紅細(xì)胞血型檢測(cè)

關(guān)于紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)2主要內(nèi)容輸血前免疫學(xué)檢查鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)酶處理試驗(yàn)技術(shù)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)吸收放散技術(shù)凝集試驗(yàn)技術(shù)紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)第2頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)3第一節(jié)輸血前免疫學(xué)檢查目的：使輸入的血液成分在受血者的體內(nèi)發(fā)揮其有效作用.

在正常情況下，輸入的紅細(xì)胞在受血者體內(nèi)不溶血，輸入的的血漿成分不破壞受血者的紅細(xì)胞。主要程序：受血者血液標(biāo)本的處理、ABO血型和RhD血型鑒定、紅細(xì)胞同種抗體篩查和鑒定、交叉配血。第3頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)4一、受血者標(biāo)本的處理（一）標(biāo)本的采集輸血除了需要達(dá)到預(yù)期的治療效果外，必須確保輸血安全。血樣由臨床護(hù)士完成，應(yīng)嚴(yán)格遵守一次只能為一位受血者抽取標(biāo)本，標(biāo)本不得從輸液管或輸液側(cè)筋脈中抽取。（二）標(biāo)本的接收

輸血科技師接收血樣標(biāo)本時(shí)，應(yīng)認(rèn)真核對(duì)受血者的相關(guān)信息，盡可能了解受血者有無輸血史、藥物史、妊娠史等情況。如果有輸血史，這有必要進(jìn)一步了解最后一次輸血的日期，若3個(gè)月內(nèi)輸過血，那么供血者的紅細(xì)胞沒有完全代謝消失，可能依然存在于血液循環(huán)中，導(dǎo)致血型定型試驗(yàn)中出現(xiàn)混合凝集的結(jié)果。第4頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)5（三）標(biāo)本的要求1.對(duì)輸血前檢查的血液標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格要求能代表受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀況，標(biāo)本還需經(jīng)鑒定和標(biāo)記，保證其準(zhǔn)確無誤地來自受血者和供血者，應(yīng)和血液申請(qǐng)單上的內(nèi)容一致。2.防止受血者血液標(biāo)本稀釋和（或）溶血，若采集過程中發(fā)生溶血?jiǎng)t不能使用。3.受血者配血試驗(yàn)的血液標(biāo)本必須是輸血前3天內(nèi)采集的。4.若受血者使用右旋糖酐、PVP等治療，應(yīng)注意洗滌被檢紅細(xì)胞。5.每次輸血后，受血者和供血者的標(biāo)本必須保存于2~8℃至少7天。第5頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)6二、受血者和供血者ABO和Rh定型

（一）、原理

根據(jù)紅細(xì)胞膜表面上有無A抗原或B抗原，將血型分為A型、B型、AB型、O型4種。A型人血清中含有抗-B抗體，B型人血清中含有抗-A抗體，O型人血清中含有抗-A抗體和抗-B抗體，AB型人血清中不含ABO抗體。正定型：用抗-A及抗-B試劑與被檢紅細(xì)胞反應(yīng)，檢測(cè)紅細(xì)胞表面是否存在A抗原或B抗原。反定型：用標(biāo)準(zhǔn)A細(xì)胞及B細(xì)胞與被檢血清反應(yīng)，檢測(cè)血清中是否存在抗體。由于ABO血型系統(tǒng)抗體多數(shù)為IgM類，在室溫鹽水介質(zhì)中就能出現(xiàn)明顯的凝集反應(yīng)。第6頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)7第7頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)8正反定型不符分析的基本程序：1、重新采集標(biāo)本2、查詢受血者既往病史、輸血史和用藥史等3、新鮮生理鹽水多次洗滌標(biāo)本和試劑紅細(xì)胞4、應(yīng)用抗-AB、抗-A1和抗-H檢測(cè)紅細(xì)胞5、分析O型篩選細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果第8頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)9反定型的意義：1、復(fù)檢正定型結(jié)果的準(zhǔn)確性2、發(fā)現(xiàn)具有弱抗原的亞型3、糾正因紅細(xì)胞抗原減弱而造成的血型錯(cuò)誤4、排除獲得性抗原和冷凝集現(xiàn)象的干擾5、發(fā)現(xiàn)一些亞型中的不規(guī)則抗體第9頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)10ABO定型

