維生素類藥物的分析

關(guān)于維生素類藥物的分析

公元前3500年-古埃及人發(fā)現(xiàn)能防治夜盲癥的物質(zhì)，也就是后來的維A。

1600年-醫(yī)生鼓勵以多吃動物肝臟來治夜盲癥。

1747年-蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現(xiàn)檸檬能治壞血病，也就是后來的維C。

1831年-胡蘿卜素被發(fā)現(xiàn)。

1911年-波蘭化學(xué)家豐克為維生素命名。

1915年-科學(xué)家認(rèn)為糙皮病是由于缺乏某種維生素而造成的維生素發(fā)展史第2頁,共149頁，2024年2月25日，星期天1916年-維生素B被分離出來。

1917年-英國醫(yī)生發(fā)現(xiàn)魚肝油可治愈佝僂病，隨后斷定這種病是缺乏維D引起的。

1920年-發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜素轉(zhuǎn)化為維生素A

1922年-維E被發(fā)現(xiàn)。

1928年-科學(xué)家發(fā)現(xiàn)維B至少有兩種類型。

1933年-維E首次用于治療。

1948年-大劑量維C用于治療炎癥。

第3頁,共149頁，2024年2月25日，星期天1949年-維B3與維C用于治療精神分裂癥。

1954年-自由基與人體老化的關(guān)系被揭開。

1957年-Q10多酶被發(fā)現(xiàn)。

1969年-體內(nèi)超級抗氧化酶被發(fā)現(xiàn)。

1970年-維C被用于治療感冒。

1993年-哈佛大學(xué)發(fā)表維生素E與心臟病關(guān)系的研究結(jié)果。第4頁,共149頁，2024年2月25日，星期天VitA、D2、D3、E、K1

等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、葉酸、煙酸、泛酸等。分類按溶解度分第5頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)維生素A的分析分類：A1、A2、A3A1存在于動物肝臟、血液和眼球的視網(wǎng)膜中，又稱為視黃醇,天然維生素A主要以此形式存在。脂溶性淡黃色片狀結(jié)晶，熔點64℃。A2主要存在于淡水魚的肝臟中。維生素A2的化學(xué)結(jié)構(gòu)與A1的區(qū)別只是在β-白芷酮環(huán)的3,4位上多一個雙鍵。第6頁,共149頁，2024年2月25日，星期天功能：維持視覺：維生素A可促進視覺細(xì)胞內(nèi)感光色素的形成。維生素A可調(diào)試眼睛適應(yīng)外界光線的強弱的能力，以降低夜盲癥和視力減退的發(fā)生，維持正常的視覺反應(yīng),有助于對多種眼疾(如眼球干燥與結(jié)膜炎等)的治療。

2.促進生長發(fā)育：與視黃醇對基因的調(diào)控有關(guān).視黃醇也具有相當(dāng)于類固醇激素的作用，可促進糖蛋白的合成。促進生長、發(fā)育，強壯骨骼，維護頭發(fā)、牙齒和牙床的健康。

第7頁,共149頁，2024年2月25日，星期天3.維持上皮結(jié)構(gòu)的完整與健全視黃醇和視黃酸可以調(diào)控基因表達(dá)，減弱上皮細(xì)胞向鱗片狀的分化，增加上皮生長因子受體的數(shù)量。保持皮膚濕潤，防止皮膚黏膜干燥角質(zhì)化，不易受細(xì)菌傷害，有助于對粉刺、膿包、癤瘡，皮膚表面潰瘍等癥的治療。4.加強免疫能力維生素A有助于維持免疫系統(tǒng)功能正常，能加強對傳染病特別是呼吸道感染及寄生蟲感染的身體抵抗力；有助于對肺氣腫、甲狀腺機能亢進癥的治療。第8頁,共149頁，2024年2月25日，星期天富含維生素A的食物梨、蘋果、枇杷、櫻桃、香蕉、桂圓、杏子、荔枝、西瓜、甜瓜。水果類第9頁,共149頁，2024年2月25日，星期天蔬菜類

馬齒菜、大白菜、薺菜、番茄、茄子、南瓜、黃瓜、菠菜第10頁,共149頁，2024年2月25日，星期天植物類綠豆、大米、胡桃仁第11頁,共149頁，2024年2月25日，星期天一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)R:-H維生素A醇

