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原代培養(yǎng)的細(xì)胞在瓶壁相互匯合后，需要將其分開至多個(gè)新的培養(yǎng)瓶，叫傳代。否則因?yàn)榻佑|抑制和密度抑制現(xiàn)象，引起細(xì)胞衰老，停止生長(zhǎng)甚至死亡。LOGO傳代細(xì)胞培養(yǎng)1.生長(zhǎng)良好的原代細(xì)胞，一般經(jīng)過3-5天左右可形成致密單層。實(shí)驗(yàn)步驟2.倒去原瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液。3.消化。向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入0.25%的2ml胰蛋白酶消化液浸泡細(xì)胞，在37℃下消化1~3min。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化變化，當(dāng)觀察到大部分細(xì)胞出現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞變成圓球形、細(xì)胞間隙增大現(xiàn)象時(shí)需終止消化。4.終止消化：加培養(yǎng)液3-4ml，即可終止消化作用。用吸管有序地吹打瓶壁細(xì)胞（從瓶底到瓶口，從瓶的一側(cè)到另一側(cè)，注意吹打邊角細(xì)胞）。打勻后分裝。5.分瓶擴(kuò)大培養(yǎng)。每瓶再補(bǔ)加2.0毫升培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6．觀察。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后，即可進(jìn)行觀察，觀察的重點(diǎn)如下：首先要觀察培養(yǎng)細(xì)胞是否污染。主要觀察培養(yǎng)液顏色的變化及渾濁度。觀察培養(yǎng)液顏色變化及細(xì)胞是否生長(zhǎng)。如細(xì)胞已生長(zhǎng)，則要觀察細(xì)胞的形態(tài)特征并判斷其所處的生長(zhǎng)階段。觀察完畢，可用臺(tái)盤藍(lán)染液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。以確定死、活細(xì)胞的比例。

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