（高清版）GBZT 330-2024 尿中12-雙羥基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷測(cè)定標(biāo)準(zhǔn) 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

CCS13.100C52中華人民共和國(guó)國(guó)家職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)Determinationstandardof1,2-dihydroxy-4-(N-acetylcysteine)-butaneinLiquidchromatography-tandemmassspectrIGBZ/T330—2024本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)職業(yè)健康標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會(huì)負(fù)責(zé)技術(shù)審查和技術(shù)咨詢，由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)性和格式審查，由國(guó)家衛(wèi)生健康委職業(yè)健康司負(fù)責(zé)業(yè)務(wù)管理、法規(guī)司負(fù)責(zé)統(tǒng)籌管本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省職業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病防治研究院、山東省疾病預(yù)防控制中心、山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院、泰安市疾病預(yù)防控制中心、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、復(fù)旦大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：趙敬、程學(xué)美、邵華、宋利群、周莉莉、劉冰、張?zhí)炝?、朱寶立、夏昭林?GBZ/T330—2024尿中1,2-雙羥基-4-(N-乙酰半胱氨酸)-丁烷測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定尿中1,3-丁二烯代謝產(chǎn)物1,2-雙羥基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷（DHBMA）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于職業(yè)接觸1,3-丁二烯人員尿中1,2-雙羥基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷（DHBMA）濃度的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GBZ/T295職業(yè)人群生物監(jiān)測(cè)方法總則WS/T97尿中肌酐分光光度測(cè)定方法WS/T98尿中肌酐的反相高效液相色譜測(cè)定方法3術(shù)語和定義GBZ/T295界定的術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。4原理尿樣經(jīng)乙酸銨溶液稀釋，微孔濾膜過濾后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，以保留時(shí)間和特征離子豐度比值進(jìn)行定性，同位素內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)曲線法定量。5儀器5.1漩渦震蕩器。5.2微孔濾膜：0.45μm，水相。5.3具塞聚乙烯塑料瓶：15mL、50mL。5.4離心管：2mL。5.5液相色譜-串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）。儀器操作參考條件：a)色譜條件：——色譜柱：四乙氧基硅氧烷鍵合的硅膠顆粒，T31.8μm，規(guī)格：2.1mm×150mm；——柱溫：40℃;——進(jìn)樣量：5μL；——流動(dòng)相：15mmol/L乙酸銨(pH：6.8)：乙腈；——梯度洗脫條件見表1。2GBZ/T330—2024表1梯度洗脫條件%%353b)質(zhì)譜條件：——離子源：電噴霧離子源；——離子化模式：負(fù)離子模式；——掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）；——離子源溫度（TEM650℃;電噴霧離子電壓（IS-4000V；碰撞氣（CAD7psi；氣簾氣（CUR）：45psi；霧化氣（GS1）：55psi；輔助氣（GS2）：65psi；——多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件見表2。表2多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件v6試劑6.1實(shí)驗(yàn)用水：去離子水。6.2甲醇：色譜純。6.3異丙醇：色譜純。6.4乙酸銨：色譜純。6.5乙腈：色譜純。6.6DHBMA，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥95%）。6.7DHBMA-D7，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥95%）。6.8乙酸銨溶液（15mmol/L精確稱取2.31g乙酸銨，置于燒杯中，加入少量去離子水，超聲10min后，用去離子水溶解并定容至2L，該溶液pH約為6.8。6.9標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精確稱取適量DHBMA，用去離子水溶解并定容，配制成濃度為1000.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，此溶液在4℃條件下可穩(wěn)定保存3個(gè)月。6.10標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液：用去離子水將DHBMA標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液稀釋成濃度分別為10.0mg/L、1.0mg/L、100.0μg/L的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液。6.11內(nèi)標(biāo)貯備溶液：精確稱取適量DHBMA-D7，用去離子水溶解并定容，配制成濃度為1000.0mg/L的內(nèi)標(biāo)貯備溶液。3GBZ/T330—20246.12內(nèi)標(biāo)應(yīng)用溶液：用去離子水將內(nèi)標(biāo)貯備溶液稀釋，配制成濃度為600.0μg/L的DHBMA-D7內(nèi)標(biāo)應(yīng)用溶液。7樣品采集、運(yùn)輸和保存7.1樣品的采集：按GBZ/T295要求采集班末尿液樣品50mL，置于2支具塞聚乙烯塑料瓶，嚴(yán)密封7.2樣品空白的采集：在樣品采集過程中，用50mL去離子水代替尿樣，加入尿樣容器，與樣品同時(shí)運(yùn)輸和儲(chǔ)存，作為樣品空白。7.3樣品應(yīng)置4℃條件下密封避光保存和運(yùn)輸，樣品在4℃條件下可穩(wěn)定保存14d。8分析步驟8.1肌酐測(cè)定：取出1支尿液樣品，按WS/T97或WS/T98測(cè)定尿中肌酐濃度。8.2樣品處理：尿樣置于室溫平衡經(jīng)振蕩混勻后，取100μL尿樣置于2mL離心管內(nèi)，加入50μL內(nèi)標(biāo)應(yīng)用溶液，再加入850μL乙酸銨溶液，渦旋混勻，經(jīng)微孔濾膜過濾后，待測(cè)。8.3內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制與測(cè)定：用乙酸銨溶液將標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液采用逐級(jí)稀釋方法配成濃度為0.0μg/L～1000.0μg/L的DHBMA標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，并分別加入50μL內(nèi)標(biāo)應(yīng)用溶液。參照儀器操作條件，測(cè)定內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。以測(cè)得的DHBMA信號(hào)值與相應(yīng)的內(nèi)標(biāo)物DHBMA-D7的信號(hào)值的比值為縱坐標(biāo)，以DHBMA的濃度為橫坐標(biāo)，計(jì)算線性回歸方程。8.4樣品測(cè)定包括定性測(cè)定和定量測(cè)定：——定性測(cè)定：按照液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣品中待分析物色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對(duì)誤差應(yīng)在±5%之內(nèi)。如果檢測(cè)樣品的待分析物色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，并且在扣除背景后的質(zhì)譜圖中，待分析物的定性離子和定量離子均出現(xiàn)，且所選的離子相對(duì)豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)工作溶液相比，其允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在待分析物；——定量測(cè)定：用測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的操作條件檢測(cè)樣品和樣品空白溶液，同位素內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量。表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差>50>20~≤50>10~≤208.5質(zhì)量控制：樣品溶液中待分析物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。用接觸者混合尿或加標(biāo)的正常人混合尿作質(zhì)控樣。根據(jù)測(cè)定儀器的穩(wěn)定性，在測(cè)定前后以及每測(cè)定10個(gè)～30個(gè)樣品測(cè)定一次質(zhì)控樣和樣品空白。9計(jì)算按式（1）計(jì)算尿中DHBMA的濃度按式（1）計(jì)算：ρ1=K…………………(1)式中：ρ1——尿中DHBMA的濃度，單位為毫克每克肌酐（mg/gCr）；4GBZ/T330—2024K——尿樣稀釋倍數(shù)；ρ0——測(cè)得的待測(cè)物濃度，單位為微克每升(μg/L）；Cr——尿肌酐濃度，單位為克每升（g/L）。10.1本方法檢出限為3.02μg/L，方法定量下限為10.07μg/L，測(cè)定范圍為3.02μg/L～1000.0μg/L，批內(nèi)精密度為1.1%～4.7%，批間精密度為2.0%～5.5%，加標(biāo)回收率為90%～105%。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)≤10%。10.2本方法可同時(shí)