-COCH3維生素A醋酸酯

-COC15H31維生素A棕櫚酸酯一個共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯，有立體異構(gòu)體第12頁,共149頁，2024年2月25日，星期天

醋酸酯

相對生物效價維生素A325.5100%新維生素Aa32875%新維生素Ab320.524%新維生素Ac310.515%異維生素Aa32321%異維生素Ab32424%第13頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（二）性質(zhì)1、具紫外吸收：在325～328nm間有最大吸收2、不穩(wěn)定性：（易氧化變質(zhì)）

易被空氣中氧或氧化劑氧化易被紫外光裂解在加熱和金屬離子存在時，更易氧化變質(zhì)，生成無生物活性的環(huán)氧化物、維生素A醛及維生素A酸第14頁,共149頁，2024年2月25日，星期天△或有金屬離子存在時氧化↑第15頁,共149頁，2024年2月25日，星期天3、能與三氯化銻呈色：產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色。4、溶解性：維生素A能與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶第16頁,共149頁，2024年2月25日，星期天二、鑒別試驗（一）三氯化銻反應(yīng)原理：維生素A在飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液中，即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。注意：鑒別在無水、無醇（乙醇可以和碳正離子作用使其正電荷消失）條件下進行。CHCl3水中水解為氯化氧銻第17頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（二）紫外吸收光譜：

5個共軛雙鍵6個共軛雙健第18頁,共149頁，2024年2月25日，星期天去水VitA（VitA3）↓VitA第19頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第20頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（三）薄層色譜吸附劑：硅膠G展開劑：環(huán)己烷-乙醚(80:20)點樣量：各2μl，不必?fù)]散溶劑，立即展開顯色劑：三氯化銻溶液結(jié)論：比較供試品溶液和對照品溶液所顯藍(lán)色斑點位置第21頁,共149頁，2024年2月25日，星期天BP

雜質(zhì)對照品法顯色劑三氯化銻USP顯色劑磷鉬酸規(guī)定斑點顏色和Rf值第22頁,共149頁，2024年2月25日，星期天立體異構(gòu)體氧化降解產(chǎn)物合成中間體副產(chǎn)物UV法（一）三、含量測定維生素A2維生素A3環(huán)氧化物維生素A醛維生素A酸第23頁,共149頁，2024年2月25日，星期天1、方法建立的依據(jù)三點校正法第24頁,共149頁，2024年2月25日，星期天2、測定原理方法的依據(jù)：★主成分：在325～328nm有吸收★雜質(zhì)：在310～340nm范圍內(nèi)吸收呈一條直線，且隨波長的增大，吸收度變小。★物質(zhì)對光的吸收具有加和性。第25頁,共149頁，2024年2月25日，星期天3、三點波長的選擇（1）第1點：選擇維生素A的最大吸收波長(λ1)（2）第2點和第3點：在λmax兩側(cè)各選一點①等波長差法：λ3-λ1=λ1-λ2

測定VA醋酸酯，規(guī)定：

λ1=328nm，入2=316nm，λ3=340nm②等吸收度法：Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1

測定VA醇，規(guī)定：

λ1=325nm，λ2=310nm,λ3=334nm第26頁,共149頁，2024年2月25日，星期天4、雜質(zhì)吸收(1)維生素A2和維生素A3(2)維生素A的氧化產(chǎn)物為環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸。(3)維生素A在光照下產(chǎn)生的無生物活性的聚合物鯨醇。(4)維生素A的異構(gòu)體。(5)合成時產(chǎn)生的中間體。

(1)～(5)這些雜質(zhì)在310～340nm波長范圍內(nèi)有吸收，因此，在測定維生素A含量時，必須考慮這些雜質(zhì)的干擾。三點校正法可以消除這些雜質(zhì)的影響。第27頁,共149頁，2024年2月25日，星期天5、測定方法（1）基本步驟:第一步A的選擇選擇依據(jù)：所選A值中雜質(zhì)的干擾已被基本消除第28頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第二步：求百分吸收系數(shù)，