最適的反應(yīng)溫度為4℃，但在室溫反應(yīng)良好，所以常規(guī)的ABO定型試驗(yàn)僅在室溫進(jìn)行。1、定型方法：正、反定型的試管離心方法目前仍被認(rèn)為是最可信賴的ABO定型方法。1)定型試劑：有些ABO血型診斷試劑是以人的血清匯聚而制成的，但必須具備以下條件：第一，高效價(jià)(1：128)的IgM抗A或抗B。第二，具較好的親和性并不含冷凝集素。第三，必需具有檢測(cè)A2，A2B血型的能力。第四，血清必須通過HIV，HCV，HBV等檢查或經(jīng)病毒滅活。另外一些ABO定型試劑是由來自培養(yǎng)細(xì)胞株的單克隆抗體所制成。第10頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)11

2)ABO亞型的鑒定：ABO亞型的鑒定通常使用下列試劑：抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AB、A1紅細(xì)胞、A2紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和O型紅細(xì)胞。有些工作者在定型試驗(yàn)中，常規(guī)地選擇應(yīng)用抗AB抗血清，以避免錯(cuò)誤地把弱反應(yīng)性A或B型紅細(xì)胞分類為O型。一般抗AB試劑對(duì)Ax型紅細(xì)胞可增加凝集反應(yīng)的強(qiáng)度。第11頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)12ABO定型試驗(yàn)中的常見問題：造成這種正反定型不一致的原因主要有：1)技術(shù)和管理錯(cuò)誤：這是ABO定型中產(chǎn)生異常結(jié)果的主要原因，包括：標(biāo)本或試劑搞錯(cuò)；器材不潔；試劑污染或失效；離心過度或不足；陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別；漏加試劑；結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤；細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)。2)血清異常：血清蛋白引起緡錢狀形成，影響反定型結(jié)果。3)紅細(xì)胞致敏：受免疫球蛋白致敏的紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。4)異?；蛐停篈BO亞型的檢查中，A、B抗原可能為弱抗原，難以檢出。第12頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)135)近期輸血：試驗(yàn)前曾輸入過其它ABO血型不一致的血液，使血液標(biāo)本成為混合血型的紅細(xì)胞懸液，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。6)嵌合體血型：這種血型者體內(nèi)有兩類血型紅細(xì)胞群體，定型時(shí)可以出現(xiàn)“混合外觀凝集”現(xiàn)象。7)疾病因素導(dǎo)致抗原減弱：某些白血病患者和難治性貧血患者中，ABO血型系統(tǒng)的抗原性可受到抑制，檢出困難。8)紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。9)獲得性B：由于革蘭陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。第13頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)1410)血型特異性物質(zhì)過高：一些卵巢囊腫病例，血型物質(zhì)的濃度很高，可中和抗A和抗B定型試劑，要得到正確的正定型結(jié)果，必須洗滌紅細(xì)胞多次。11)近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療：由于使用大量的非同型的血漿作置換治療，標(biāo)本血清中含有所輸供體提供的抗A或抗B抗體，造成反定型錯(cuò)誤。12)異常的血漿蛋白：受檢者血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例和高濃度的纖維蛋白原等導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。13)不規(guī)則抗體的存在：受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，與試劑紅細(xì)胞上其他血型抗原系統(tǒng)的抗原起反應(yīng)。第14頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)1514)低丙種球蛋白血癥：低丙種球蛋白血癥(丙種球蛋白量減低)病例，可能會(huì)因免疫球蛋白水平下降而使血清定型時(shí)不凝集或弱凝集反應(yīng)。15)藥物等因素：藥物、右旋糖醉及靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞凝集或類似凝集。16)年齡因素：免疫系統(tǒng)尚未健全的嬰兒、由母親被動(dòng)獲得抗體的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)異常的結(jié)果。17)防腐劑因素：患者體內(nèi)可能含有對(duì)防腐劑中的成分或?qū)鞈医橘|(zhì)的抗體，導(dǎo)致ABO定型差錯(cuò)。第15頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)16Rh(D)定型和定型試驗(yàn)中應(yīng)注意的問題：

Rh定型主要鑒定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。

Rh系統(tǒng)是最為復(fù)雜得多一個(gè)系統(tǒng)，涉及臨床的主要有D、C、c、E、e五個(gè)抗原，其中D抗原的免疫原性最強(qiáng)，僅次于A或B抗原。

