重組的基本步驟_第1頁
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關(guān)于重組的基本步驟重組DNA的基本步驟獲得目的基因DNA分子的體外重組重組DNA分子引入宿主細(xì)胞和篩選鑒定第2頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第3頁,共17頁，2024年2月25日，星期天獲得目的基因的途徑限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)生待克隆的DNA片段人工合成DNA反轉(zhuǎn)錄酶酶促合成法聚合酶鏈(式)反應(yīng)擴(kuò)增特定的基因片段第4頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第5頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第6頁,共17頁，2024年2月25日，星期天這樣就可以用限制性內(nèi)切酶把一個基因組DNA分成很多片段，對于原核生物比較小的基因組來說，可以直接用標(biāo)記地探針來獲取在通過特定的方法，對于比較大的基因組，可以先制作基因文庫，然后釣取所需要的帶有目的基因的片段。

第7頁,共17頁，2024年2月25日，星期天限制性內(nèi)切酶對DNA的切割方式有兩種，一種切割方式是完全酶切，另一種方式為部分酶切。

第8頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共17頁，2024年2月25日，星期天體外重組連接常用的方法

1黏性末端連接法

2平齊末端連接發(fā)第10頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第11頁,共17頁，2024年2月25日，星期天平齊末端連接法：

用化學(xué)合成法、逆轉(zhuǎn)錄酶酶促合成法獲得的DNA片段或cDNA片段，以及某些限制酶酶切產(chǎn)生的DNA片段，稱為平齊末端。固然平齊末端可用T4DNA連接酶連接，所需底物的濃度高，效率低。因此通常要將平齊末端改造成黏性末端后再行連接。改造的方法是加人工接頭或結(jié)尾第12頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第13頁,共17頁，2024年2月25日，星期天這一過程分為兩個步驟

1重組DNA引入宿主細(xì)胞

2重組體克隆的篩選與鑒定第14頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第15頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第16頁,共17頁，2024年2

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