注意：

C為混合樣品的濃度第29頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第三步求效價換算因數(shù)由純品計算而得：第30頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第31頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第32頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第四步：求標(biāo)示量％第33頁,共149頁，2024年2月25日，星期天(2)第一法—等波長差法，高純度VA醋酸酯測量方法：計算各波長下的吸收度與328nm波長下的吸收度的比值第34頁,共149頁，2024年2月25日，星期天判斷是否在326～329nm之間在326～329nm之間改用第二法是否

求算并與規(guī)定值比較第35頁,共149頁，2024年2月25日，星期天

規(guī)定值差值第36頁,共149頁，2024年2月25日，星期天判斷前提；最大吸收波長在326～329nm之間A的選取直接用A328A328

A328校正

第一法不適用

第37頁,共149頁，2024年2月25日，星期天03%－15%－3%第二法第二法第38頁,共149頁，2024年2月25日，星期天討論VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程式法（即代數(shù)法）推導(dǎo)而來；VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（幾何法或稱6/7定位法）推導(dǎo)而來。在應(yīng)用三點校正法時，除其中一點在最大吸收波長處測定外，其余兩點均在最大吸收峰的兩側(cè)進行測定。在測定前務(wù)必要校正波長。測定的樣品應(yīng)不得少于兩份。第39頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（3）第二法皂化法：適用于維生素A醇加熱回流第40頁,共149頁，2024年2月25日，星期天判斷

max是否在323～327nm之間取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定計算是否≤0.73進一步判斷＞0.73，雜質(zhì)含量過高第41頁,共149頁，2024年2月25日，星期天03%－3%第42頁,共149頁，2024年2月25日，星期天二、三氯化銻比色法優(yōu)點簡便快速λmax618nm～620nm標(biāo)準(zhǔn)曲線法缺點呈色不穩(wěn)定（5~10s內(nèi)）水分干擾與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性第43頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（三）高效液相色譜法RP-HPLC同時測定人血清中VitA和VitE的含量1、儀器與分析條件：HPLC-UV、C18(300×3.9mm）、甲醇－水（96：4）、流速：1.2ml/min、檢測波長：0～8min(330nm),8min后(292nm）內(nèi)標(biāo)：維生素A醋酸酯第44頁,共149頁，2024年2月25日，星期天血清樣品的制備：LLE法制備分析方法的建立：線性

LODRecoveryPrecisionChromatogram:第45頁,共149頁，2024年2月25日，星期天作業(yè)：維生素AD膠丸中維生素A醋酸酯的測定方法如下：取內(nèi)容物0.0410g，加環(huán)己烷溶解并稀釋至50ml，搖勻，取出2ml加環(huán)己烷溶解并稀釋至25ml，搖勻，在下列5個波長處測定吸光度如下：已知：平均丸重（平均內(nèi)容物重）=0.0910g，標(biāo)示量10000IU/丸，求維生素A醋酸酯的標(biāo)示量%？波長（nm）測得A值藥典規(guī)定的吸收度比值3000.2120.5553160.3090.9073280.3371.0003400.2730.8113600.1160.299第46頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)維生素Bl的分析第47頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第48頁,共149頁，2024年2月25日，星期天二、結(jié)構(gòu)及性質(zhì)(一)結(jié)構(gòu)氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿)HClCl-存在于米糠、麥麩和酵母中人工合成第49頁,共149頁，2024年2月25日，星期天(二)性質(zhì)（1）溶解性：在水中易溶，水溶液顯酸性在乙醇中微溶，在乙醚中不溶（2）具有紫外吸收：λmax=246nm（HCl溶液）（3）硫色素反應(yīng)：具有熒光第50頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（4）堿性