Rh血型鑒定方法有：玻片法、試管法、微量板法、微柱凝膠法等，試管法最為經(jīng)典。目前大部分醫(yī)院都使用微柱凝膠卡式血型鑒定，方法簡(jiǎn)便快捷，準(zhǔn)確度較高。第16頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)17第17頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)18導(dǎo)致Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因：1)受檢細(xì)胞已被免疫球蛋白致敏，或標(biāo)本血清中含有引起紅細(xì)胞凝集的因子。2)受檢細(xì)胞與抗血清孵育的時(shí)間過長(zhǎng)，含高蛋白的定型試劑會(huì)引起緡錢狀形成。3)標(biāo)本抗凝不當(dāng)，受檢過程中出現(xiàn)凝血或小的纖維蛋白凝塊，誤判為陽(yáng)性。4)定型血清中含有事先未被檢測(cè)的其它特異性抗體，造成假陽(yáng)性定型結(jié)果。5)多凝集細(xì)胞造成定型的假陽(yáng)性。6)鑒定用器材或抗血清被污染，造成假陽(yáng)性。第18頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)19可能出現(xiàn)假陰性的原因1)受檢細(xì)胞懸液濃度太高，與抗血清比例失調(diào)。2)漏加或錯(cuò)加定型血清。3)定型血清的使用方法錯(cuò)誤，沒有按說明書進(jìn)行。4)離心后重懸細(xì)胞扣時(shí)，搖動(dòng)用力過度，搖散微弱的凝集。5)抗血清保存不當(dāng)，導(dǎo)致失效。第19頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)20

弱D型(Du型)血型及其鑒定：Du型抗原是RhO(D)的弱抗原，這種抗原通常與大部分鹽水抗D試劑不產(chǎn)生直接凝集反應(yīng)，而與部分的IgG抗D血型用間接抗球蛋白試驗(yàn)反應(yīng)陽(yáng)性。因此當(dāng)我們初次得到Rh陰性結(jié)果時(shí)，必須進(jìn)行作Rh陰性確認(rèn)試驗(yàn)，即用三種不同批號(hào)的IgG抗D定型，如果全部陰性方可認(rèn)為該被檢者為Rh陰性，否則，只要有一批為陽(yáng)性，則可認(rèn)為是Du型。弱D人群作為獻(xiàn)血者按照RhD陽(yáng)性對(duì)待，其血液只能給Rh陽(yáng)性受血者輸注；作為受血者按照RhD陰性對(duì)待，只能接受RhD陰性血液。第20頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)21三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定定義：

不規(guī)則抗體是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗體，也稱意外抗體。不規(guī)則抗體包括同種抗體和自身抗體。自身抗體：受血者體內(nèi)產(chǎn)生的抗體，針對(duì)自己本身的紅細(xì)胞抗原。同種抗體：不只針對(duì)自身抗原，也會(huì)同種異型抗原發(fā)生反應(yīng)。

第21頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)22不規(guī)則抗體的篩查方法

抗體篩選試驗(yàn)的原則是讓受檢的血清與已知血型的試劑紅細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37℃中有反應(yīng)的抗體1.鹽水介質(zhì)法：主要用于IgM類抗體的篩查。優(yōu)點(diǎn)是：方法簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)單、成本低廉。缺點(diǎn)是：靈敏度低2.聚凝胺法：優(yōu)點(diǎn)：與水鹽介質(zhì)法比靈敏度有所提高。3.抗球蛋白試驗(yàn)：缺點(diǎn)：操作繁瑣、工作量大、耗時(shí)等。4.酶法：能暴露隱蔽抗原，增強(qiáng)一些稀有抗原檢測(cè)。但可能會(huì)破壞有些抗原，影響檢測(cè)。目前臨床是已不常使用。5.微柱凝膠卡式檢測(cè)法第22頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)23不規(guī)則抗體的鑒定

一旦抗體被檢出，應(yīng)作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性?？贵w鑒定實(shí)驗(yàn)包含以下主要內(nèi)容：

(1)自身細(xì)胞檢查：觀察患者(受者)的血清與患者(受者)自身細(xì)胞的反應(yīng)情況，確定血清內(nèi)是否有自身抗體或自身抗體和同種抗體二者同時(shí)存在。

