五虎活血貼膏的制備和質(zhì)量評價

五虎活血貼膏的制備和質(zhì)量評價【摘要】目的：以成方制劑五虎散為主要功效成分，制備一款活血化瘀，消腫止痛貼膏，并對其進行評價。方法：通過黏力和感官評價篩選基質(zhì)配方中骨架材料、黏合劑、交聯(lián)調(diào)節(jié)劑的種類；通過單因素試驗和正交試驗確定骨架材料、黏合劑、交聯(lián)劑和交聯(lián)調(diào)節(jié)劑用量；通過黏性測定感官評價確定基質(zhì)的添加順序和最大載藥量；通過雞胚絨毛尿囊膜試驗對貼膏進行刺激性評價。通過比色法測定貼膏中總黃酮含量；結(jié)果：得到的基質(zhì)配方中骨架材料確定為聚丙烯酸鈉NP-700，黏合劑為卡波姆980，交聯(lián)調(diào)節(jié)劑為檸檬酸，保濕劑為甘油；烘干前膏體總重為44.07g，其中聚丙烯酸鈉3.50g，卡波姆0.22g，溶脹于22g去離子水中，甘羥鋁0.25g，檸檬酸0.1g，溶于1g去離子水中，甘油16g，載藥量1g；總黃酮含量1.5840mg/g。結(jié)論：制得的五虎活血貼膏具有較好的黏性和成型性，安全無刺激、穩(wěn)定性好?！娟P(guān)鍵詞】五虎散；貼膏；正交試驗；總黃酮；質(zhì)量評價

PreparationandQualityEvaluationofWuhuHuoxuePlaster[Abstract]Objective:Toprepareablood-activatingandstasis-resolving,detumescenceandpain-relievingplasterwithWuhuPowderasthemainfunctionalcomponent,andtoevaluateit.Methods:Thetypesofskeletonmaterials,adhesivesandcrosslinkingregulatorsinthematrixformulaweredeterminedbysinglefactortest.Theamountofskeletonmaterial,adhesive,crosslinkingagentandcrosslinkingregulatorwasdeterminedbysinglefactorexperimentandorthogonalexperiment.Theadditionorderandmaximumdrugloadingofthematrixweredeterminedbysensoryevaluationofviscositydetermination.Theirritationofthepastewasevaluatedbychickembryochorioallantoicmembranetest.Thecontentoftotalflavonoidsinthepastewasdeterminedbycolorimetry;Results:Inthematrixformula,theskeletonmaterialwasdeterminedtobeNP-700,thebinderwascarbomer980,thecrosslinkingregulatorwascitricacid,andthemoisturizerwasglycerin.Thetotalweightofthepastebeforedryingwas44.07g,ofwhichNP-7003.50g,carbomer0.22g,swellingin22gdeionizedwater,aluminumglycinate0.25g,citricacid0.1g,dissolvingin1gdeionizedwater,glycerol16g,drugloading1g.Thecontentoftotalflavonoidswas1.5840mg/g.Conclusion:ThepreparedWuhuHuoxuePlasterhasgoodviscosityandformability,safeandnon-irritating,andgoodstability.[Keywords]WuhusanpasteOrthogonaltestTotalflavonoidsQualityevaluatio目錄TOC\o"1-3"\h\u1前言 前言1.1軟組織損傷現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為急性軟組織損傷為外力對機體的直接和間接影響，引起皮膚，皮下結(jié)締組織，關(guān)節(jié)爽，筋膜血管和周圍神經(jīng)及其他軟組織的損害。引起局部炎癥反應(yīng)導(dǎo)致局部出現(xiàn)紅腫熱痛反應(yīng)。軟組織損傷中醫(yī)理論辨證屬淤癥，多由局部受到外傷而引起，局部挫傷可使皮膚，皮下組織與肌肉破裂，炎癥與瘢痕痊愈，進而引起肢體疼痛與功能障礙，臨床上以局部腫脹和疼痛為主。調(diào)查顯示軟組織損傷高發(fā)，在體育院校，運動員，一般軍事訓(xùn)練和其他人群尤為多見?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療軟組織損傷以對癥處理為主，其目的在于限制內(nèi)部血腫，緩解疼痛，然后輔以抗炎治療。