可與酸成鹽

與生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成組成恒定的沉淀。

（5）氯化物特性嘧啶環(huán)—伯胺噻唑環(huán)—季銨碘化汞鉀、三硝基酚、碘溶液、硅鎢酸等第51頁,共149頁，2024年2月25日，星期天三、鑒別試驗(一)硫色素反應(yīng)——維生素B1的專屬反應(yīng)原理：第52頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第53頁,共149頁，2024年2月25日，星期天硫色素【O】第54頁,共149頁，2024年2月25日，星期天注意事項：(1)硫色素反應(yīng)為維生素Bl的專屬反應(yīng)，雖非定量完成，但在一定條件下形成的硫色素與維生素Bl濃度成正比，且回收恒定。故可用于維生素Bl及其制劑的含量測定。(2)本法為維生素B1所特有，故不受氧化破壞產(chǎn)物的干擾，測定結(jié)果較為準(zhǔn)確。但操作繁瑣，且熒光測定受多種因素干擾；(3)本法中使用的氧化劑，除鐵氰化鉀外、尚可用氯化汞或溴化氰。其中，溴化氰能將維生素Bl完全定量地氧化為硫色素，在較寬的濃度范圍內(nèi)與熒光強度成正比，且尿液中某些代謝產(chǎn)物不干擾測定。故亦適用于臨床體液分析。第55頁,共149頁，2024年2月25日，星期天VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反應(yīng)第56頁,共149頁，2024年2月25日，星期天S元素反應(yīng)Cl-反應(yīng)（三）其他反應(yīng)()21PbSNaSVitBNO3PbNaOH第57頁,共149頁，2024年2月25日，星期天四、含量測定非水溶液滴定法（原料）和紫外分光光度法（制劑）、硫色素?zé)晒夥ǎ║SP（24））。（一）非水滴定法1、原理：含有兩個堿性的已成鹽的伯胺和季銨基團，在非水溶液中可與高氯酸作用，用于含量測定。

喹那啶紅－亞甲藍(lán)（紫紅→天藍(lán)）第58頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第59頁,共149頁，2024年2月25日，星期天2、方法：用冰醋酸作溶劑，滴加醋酸汞，以喹哪啶紅—亞甲藍(lán)混合物作指示劑，高氯酸作滴定液第60頁,共149頁，2024年2月25日，星期天3、注意事項：（1）加醋酸汞。（2）滴定度為16.86mg/ml。

VB1有兩個堿性基團，與高氯酸反應(yīng)的摩爾比為1︰2（3）非水容量法可用于弱酸性特別是弱堿性藥物及其鹽類的含量測定。（4）此處僅適用于維生素B1的原料藥含量測定。第61頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（二）紫外分光光度法1、原理：第62頁,共149頁，2024年2月25日，星期天2、VB1片的含量測定

測定方法：

以鹽酸溶液(9→1000)作溶劑，在246nm測定吸收度，按Cl2Hl7ClN4OS·HCl的吸收系數(shù)(百分吸收系數(shù))為421計算，即得。

第63頁,共149頁，2024年2月25日，星期天片劑、注射劑=421（每片）相當(dāng)于標(biāo)示量的%=A=ECL規(guī)格g/片g/100mlgChP第64頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（每ml）相當(dāng)于標(biāo)示量的%=規(guī)格g/mlml第65頁,共149頁，2024年2月25日，星期天差示分光光度法簡稱ΔA法取兩份相等的供試液，一份加酸，另一份加堿或緩沖液或其他能夠發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑，有時也可不加任何溶液，然后將兩者分別稀釋至同樣濃度，一份置樣品池中，另一份置參比池中，于適當(dāng)波長處，測其吸收度的差值（ΔA值）在供試溶液的一定濃度范圍內(nèi)，ΔA值與濃度C之間呈線性關(guān)系。優(yōu)點：在不同pH介質(zhì)中，或經(jīng)適當(dāng)化學(xué)反應(yīng)后，供試物發(fā)生了特征性的光譜變化，而賦形劑或其他共存物質(zhì)不受pH條件或化學(xué)試劑的影響，未引起光譜變化，從而消除了它們的干擾。第66頁,共149頁，2024年2月25日，星期天差示分光光度法ΔA法使用：1、利用最大吸收波長進行藥物的測定：紫外光譜對pH十分敏感時，可測得ΔA（堿-酸）或ΔA（pH7-酸）。2、利用最大吸收與最小吸收之差（即振幅）進行藥物測定：某些藥物共存物在某pH范圍內(nèi)的光譜與pH無關(guān)（即吸收度不變）。而主藥有最大和最小吸收，兩者差值與主藥濃度成正比。

