凝膠色譜分離技術(shù)-凝膠介質(zhì)

凝膠色譜分離技術(shù)

——凝膠過濾介質(zhì)凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)凝膠過濾介質(zhì)的共性1常用的凝膠過濾介質(zhì)2理想的凝膠過濾介質(zhì)具有高物理強(qiáng)度及化學(xué)穩(wěn)定性，能夠耐受高溫高壓和強(qiáng)酸強(qiáng)堿，具有高化學(xué)惰性，內(nèi)孔徑分布范圍窄，珠粒顆粒大小均一度高。

目前，常用的有葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等。凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)凝膠過濾介質(zhì)的共性凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)常用的凝膠過濾介質(zhì)葡聚糖凝膠應(yīng)用最廣泛的一類凝膠，商品名為Sephadex。

它由葡聚糖Dextran與環(huán)氧氯丙烷在堿性條件下交聯(lián)而得。交聯(lián)劑在原料總質(zhì)量中所占的百分?jǐn)?shù)叫交聯(lián)度。交聯(lián)度越大，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密，吸水量越小，吸水量越小，吸水后體積膨脹越少；反之，交聯(lián)度越小，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越疏松，吸收量越多，吸水后體積膨脹越大。凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)常用的凝膠過濾介質(zhì)葡聚糖凝膠的特點(diǎn)1.葡聚糖凝膠Sephadex的親水性很好，在水中極易膨脹。2.Sephadex在高溫下穩(wěn)定，可以煮沸消毒，在100℃下40min對凝膠的結(jié)構(gòu)和性能都沒有明顯的影響。3.Sephadex含有羥基基團(tuán)，呈弱酸性，這使得它有可能與分離物中的一些帶電基團(tuán)（尤其是堿性蛋白）發(fā)生吸附作用。4.在鹽溶液、堿溶液、弱酸溶液以及有機(jī)溶液中比較穩(wěn)定。凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)常用的凝膠過濾介質(zhì)瓊脂糖凝膠

瓊脂糖凝膠來源于一種海藻多糖瓊脂，是一種天然凝膠，不是共價交聯(lián)，是由D-半乳糖和3,6-脫水半乳糖交替以氫鍵交聯(lián)而成。其商品名因生產(chǎn)廠家不同而異，常見的主要有Sepharose（2B-6B）和Bio-gelA。凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)常用的凝膠過濾介質(zhì)瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

瓊脂糖凝膠與葡聚糖不同，孔隙度是以改變瓊脂糖濃度而達(dá)到的。瓊脂糖凝膠的化學(xué)穩(wěn)定性不如葡聚糖凝膠。用瓊脂糖凝膠進(jìn)行分離操作的適宜工作條件是在pH為4～9，溫度0～30℃。瓊脂糖凝膠對硼酸鹽有吸附作用，不能用硼酸緩沖液。瓊脂糖凝膠的排阻極限很大，分離范圍很廣，適合于分離大分子物質(zhì)，但分辨率較低。凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)常用的凝膠過濾介質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠

聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成凝膠，是以丙烯酰胺為單位，由亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)成的，商品名為Bio-GelP。

主要型號有Bio-GelP-2~Bio-GelP-300等10種，后面的數(shù)字基本代表它們的排阻極限的10-3，所以數(shù)字越大，可分離的分子量也就越大。凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)常用的凝膠過濾介質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠的特點(diǎn)聚丙烯酰胺凝膠的分離范圍、吸水率等性能基本近似于葡聚糖凝膠，其穩(wěn)定性比葡聚糖凝膠好，洗脫時不會有凝膠物質(zhì)被洗脫下來，在pH1~10范圍穩(wěn)定。聚丙烯酰胺凝膠非常親水，基本不帶電荷，所以吸附效應(yīng)較小。缺點(diǎn)是不耐酸，遇酸時酰胺鍵會水解成羧基，使凝膠帶有一定的離子交換基團(tuán)。凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)常用的凝膠過濾介質(zhì)疏水性凝膠

常用的疏水凝膠為聚甲基丙烯酸酯凝膠或以二乙烯苯為交聯(lián)劑的聚苯乙烯(如StyrogelBio-Beads-S)凝膠?！癝tyrogel”商品有11種型號，具有大網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，可用于分離分子量1600到40000000的生物大分子，適用于有機(jī)多聚物，分子量測定和脂溶性天然物的分級，凝膠機(jī)械強(qiáng)度好。凝膠色譜分離技術(shù)——凝膠過濾介質(zhì)常用的凝膠過濾介質(zhì)多孔玻璃珠多孔玻璃珠的化學(xué)和物理穩(wěn)定性號，機(jī)械強(qiáng)