但中醫(yī)治療手段較重視，早期行氣活血，消腫止痛，中期緩解疼痛，舒筋活絡(luò)，晚期則以補益氣血，培肝補腎。而本文所研究的五虎活血貼膏則是以活血祛瘀、消腫止痛為主。1.2五虎散主要成分紅花為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL的干燥花始載于《開寶本草)性溫，味辛，歸心、肝經(jīng)REF_Ref25271\w\h[1]。文獻報道紅花中含有醇類、木脂素類、有機酸類、生物堿類、黃酮類及快類等諸多化學(xué)成分REF_Ref25440\w\h[2]；當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv)Diels的干燥根，始載于《農(nóng)本草經(jīng)》，性溫，味甘、辛，歸肝、心、脾經(jīng)REF_Ref25538\w\h[3]。主要含有黃酮類、氨基酸、揮發(fā)油、有機酸、多糖類等[4,5]；防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikoviadivaricata(Turcz)Schischk.的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，性微溫，味辛、甘，歸膀胱、肝、脾經(jīng)REF_Ref25659\w\h[6]。防風(fēng)中所含的化學(xué)成分較多，相關(guān)學(xué)者從防風(fēng)中分離出包括防風(fēng)色酮醇.麻素昔、香豆素類、揮發(fā)油類和多糖等100多種化合物REF_Ref25692\w\h[7]；白芷為傘形科植物白芷Angelicadahurica(Fisch.exHofm.)Benth.etHookf.或杭白Angelicadahurica(Fisch.exHoffm.)Benth.etHookfvarformosana(Boiss.)ShanetYuan的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，性溫，味辛，歸胃、大腸、肺經(jīng)REF_Ref25734\w\h[8]。白芷的化學(xué)成分有香豆素類、揮發(fā)油類及生物堿、微量元素等；天南星ArisaemaRhizoma為天南星科天南星屬植物天南星Arisaemaerubescens(Wall.Schott)、異葉天南星A.heterophyllumB1.或東北天南星A.amurenseMaxim的干燥塊莖，其味苦、辛，性溫，歸肺、肝、脾經(jīng)。天南星的化學(xué)成分有生物堿類、黃酮類、苯丙素、木脂素及苯環(huán)衍生物、甾體和萜類、苷類和酯類等[9-11]。1.3五虎散研究現(xiàn)狀五虎散由以上五種中藥材組成，是一種具有活血散瘀、消腫止痛等功效的中藥，用于跌打損傷、瘀血腫痛的治療REF_Ref25881\w\h[12]。臨床常用以治療外傷性淤血腫痛，以及風(fēng)濕性肢體疼痛等癥，效果良好REF_Ref25917\w\h[13]。楊嘉等人通過采用凝血篩選實驗，使用人體血漿對五虎散進行實驗研究，發(fā)現(xiàn)其有明顯的抗凝作用REF_Ref25976\w\h[14]。活血化瘀藥具有抗凝作用，抗凝作用是活血化淤藥取得療效的可能途徑之一。牟天REF_Ref26009\w\h[15]等人通過臨床研究用五虎散外敷加以宣痹達經(jīng)湯內(nèi)服達到治療內(nèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用；何康樂REF_Ref26038\w\h[16]等人研究發(fā)現(xiàn)五虎散外貼對肩周炎肩關(guān)節(jié)活動功能改善的作用；五虎散在民間應(yīng)用頗多，在臨床實驗中也得到良好的驗證，其中包括呂中REF_Ref26071\w\h[17]所記載的此方治愈很多傷科患者，何康樂REF_Ref26100\w\h[18]治療陳舊踝部損傷153例，毛小華REF_Ref26126\w\h[19]治療急性腰扭傷74例等。目前市場上對五虎散的應(yīng)用主要有九旭的五虎口服液，在臨床上應(yīng)用廣泛，主要用于活血散瘀和消腫止痛，對于皮下軟組織淤血或者跌打損傷引起的疼痛感，都能起到輔助恢復(fù)的作用；同仁堂的五虎散，保留了原劑型，口服或與白酒調(diào)和敷于患處，同用于治療瘀血腫痛，活血化瘀。本課題對五虎散在凝膠貼膏的應(yīng)用作研究，符合現(xiàn)代外用制劑發(fā)展的潮流趨勢。1.4凝膠貼膏研究現(xiàn)狀凝膠膏劑的前身為20世紀(jì)70年代末，日本發(fā)明的泥劑劑型，后經(jīng)廣大科研工作者們研究，在此基礎(chǔ)上逐漸衍生出了凝膠貼膏劑。引入我國后被廣泛使用，2000和2005版《中國藥典》稱其為巴布劑，后在2010版中正式更名為凝膠貼膏劑。與傳統(tǒng)的貼膏不同的是，凝膠貼膏劑主要由基質(zhì)和所載藥物組成，基質(zhì)常用親水性高分子材料，選定基質(zhì)后，再將其與藥物一起煉合，最后涂布于合適材料上制備而REF_Ref26162\w\h[20]。