第67頁,共149頁，2024年2月25日，星期天差示分光光度法ΔA法使用：3、利用干擾雜質(zhì)等吸收波長進行測定：于干擾物的等吸收波長處進行測量，如測得供試物的相應(yīng)吸收度，即可消除共存物的干擾。4、利用最小吸收波長(lmin)處的增色效應(yīng)進行測定：某些藥物在堿性和酸性溶液中吸收重疊，但吸收值不同。但在堿性或酸性溶液中于lmax或lmin處可產(chǎn)生增色效應(yīng)，利用此效應(yīng)可測定藥物濃度。

第68頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（三）硫色素?zé)晒夥ㄔ?、熒光硫色素異丁醇鐵氰化鉀1VitBNaOH通過與對照品熒光強度的比較即可測得供試品含量第69頁,共149頁，2024年2月25日，星期天2、實驗操作

40ml具塞試管3支→對照品溶液5ml；其中2支加入氧化試劑3.0ml，再迅速加入異丁醇20ml，振搖。第三支試管中加入3.5mol/l的NaOH，同法操作為空白。另取三支試管加入供試品，同法操作。各試管中加入無水乙醇2ml，分取異丁醇，進行熒光測定。第70頁,共149頁，2024年2月25日，星期天3、結(jié)果計算式中：A和S分別為供試品和對照品溶液測得的平均熒光讀數(shù)；

b和d則分別為其相應(yīng)的空白讀數(shù)；

0.2為對照品溶液的濃度（μg/ml）；

5為測定時對照品溶液的取樣體積（ml）。第71頁,共149頁，2024年2月25日，星期天特點4、（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）代謝產(chǎn)物不干擾，適用于體液分析（3）該法適用于VitB1的制劑含量分析（4）可用BrCN為氧化劑，反應(yīng)定量完全，適合于生物樣本分析第72頁,共149頁，2024年2月25日，星期天

第三節(jié)維生素C的分析

功效：1、促進膠原蛋白的合成2、治療壞血病3、預(yù)防牙齦萎縮、出血4、預(yù)防動脈硬化5、抗氧化劑6、治療貧血7、防癌8、保護肝臟的解毒能力和細(xì)胞的正常代謝9、提高人體的免疫力10、提高機體的應(yīng)急能力第73頁,共149頁，2024年2月25日，星期天維生素C有四種光學(xué)異構(gòu)體，其中以L-構(gòu)型右旋體的生物活性最強。

藥典：維生素C原料、片劑、泡騰片、顆粒劑和注射劑第74頁,共149頁，2024年2月25日，星期天一、結(jié)構(gòu)及性質(zhì)(一)結(jié)構(gòu)

具有烯二醇結(jié)構(gòu)和內(nèi)酯環(huán)

在C4、C5有兩個手性碳原子

性質(zhì)活潑

具有旋光性第75頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（二）性質(zhì)1、溶解性：

水中易溶

乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶

水溶液呈酸性第76頁,共149頁，2024年2月25日，星期天C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.57一元酸（與碳酸氫鈉成鹽）2、具有酸性第77頁,共149頁，2024年2月25日，星期天烯二醇結(jié)構(gòu)（抗壞血酸）二酮基結(jié)構(gòu)（去氫抗壞血酸）烯二醇結(jié)構(gòu)[o]-2H+2H3、強還原性第78頁,共149頁，2024年2月25日，星期天有活性有活性無活性L-二酮古洛糖酸第79頁,共149頁，2024年2月25日，星期天L(+)－抗壞血酸活性最強手性C（C4、C5）**4、光學(xué)活性第80頁,共149頁，2024年2月25日，星期天與堿反應(yīng)內(nèi)酯環(huán)5、水解性第81頁,共149頁，2024年2月25日，星期天△糖類的顯色反應(yīng)50℃結(jié)構(gòu)與糖類相似6、糖類的性質(zhì)第82頁,共149頁，2024年2月25日，星期天7、紫外吸收特性第83頁,共149頁，2024年2月25日，星期天二、鑒別試驗（一）利用VC所具有的強還原性第84頁,共149頁，2024年2月25日，星期天1、與硝酸銀反應(yīng)(1)方法：取本品0.2g，加水l0ml溶解。取該溶液5m1，加硝酸銀試液0.5m1，即生成銀的黑色沉淀。(2)原理：烯二醇基，具強還原性

