗體的反應性。（三）特異性抗體產(chǎn)生能力測定正常人包括新生兒，均可在注入噬菌體后5天內(nèi)將其全部清除?？贵w形成缺陷者，清除噬菌體的時間則明顯延長。（四）噬菌體試驗SmIg是B細胞表面的特征性標志，檢測SmIg不但可以反映B細胞的數(shù)量，還可以根據(jù)SmIg的類別判斷B細胞的成熟情況。所有體液免疫缺陷者都有不同程度的B細胞數(shù)量或成熟比例方面的異常。（五）B細胞表面膜免疫球蛋白的檢測B細胞表面存在著CD10、CD19、CD20、CD22等抗原，這些CD抗原表達在B細胞發(fā)育成熟的不同階段，檢測這些B細胞表面標志可以了解B細胞數(shù)量、亞型及分化情況。（六）CD抗原檢測當成年人外周血中性粒細胞＜1.8×109/L，兒童＜1.5×109/L，嬰兒＜1.0×109/L時，若能排除外因的影響，應考慮遺傳因素的作用。四、吞噬細胞免疫缺陷病檢驗（一）中性粒細胞計數(shù)包括體內(nèi)試驗與體外試驗。體外試驗如Boyden小室法和瓊脂糖平板法，可用于判斷白細胞的趨化功能，對吞噬細胞功能缺陷、家族性白細胞趨化缺陷癥等有診斷價值。（二）趨化功能檢測將白細胞懸液與一定量的細菌或膠乳粒子溫育一定時間后，取樣涂片、染色、鏡檢，根據(jù)其吞噬和殺菌情況判斷白細胞的功能。慢性肉芽腫病患者由于吞噬細胞缺少過氧化物酶而無法殺菌，故其吞噬率基本正常，但殺菌率顯著降低。（三）吞噬和殺傷功能檢測是一種簡便、敏感的檢測吞噬細胞還原殺傷能力的試驗?？捎糜跈z測兒童慢性肉芽腫病和嚴重的6-磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏癥。（四）NBT還原試驗總補體活性測定單個補體組分的測定五、補體免疫缺陷病檢驗常用ELISA法檢測HIV的核心抗原p24。p24出現(xiàn)于急性感染期和AIDS晚期，其定量檢測可作為早期或晚期病毒量的間接指標。在潛伏期，p24檢測常為陰性。六、AIDS檢驗技術（一）HIV抗原檢測HIV感染后2～3月可出現(xiàn)抗體，并可持續(xù)終身，此為艾滋病的常規(guī)檢測指標。初篩試驗

ELISA法膠乳凝集法膠體金免疫層析法確認試驗免疫印跡法

（二）HIV抗體檢測

ELISA法檢測HIV抗體初篩最基本，最可靠的手段ELISA試劑敏感性和特異性越來越高與抗原檢測同時進行

HIV抗體快速檢測常用的方法有免疫斑點法、免疫層析法、硒標記法、金標記法和凝集試驗等。

HIV抗體確認試驗確認試驗可使用免疫印跡法、條帶免疫法及免疫熒光法。目前以免疫印跡法（WB試驗）最為常用。確認試劑必須經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準。HIV抗體確認試驗判斷標準HIV抗體陽性至少有兩條膜帶（gp41/gp120/gp160）或至少一條膜帶與p24帶同時出現(xiàn)；HIV抗體陰性無HIV抗體特異性條帶出現(xiàn)；HIV抗體可疑出現(xiàn)HIV特異性條帶，但帶型不足以確認陽性者。CD4+T細胞計數(shù)是反映HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀態(tài)的最明確指標。當CD4+T細胞低于500/μl，則易機會性感染；低于200/μl，則發(fā)生AIDS。

（三）T細胞計數(shù)小結(jié)免疫缺陷病是免疫系統(tǒng)先天發(fā)育不全或后天損傷所致的疾病，分為原發(fā)性免疫缺陷性疾病和繼發(fā)性免疫缺陷病兩大類。免疫缺陷病主要臨床表現(xiàn)有反復感染；高發(fā)惡性腫瘤和自身免疫??；有一定遺傳傾向。AIDS是最常見的繼發(fā)性免疫缺陷病。HIV主要侵犯CD4+T細胞以及表達CD4分子的巨噬細