豬Ⅰ型與Ⅱ型干擾素的克隆、表達(dá)及抗病毒活性比較的綜述報(bào)告

豬Ⅰ型與Ⅱ型干擾素的克隆、表達(dá)及抗病毒活性比較的綜述報(bào)告概述豬Ⅰ型和Ⅱ型干擾素是一類內(nèi)源性的細(xì)胞因子，可激活細(xì)胞泛素樣蛋白酶系統(tǒng)，產(chǎn)生抗病毒和抗細(xì)菌的免疫反應(yīng)。在豬的免疫系統(tǒng)中，豬Ⅰ型和Ⅱ型干擾素起著重要的作用，是研究豬免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵因素。本綜述將介紹豬Ⅰ型和Ⅱ型干擾素的克隆及表達(dá)，同時(shí)也會(huì)比較這兩種干擾素的抗病毒活性，以期更好地了解這兩種干擾素的功能和特點(diǎn)。Ⅰ型干擾素Ⅰ型干擾素是一類特殊的細(xì)胞因子，包括硫酸肌酸、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-κ、干擾素-ε、干擾素-τ等。豬Ⅰ型干擾素主要由干擾素-α和干擾素-ω兩個(gè)部分組成。干擾素-α編碼在豬Ⅰ型干擾素的α區(qū)域，而干擾素-ω編碼在該干擾素的ω區(qū)域。豬Ⅰ型干擾素的α區(qū)域與人和小鼠的相似度較高，而ω區(qū)域與人和小鼠的不同。研究表明，豬Ⅰ型干擾素通過刺激細(xì)胞中的RNaseL、PKR等酶的活性，抑制病毒復(fù)制、啟動(dòng)抗病毒免疫。克隆為了獲得豬Ⅰ型干擾素的cDNA序列，科學(xué)家們用PCR技術(shù)，將已知的豬IFN-α和IFN-β片段進(jìn)行擴(kuò)增。最終，獲得的序列中包括了兩個(gè)開放閱讀框（ORF），一個(gè)編碼IFN-α，一個(gè)編碼IFN-ω。研究還表明，豬Ⅰ型干擾素的編碼基因位于豬染色體的13q21-24區(qū)域，與人類的IFN基因進(jìn)化關(guān)系密切，并且在同樣的染色體區(qū)域。表達(dá)為了表達(dá)豬Ⅰ型干擾素，在基因工程領(lǐng)域，人們通常使用大腸桿菌（E.coli）作為表達(dá)宿主。例如，研究人員使用pET-15b質(zhì)粒構(gòu)建了外泌露的豬IFNα-1表達(dá)載體，并將其傳輸?shù)酱竽c桿菌BL21(DE3)中，通過孕育使其表達(dá)。同時(shí)，研究人員還利用翻譯后修飾技術(shù)，對(duì)重組豬IFN-α進(jìn)行了純化和活性檢測。研究結(jié)果表明，表達(dá)后的IFN-α可在體外和體內(nèi)抵抗豬繁殖與呼吸綜合癥病毒、豚熱病毒、非洲豬瘟病毒等病毒，具有很強(qiáng)的抗病毒活性。Ⅱ型干擾素Ⅱ型干擾素是另一種發(fā)揮重要作用的免疫因子，主要包括細(xì)胞因子干擾素-γ（IFN-γ）。該分子在活化巨噬細(xì)胞、調(diào)節(jié)T細(xì)胞等方面起著重要作用。豬IFN-γ是由細(xì)胞分泌的FG-α和FG-β的受體激活后產(chǎn)生的。研究表明，在豬的免疫系統(tǒng)中，豬IFN-γ具有促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活化、提高T細(xì)胞活性等作用?？寺榱双@得豬IFN-γ的cDNA序列，研究人員使用RT-PCR技術(shù)，從豬的淋巴器官中提取RNA，制備cDNA，并使用特異性引物擴(kuò)增IFN-γ基因。比較多的是研究人員在找出克隆方法后，轉(zhuǎn)化pGEM-T載體進(jìn)行測序、分析。表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，豬IFN-γ的表達(dá)是受到許多因素的影響的，如抗原刺激、細(xì)胞因子共刺激等。為了使豬IFN-γ有足夠的表達(dá)量，人們經(jīng)常使用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)。研究表明，表達(dá)后的豬IFN-γ具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)雙重作用。例如，研究人員通過構(gòu)建帶有豬IFN-γ編碼序列的表達(dá)質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，通過克隆純化、檢測獲得了豬IFN-γ。此外，豬IFN-γ還可以通過重組技術(shù)、酵母表達(dá)技術(shù)等方式制備。比較豬Ⅰ型和Ⅱ型干擾素在結(jié)構(gòu)和功能上有很大的區(qū)別。豬Ⅰ型干擾素主要通過激活細(xì)胞內(nèi)的蛋白酶、抑制病毒復(fù)制等方式發(fā)揮抗病毒活性。豬Ⅱ型干擾素主要參與T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等的活化?？偟膩碚f，豬Ⅰ型和Ⅱ型干擾素在豬的免疫系統(tǒng)中起著不同的作用，具有很強(qiáng)的抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用，是研究豬免疫系統(tǒng)