第85頁,共149頁，2024年2月25日，星期天2、與2，6—二氯靛酚反應(yīng)(1)方法：取本品0.2g，加水l0ml溶解。取該溶液5m1，加2，6—二氯靛酚試液1～2滴，試液的顏色即消失。第86頁,共149頁，2024年2月25日，星期天原理：氧化型玫瑰紅色還原型藍(lán)色OHˉ（玫瑰色）（無色）第87頁,共149頁，2024年2月25日，星期天3、與其他氧化劑反應(yīng)亞甲藍(lán)或高錳酸鉀試劑褪色

堿性酒石酸銅磚紅色沉淀

磷鉬酸鉬藍(lán)

第88頁,共149頁，2024年2月25日，星期天或鹽酸吡咯50℃（二）利用維生素C所具有糖類性質(zhì)的反應(yīng)第89頁,共149頁，2024年2月25日，星期天

H+吡咯第90頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（三）利用VC所具有的紫外吸收特性

維生素C在0.0lmol/L鹽酸液中，在243nm波長處有惟一的最大吸收，利用此特征進行鑒別。

BP中采用該法，并規(guī)定其吸收系數(shù)應(yīng)為545～585之間（四）薄層色譜第91頁,共149頁，2024年2月25日，星期天三、雜質(zhì)檢查1.溶液的澄清度與顏色：有色雜質(zhì)分光光度法2.鐵、銅離子：原子吸收分光光度法3.草酸的檢查：

第92頁,共149頁，2024年2月25日，星期天四、含量測定具有較強的還原性，可被不同氧化劑定量氧化。（一）碘量法1、原理指示劑淀粉指示液第93頁,共149頁，2024年2月25日，星期天H+第94頁,共149頁，2024年2月25日，星期天

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6方法2、第95頁,共149頁，2024年2月25日，星期天3、注意事項①防止樣品氧化減慢VitC被O2氧化速度②用新沸冷水作溶劑趕走水中O2③應(yīng)用范圍廣對維生素C原料、維生素C片、維生素C泡騰片、維生素C注射液、維生素C顆粒劑等的含量測定均采用。差別僅在前處理：為了消除制劑中輔料對測定的干擾，滴定前要作些必要的處理。第96頁,共149頁，2024年2月25日，星期天4、附加劑干擾的排除片劑——滑石粉——過濾注射劑——抗氧劑——丙酮甲醛Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O5第97頁,共149頁，2024年2月25日，星期天2，6-二氯靛酚滴定法（二）USPJP原理1、酚亞胺二氯靛酚，-62VitC第98頁,共149頁，2024年2月25日，星期天自身指示終點法方法2、第99頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（2）快速滴定2min內(nèi)

（1）酸性環(huán)境HPO3-HAc

穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質(zhì)干擾（3）剩余比色測定

（定量過量）（測剩余染料）討論3、第100頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（4）缺點

需經(jīng)常標(biāo)定貯存≤一周不穩(wěn)定干擾多氧化力較強第101頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（三）高效液相色譜法人血漿中VitC濃度的HPLC法測定1、色譜條件2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備3、血漿樣品的處理：酸性溶液沉淀蛋白法4、方法學(xué)考察5、測定第102頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第103頁,共149頁，2024年2月25日，星期天是抗佝僂病維生素的總稱。收載有：維生素D2、D3原料藥、維生素D2膠丸和注射劑、維生素D3注射劑等。第四節(jié)維生素D的分析第104頁,共149頁，2024年2月25日，星期天維生素D3－膽骨化醇一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素D2－骨化醇24（一）結(jié)構(gòu)第105頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（二）性質(zhì)：1、性狀：D2、D3無臭、無味，遇光易變質(zhì)2、溶解性：在植物油中略溶，水中不溶3、不穩(wěn)定性：含有多個烯鍵，不穩(wěn)定，易氧化變質(zhì)降低效價，毒性增加。4、旋光性：維生素D2有6個手性碳原子維生素D3有5個手性碳原子5、顯色反應(yīng)：甾醇類化合物共有6、紫外吸收特性第106頁,共149頁，2024年2月25日，星期天二、鑒別試驗（一）顯色反應(yīng)1.醋酐-硫酸反應(yīng)D2