(2)普紅細(xì)胞：使用試劑細(xì)胞中的譜細(xì)胞，應(yīng)用各種抗體檢查技術(shù)，檢測(cè)患者的血清，確定其抗體的特異性。第23頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)24四、交叉配血試驗(yàn)要求和內(nèi)容交叉配血的要求：主側(cè)配血要求：絕對(duì)不可以有凝集或溶血現(xiàn)象。次測(cè)配血要求：供血者血清加受血者紅細(xì)胞在允許范圍內(nèi)，可以有凝集現(xiàn)象，但不可以有溶血。凝集不凝集第24頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)25交叉配血試驗(yàn)的內(nèi)容患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)主側(cè)配血用患者血清與供者紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)次測(cè)配血供血者血清與患者紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)第25頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)26交叉配血的目的交叉配血試驗(yàn)是輸血前必要的步驟，主要是檢查受血者血清中有無能破壞供血者紅細(xì)胞的抗體。主要目的是為了防止輸血后產(chǎn)生溶血性反應(yīng)。盡可能確保對(duì)人和一個(gè)病人來說，輸了供血者的血不會(huì)引起有害反應(yīng)，并且使紅細(xì)胞在輸注后能保持最長(zhǎng)的存活時(shí)間。第26頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)27結(jié)果的解釋及處理1.抗體篩查陰性，交叉配血相容：絕大部分標(biāo)本抗體篩查陰性，交叉配血也是相容的。2.抗體篩查陰性，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽(yáng)性（1）復(fù)查血型（2）主側(cè)凝集類B抗原（3）血清中可能含有一種ABO抗體，必要時(shí)可以做ABO亞型鑒定第27頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)283.抗體篩查試驗(yàn)陽(yáng)性，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽(yáng)性（1）自身對(duì)照試驗(yàn)陰性：受血者體內(nèi)有同種不規(guī)則抗體。（2）自身對(duì)照試驗(yàn)陽(yáng)性：受血者血清內(nèi)可能有自身抗體或同時(shí)存在不規(guī)則抗體。第28頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)29影響因素

①離子干擾②溫度③操作不規(guī)范④離心不當(dāng)?shù)?9頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)30第二節(jié)鹽水介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)常用于血型鑒定、血清中IgM類抗體的篩查和鑒定、鹽水介質(zhì)的交叉配血等。

基本方法1.平板法用于ABO血型和RhD抗原的定型特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速，但易污染環(huán)境。2.試管法為定型試驗(yàn)方法，也可于半定量試驗(yàn)。是輸血前檢驗(yàn)最常用的試驗(yàn)方法。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速、易學(xué)，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。3.微孔板法為定性試驗(yàn)方法。第30頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)31

鹽水介質(zhì)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性第31頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)32第32頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)33第三節(jié)酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理：在酶的作用下切斷帶有負(fù)電荷的羧基基團(tuán)的唾液酸，降低Zeta電位，縮短紅細(xì)胞之間的距離。增強(qiáng)IgG抗體對(duì)紅細(xì)胞的凝集。常用對(duì)的酶：木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白酶，無花果蛋白酶等第33頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)34酶介質(zhì)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)主次側(cè)均加酶酶上海市血液中心血第34頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)3537℃水浴30分鐘

37℃離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性

第35頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)36結(jié)果的判斷（1）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管凝集為陽(yáng)性，不出現(xiàn)凝集判定為陰性。（2）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，實(shí)驗(yàn)失敗分析原因，重新實(shí)驗(yàn)。第36頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)37第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù)基本原理抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs實(shí)驗(yàn)）主要用于檢測(cè)血清中的不完全抗體如：IgG、IgA和（或）補(bǔ)體如：C3、C4。在鹽水介質(zhì)中，不完全抗體只能致敏紅細(xì)胞，而不能使紅細(xì)胞出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)，加入抗球蛋白試劑后，抗球蛋白分子的Fab片段與紅細(xì)胞表面的受體結(jié)合，而產(chǎn)生紅細(xì)胞凝集，因此采用此方法可以檢測(cè)出血清中是否存在不完全抗體。第37頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)38抗球蛋白試驗(yàn)原理圖第38頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)39分類及應(yīng)用

抗球蛋白試驗(yàn)直接間接致敏紅細(xì)胞的不完全抗體、補(bǔ)體血清中的不完全抗體應(yīng)用直接：HDN的診斷、AIHADE的診斷、藥物誘發(fā)型溶血病的診斷間接：交叉配血及血型鑒定、器官移植、等第39頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)40

抗球蛋白配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)37℃

37℃水浴30分鐘三洗

第40頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)41

加抗球蛋白抗球蛋白試劑上海市血液中心血離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性第41頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)42結(jié)果的判斷直接抗球蛋白試驗(yàn)：（1）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管凝集，判定為陽(yáng)性。（2）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管不凝集，須做陰性確認(rèn)后判定結(jié)果。（3）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，結(jié)果不可信不能發(fā)出報(bào)告，分析原因后重做試驗(yàn)。第42頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)43間接抗球蛋白試驗(yàn)：（1）陽(yáng)性對(duì)照管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，陰性對(duì)照管不呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，被檢管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)為陽(yáng)性結(jié)果，表示被檢者血清中含有抗體。（2）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管出現(xiàn)凝集，實(shí)驗(yàn)失敗，分析原因重做試驗(yàn)。第43頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)44第五節(jié)聚凝胺介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)聚凝胺實(shí)驗(yàn)技術(shù)是一種快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)紅細(xì)胞不完全抗體的方法，可用來檢測(cè)IgG抗體，但I(xiàn)gG抗體的抗-K抗體除外。一、實(shí)驗(yàn)原理

