5菌種的管理和保藏

菌種的保藏和管理杜平華4/1/20241菌種的保藏和管理杜平華3/31/20241前言試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結果一致性的重要保證。4/1/20242前言試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因3/菌種保藏的重要性

菌種保藏是微生物學檢驗工作中的一項常規(guī)技術，菌種的科學保藏和管理直接關系到檢驗結果的正確性。

4/1/20243菌種保藏的重要性菌種保藏是微生物學檢驗工作中的一項常規(guī)技菌種的來源

藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內或國外菌種收藏機構的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的商業(yè)派生菌株。4/1/20244菌種的來源藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的

⒈廣泛收集各種有用的微生物菌種。⒉選擇最適宜的保藏方法。⒊研究、檢驗、交換和使用。菌種保藏的中心任務4/1/20245菌種保藏的中心任務3/31/20245

國外的菌種保藏機構

4/1/20246

國外的菌種保藏機構

3/31/20246常用菌種保藏方法

菌種保藏的原則根據微生物菌種的生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度，使細胞基本上處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但不至于死亡，以減低菌種的變異率。

4/1/20247常用菌種保藏方法菌種保藏的原則3/31/20247

標準菌株的復活或培養(yǎng)物的制備應按供應商提供的說明或按驗證的方法進行。標準儲備菌株-從國內、外菌種收藏機構獲得的標準菌株經復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后,既為標準儲備菌株。常用菌種保藏方法4/1/20248標準菌株的復活或培養(yǎng)物的制備應按供應商提供的說明或按驗

低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代謝和生長繁殖，因此低溫、干燥和真空是菌種保藏的重要手段。標準儲備菌株經純度和特性確認后保存時，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中,建議采用低溫冷凍干燥，液氮儲存，超低溫冷凍(低于-70℃)等方法保存。

4/1/20249低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代

低于-70℃或低溫冷凍干燥可以延長菌種的保存時間.標準儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉種的工作菌株。冷凍菌株一旦解凍轉種制備工作菌株后,不得重新冷凍或再次使用。4/1/202410低于-70℃或低溫冷凍干燥可以延長菌種的保存時間

工作菌株不可代替標準菌株，標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。4/1/202411工作菌株不可代替標準菌株，標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作

不同的微生物，應根據其生物特征來選擇最適宜的保藏方法，菌種的保藏方法一般分四個階段：4/1/202412不同的微生物，應根據其生物特征來選擇最適宜的保藏方法，菌⑴

挑選特征典型的純菌菌落。⑵確定保藏的合適菌體。⑶選擇最適宜的方法保藏。⑷定期對保藏的菌種進行檢查。4/1/202413⑴

挑選特征典型的純菌菌落。3/31/202413二、菌種的傳代和使用

工作菌種的傳代次數應嚴格控制，不得超過5代，（從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異。1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中，任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉種或傳代一次。必要時，實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認。4/1/202414二、菌種的傳代和使用工作菌種的傳代次數應嚴格控

細菌的接種、分離和培養(yǎng)常用培養(yǎng)基種類斜面培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基

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細菌的接種、分離和培養(yǎng)3/31/202415接種方法涂布法劃線法穿刺法直接加入法等4/1/202416接種方法3/31/202416

分離：為了獲得純菌種（株），采用的將細菌分離成單個細胞，使其獨立分裂繁殖形成單個菌落的操作技術。分離一般采用平板培養(yǎng)基。分離方法主要有分段劃線法、連續(xù)劃線法、涂布分離法、傾注分離法等。4/1/202417分離：為了獲得純菌種（株），采用的將細菌分離成單個細胞，

培養(yǎng)：接種后的培養(yǎng)基，根據不同微生物生長條件的要求，將培養(yǎng)基放在適宜微生物生長的環(huán)境中（溫度、濕度、氧氣等），使其生長繁殖的過程。

需氣菌培養(yǎng)法

厭氧培養(yǎng)法4/1/202418培養(yǎng)：接種后的培養(yǎng)基，根據不同微生物生長條件的要求，將培養(yǎng)后微生物的生長判斷

固體培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基

4/1/202419培養(yǎng)后微生物的生長判斷

三、菌種的檢查與復壯

菌種的衰退菌種經過長期人工傳代培養(yǎng)或保藏，由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變弱或消失的現象?？刂凭N的衰退方法

⑴控制傳代次數盡量避免不必要的接種和傳代，降低突變幾率。采用良好的傳代保藏方法?！吨袊幍洹?010年版規(guī)定，傳代次數不得超過5代。4/1/202420三、菌種的檢查與復壯菌種的衰退3/31/2024

⑵創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件⑶用不同類型的細胞進行傳代⑷采用有效的保藏方法4/1/202421⑵創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件3/31/202421

定期檢查

主要檢查項目菌落形態(tài)、革蘭染色、顯微鏡下菌體形態(tài)、生化特性及血清學檢查。4/1/202422定期檢查3/31/202422菌種的復壯使衰退的菌種重新恢復原來的優(yōu)良特性的過程驗室主要采用分離純化的方法。4/1/202423菌種的復壯3/31/202423

四、菌種的管理

1、使用菌種的單位，應具備從事微生物工作的條件和設備。菌種應由專人負責管理，管理人員應具有微生物專業(yè)知識和技術水平，并應具有較強的責任心。

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四、菌種的管理

1、使用菌種的單位，應具備從事微生物

2、實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度；

包括：每支菌種標注名稱、標準號、接種日期、傳代次數、進出、收集、貯藏、保存、確認試驗以及銷毀的記錄、標準菌種的申購記錄、從標準菌株到工作菌株操作記錄，如菌種定期轉種傳代，鑒定（純度、特性）、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。4/1/2024252、實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度；33、菌種應冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種應有專用的冰箱，應上鎖管理。4、由專人按操作規(guī)程和有關要求定期進行傳代，并定期對保存的菌種進行檢查，一般每年1～2次，（或定期更換凍干菌種）。發(fā)現菌種的異常情況應及時檢查。一旦發(fā)現菌種污染和變異現象，應立即報告、研究處理。尤其長期保存時。

4/1/2024263、菌種應冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮

詳細記錄菌種的來源、接收、傳代、分離、復壯、使用和鑒定等均應做好詳細記錄。包括菌保存位置、環(huán)境(溫度)、種傳代或使用時間、名稱、菌號、代數、傳代或保存形式、分離、復壯方式、使用內容、鑒定情況等都應進行詳細的記錄。4/1/202427詳細記錄3/菌種不得隨意帶出實驗室，外單位索取、購買應有證明和登記，并包裝嚴密。菌種處理應嚴格按操作規(guī)程進行，