黃紅紫綠

D3

黃紅紫、藍(lán)綠綠2.三氯化銻反應(yīng)橙紅色漸變粉紅3.三氯化鐵反應(yīng)橙黃色4.二氯丙醇和乙酰氯反應(yīng)綠色漸變漸變迅即迅即第107頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（二）比旋度鑒別維生素D2維生素D3溶劑

濃度比旋度值無水乙醇無水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5°～+107.5°+105°～+112°注意事項：應(yīng)于容器開啟30分鐘內(nèi)取樣在溶液配制后30分鐘內(nèi)測定第108頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（三）區(qū)別反應(yīng)：

以96%乙醇為溶劑，加乙醇和85%硫酸D2顯紅色，在570nm處有最大吸收D3顯黃色，在495nm處有最大吸收4.其他方法：

TLC、HPLC、制備衍生物測熔點。

第109頁,共149頁，2024年2月25日，星期天三、雜質(zhì)檢查維生素D2中麥角甾醇的檢查：加洋地黃皂苷溶液，混合，放置18h不得發(fā)生渾濁或沉淀。前維生素D的光照產(chǎn)物第110頁,共149頁，2024年2月25日，星期天四、含量測定方法

中國藥典采用正相高效液相色譜法(NP-HPLC）測定維生素D的含量，定量方法為內(nèi)標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)物為鄰苯二甲酸二甲酯。根據(jù)樣品的具體情況按以下三個方法進行分析。第111頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第一法：用于無維生素A醇及其它雜質(zhì)干擾的情況系統(tǒng)適用性試驗：測定重復(fù)性和分離度。固定相：硅膠

流動相：正己烷-正戊醇（997：3）照射第112頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第二法：用于有雜質(zhì)的干擾的情況，步驟如下：

1．皂化處理：皂化、乙醚提取、洗滌提取液、蒸發(fā)除乙醚、制備供試液A。

2．凈化：供試液A經(jīng)液相色譜分離，準(zhǔn)確收集含有維生素D及前維生素D混合物的全部流出液，制備成供試液B。

固定相：ODS

流動相：甲醇-乙腈-水（50：50：2）

3．含量測定：取供試液B按第一法測定。

第113頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第三法：用于經(jīng)第二法處理后仍有雜質(zhì)的干擾的情況1．制備供試液：取供試液A，凈化，水浴加熱，正已烷溶解，得供試液C。

制備對照液：對照品儲備液（異辛烷溶解），稀釋、加熱。2．含量測定：在第一法的色譜條件下，交替精密進樣。對照液和供試液，按外標(biāo)法定量第114頁,共149頁，2024年2月25日，星期天討論1、采用的是正相高效液相色譜法2、測定過程中應(yīng)避免VitD的氧化3、皂化應(yīng)劇烈振搖，水浴溫度≤40℃，提取溶劑大多采用己烷或戊烷以消除苯的毒性4、若供試品中沒有VitA醇及其它雜質(zhì)干擾時，可以直接進樣分析5、注意色譜系統(tǒng)適用性樣品VitD、前VitD的制備方法第115頁,共149頁，2024年2月25日，星期天一、結(jié)構(gòu)及性質(zhì)(一)結(jié)構(gòu)維生素E為苯并二氫吡喃醇衍生物，苯環(huán)上有一個乙?；姆恿u基，故又稱生育酚醋酸酯。有α、β、γ和δ四種異構(gòu)體，其中以α異構(gòu)體的生理作用最強。第五節(jié)維生素E的分析第116頁,共149頁，2024年2月25日，星期天dl－α－生育酚醋酸酯第117頁,共149頁，2024年2月25日，星期天(二)性質(zhì)1、溶解性

微黃色或黃色透明的粘稠液體

易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中，不溶于水2、具有紫外吸收：苯環(huán)上有酚羥基

VE的0.lmg/ml無水乙醇溶液在284nm波長處測定吸收度時，其吸收系數(shù)為41.0～45.0。第118頁,共149頁，2024年2月25日，星期天3、易水解氧化：★在無氧或其他氧化劑存在時，對熱穩(wěn)定★在有氧或其他氧化劑存在時，遇光、空氣可被氧化第119頁,共149頁，2024年2月25日，星期天二、鑒別試驗（一）硝酸反應(yīng)原理：75℃15′橙紅色第120頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（橙紅色）生育紅HNO3強氧化劑第121頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（二）三氯化鐵反應(yīng)第122頁,共149頁，2024年2月25日，星期天=41.0～45.5λmax=284nmλmin=254nm0.01%無水乙醇中UV法（三）第123頁,共149頁，2024年2月25日，星期天薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）