凝聚胺（polymatching）法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽(yáng)離子云，促進(jìn)血清（漿）中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入帶亞電荷的高價(jià)陽(yáng)離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短細(xì)胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會(huì)因電荷中和而分散，而由抗體介導(dǎo)的特異性凝集則不會(huì)分散第44頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)45聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)

室溫放置1分鐘主次側(cè)均加聚凝胺Polybrene上海市血液中心血第45頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)46離心聚凝胺引起紅細(xì)胞非特異性凝集重懸液上海市血液中心血主次側(cè)均加重懸液看結(jié)果陽(yáng)性陰性第46頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)47應(yīng)用范圍：血型鑒定、抗體篩查及交叉配血試驗(yàn)特點(diǎn)：靈敏、速度快、準(zhǔn)確、操作要求高。注意事項(xiàng)1.不能用含有枸櫞酸鈉和肝素抗凝標(biāo)本2.用聚凝胺試驗(yàn)技術(shù)交叉配血，出現(xiàn)不配合時(shí)，要用抗球蛋白試驗(yàn)重做，結(jié)果不一致時(shí)，以抗球蛋白試驗(yàn)為主。3.聚凝胺只能是正常紅細(xì)胞發(fā)生凝集，對(duì)缺乏唾液酸的細(xì)胞（如：T細(xì)胞及B細(xì)胞）無作用。第47頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)48第六節(jié)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)原理

微柱凝集試驗(yàn)的本質(zhì)是凝集反應(yīng)，在凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合，經(jīng)低速離心，未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠的底部（管底尖部），而與抗體結(jié)合或凝集的紅細(xì)胞，位于凝膠上層或懸浮在凝膠中。第48頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)49一、微柱凝膠試驗(yàn)原理將紅細(xì)胞和抗血清加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽(yáng)性,游離的紅細(xì)胞，被擠過裝有過濾介質(zhì)的小柱，而到達(dá)小柱的底部，證明未發(fā)生凝集判斷陰性.

操作及結(jié)果的判定第49頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)50二、應(yīng)用1.抗球蛋白試驗(yàn)直接抗球蛋白試驗(yàn)和間接抗球蛋白試驗(yàn)。2.ABO血型鑒定可做單純正定型，也可同時(shí)做正反定型。3.其他血型系統(tǒng)檢測(cè)如Rh其他抗原（CcEe）定型三、特征及優(yōu)點(diǎn)：1.簡(jiǎn)便

2.準(zhǔn)確：結(jié)果清晰明確，可重復(fù)性強(qiáng)。

3.敏感

4.結(jié)果保存時(shí)間長(zhǎng)

5.標(biāo)本用量少

6.標(biāo)準(zhǔn)化

7.安全第50頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)51四、微柱凝集試驗(yàn)中可能存在的問題1.假陽(yáng)性反應(yīng)2.假陰性反應(yīng)3.溶血反應(yīng)第51頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)52五、局限性與發(fā)展前景微柱凝集抗人球蛋白試驗(yàn)及微柱膠免疫檢測(cè)技術(shù)的本質(zhì)是血凝試驗(yàn)，這理論上為制備抗原抗體包被的紅細(xì)胞為指示紅細(xì)胞，以間接血凝試驗(yàn)來檢測(cè)紅細(xì)胞抗原抗體以外的其他血液紅細(xì)胞、中路標(biāo)志、病原微生物，以及人體中其他可溶性抗體，如對(duì)藥物抗體、自身抗體的檢測(cè)等提供了比傳統(tǒng)血凝檢驗(yàn)更為敏感、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單易行的方法。微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)獎(jiǎng)在臨床各個(gè)領(lǐng)域有更為廣闊的發(fā)展。第52頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)53第七節(jié)吸收放射試驗(yàn)概念※吸收試驗(yàn):抗原與抗體的結(jié)合是特異性的，因此具有抗體活性的血清加入相應(yīng)抗原后，抗體的活性下降或消失，這種作用稱為吸收試驗(yàn)?！派⒃囼?yàn)是抗原與抗體的結(jié)合是可逆的，在物理?xiàng)l件改變時(shí)，抗體又會(huì)從抗原抗體復(fù)合物上分離下來，將抗體由抗原抗體復(fù)合物上分離下來的試驗(yàn)稱為放散試驗(yàn)第53頁(yè),共60頁(yè)，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞血型檢測(cè)54※冷自身抗體

：理論上講凡是37℃與自身紅細(xì)胞不反應(yīng)，而只有在