結(jié)果各物質(zhì)的Rf值分別為：α-生育酚為0.5α-生育酚醋酸酯為0.7α-生育酮為0.9（四）TCL法第124頁,共149頁，2024年2月25日，星期天三、特殊雜質(zhì)1、酸度目的：制備過程引入的游離醋酸

方法：以NaOH滴定液（0.1mol/L≤0.5ml）體積控制。2、游離生育酚的檢查原理：利用游離生育酚的還原性，用硫酸鈰滴定液(0.0lmol/L)滴定，以二苯胺為指示劑，雜質(zhì)的限量為2.15%。第125頁,共149頁，2024年2月25日，星期天硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黃→灰紫）（二）試劑第126頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（M生育酚=430.8）

取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過1.0ml。第127頁,共149頁，2024年2月25日，星期天≤2.15％限量（三）第128頁,共149頁，2024年2月25日，星期天藥典規(guī)定消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）≤1.0ml若硫酸鈰液濃度不是0.01mol/L，應(yīng)重新計算硫酸鈰的消耗量第129頁,共149頁，2024年2月25日，星期天四、含量測定（一）GC法（法定方法）GC特點選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強→衍生化易受樣品蒸氣壓限制第130頁,共149頁，2024年2月25日，星期天

中國藥典（2005年版）規(guī)定：VE的原料藥、片劑、注射劑、膠丸、粉劑等都采用氣相色譜法。1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗載氣：氮氣固定相：硅酮(OV-I7)涂布于經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅藻土或高分子多孔小球上，涂布濃度為2%;第131頁,共149頁，2024年2月25日，星期天

柱溫：265℃;進樣口溫度高于柱溫30～50℃

檢測器：氫火焰離子化檢測器;

柱效：理論塔板數(shù)按維生素E峰計算應(yīng)不低于500

分離度：維生素E峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于22、校正因子測定

內(nèi)標(biāo)：正三十二烷，加正己烷溶解稀釋成含

1.0mg/lml

進樣量：1～3μ13、測定方法取1～3μ1注入氣相色譜儀，測定，計算，即得。第132頁,共149頁，2024年2月25日，星期天(二)HPLC—用外標(biāo)法可以測定dl–α–生育酚1、色譜條件：★色譜柱：內(nèi)徑4mm,長15～30Cm的不銹鋼柱;填充以粒徑5～l0μm的十八烷基硅烷鍵合硅膠固定相★流動相：甲醇-水(49:1)★紫外檢測器;波長為292nm★維生素E比醋酸維生素E先出峰，且二峰的分離度應(yīng)大于2.6?！镄枳鲋噩F(xiàn)性試驗，即重復(fù)試驗3次，峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.8%。第133頁,共149頁，2024年2月25日，星期天2、測定方法：取供試品液和對照品液各20μl注入高效液相色譜儀中，記錄峰高HX和Hr3、計算：供試品中維生素E的量mx(mg)=式中：mr—為生育酚對照品的量，Hx、Hr—為生育酚供試品、對照品中檢測得峰高。第134頁,共149頁，2024年2月25日，星期天（三）熒光分光光度法1、藥物本身具有熒光2、溶劑產(chǎn)生的拉曼光譜影響測定方法的靈敏度和準(zhǔn)確度3、采用同步熒光掃描法測定，消除干擾同步熒光掃描法測定血清中VitE的含量第135頁,共149頁，2024年2月25日，星期天1、儀器：熒光分光光度計2、樣品液的制備:樣品測定管U、標(biāo)準(zhǔn)管S、空白管B3、測定方法：測定Fu、Fs、Fb4、計算：第136頁,共149頁，2024年2月25日，星期天Discussion激發(fā)波長

295nm發(fā)射波長325nm普通熒光同步熒光選擇合適的波長差來消除溶劑的干擾第137頁,共149頁，2024年2月25日，星期天第六節(jié)復(fù)方制劑中多種維生素的分析離子對HPLC法測