1.5研究目的與意義以紅花、當(dāng)歸、白芷、防風(fēng)、天南星為主要活血作用成分，添加到骨架材料為NP-700、黏合劑為卡波姆980、交聯(lián)劑為甘羥鋁、交聯(lián)調(diào)節(jié)劑為檸檬酸，保濕劑為甘油的基礎(chǔ)配方中，結(jié)合現(xiàn)代凝膠貼膏的便捷性，制備一款黏附力好、穩(wěn)定性強、安全無毒、無刺激性的貼膏劑。符合現(xiàn)代人安全、便捷用藥的需求。1.6研究內(nèi)容與方法通過初黏力，持黏力和感官評價，確定基質(zhì)配方中骨架材料、黏合劑、交聯(lián)調(diào)節(jié)劑的種類；通過單因素試驗考察骨架材料、黏合劑、交聯(lián)劑和交聯(lián)調(diào)節(jié)劑用量范圍；以初黏力，持黏力和感官評價為評分指標(biāo)，通過正交試驗篩選出各類基質(zhì)用量的最佳配比；通過初黏力測定和感官評價考察基質(zhì)的添加順序；通過初黏力、持黏力、膏體透明度、膜殘留度和均勻性考察貼膏最大載藥量；通過通過性狀考察、含膏量、耐寒耐熱試驗、賦形性、黏附力、雞胚絨毛尿囊膜試驗和比色法測定貼膏中總黃酮含量，對五虎活血貼膏進行質(zhì)量評價。

2實驗部分2.1主要試劑與儀器2.1.1實驗試劑表1實驗試劑試劑名稱級別生產(chǎn)廠家紅花安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司當(dāng)歸隴西奇正藥材有限公司防風(fēng)四川新荷花中藥飲片股份公司白芷安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司制天南星四川新荷花中藥飲片股份公司聚丙烯酸鈉NP-700(NP-700)工業(yè)級華南生物科技有限公司黃原膠食品級廣東建達生物科技有限公司西黃芪膠食品級廣東建達生物科技有限公司卡波姆980食品級江蘇鴻詩生物科技有限公司甲基纖維素分析純泰安瑞纖維素有限公司羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）分析純天津市大茂化學(xué)試劑廠聚乙烯醇化妝品級山東優(yōu)索化工科技有限公司酒石酸分析純天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司檸檬酸分析純天津市福晨化學(xué)試劑產(chǎn)甘羥鋁分析純?nèi)A夏生物科技有限公司甘油分析純廣東光華化學(xué)廠有限公司亞硝酸鈉分析純廣州化學(xué)試劑廠硝酸鋁分析純廣州化學(xué)試劑廠氫氧化鈉分析純天津市大茂化學(xué)試劑廠蘆丁分析純上海源葉生物科技有限公司2.1.2實驗儀器表2實驗儀器儀器名稱型號生產(chǎn)廠家紫外可見分光光度計L8上海天美科學(xué)儀器有限公司恒溫水浴鍋HWS26上海一恒科學(xué)儀器有限公司初黏力測試儀HG-810東莞市華國精密儀器有限公司持黏力測試儀HG-820東莞市華國精密儀器有限公司電子分析天平BP211D德國賽多利斯孵化器HHD32S豪華德電器制造源頭廠家2.1貼膏劑的評價指標(biāo)2.1.1初黏力的測定用《中國藥典》(2020版)（四部）通則測定初黏力法。制備好的貼膏于25℃、相對濕度55%條件下放置2h，撕下蓋襯后鋪于與水平面成15度的不銹鋼板中央，膏面朝上，中間留出5cm膏面長度，將鋼球由頂端自由下落。記錄貼膏可以黏住的最大鋼球號。按20號鋼球為滿分，19號鋼球為滿分的19/20，依次類推。2.1.2持黏力的測定用《中國藥典》(2020版)（四部）通則測定初黏力法。制備好的貼膏于25℃、相對濕度55%條件下放置2h，撕下蓋襯后貼于試驗板和加載板的中部，用2kg的壓輥在貼膏上來回滾壓3次，靜置20min后，上端固定于試驗架上，下端懸掛200g砝碼，記錄貼膏脫落的時間。確定最大值1h以上為滿分，其余與之相比（測得值/最大值）×滿分的評分計算。2.2初步處方的確定根據(jù)實驗室現(xiàn)有的基質(zhì)種類，結(jié)合文獻中處方比例，通過實驗室前期預(yù)實驗，確定一個初步處方為：NP-7002.55g為骨架材料，卡波姆0.22g作為增稠劑，甘羥鋁0.2g作為交聯(lián)劑，酒石酸0.14g作為交聯(lián)調(diào)節(jié)劑，甘油16g作為保濕劑，蒸餾水23g。2.3骨架材料種類的篩選選取NP-700、西黃芪膠、西黃芪膠、黃原膠作為骨架材料進行考察，其他按照初步處方制備凝膠貼膏。按初黏力（40分），持黏力（30分）和感官評價（30分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括膜殘留度（15分）、表面光滑度（10分）、基質(zhì)色澤（5分），如表3所示，完成評價并計算評分結(jié)果，篩選骨架材料的種類。表3骨架材料篩選感官評價標(biāo)準(zhǔn)感官指標(biāo)評分細(xì)則膜殘留度反復(fù)揭帖后皮膚上無黏連、膏體無變形（11-15）反復(fù)揭帖皮膚上有少許殘留、膏體輕微變形（6-10）反復(fù)揭帖大量膏體殘留皮膚、膏體脫落（0-5）表面光滑度膏體表面平坦、光滑（7-10）膏體表面有少量凹凸不平（4-6）膏體表面凹凸不平（0-3）基質(zhì)色澤基質(zhì)純白、通透（4-5）基質(zhì)較白、不渾濁（2-3）基質(zhì)發(fā)黃、渾濁（0-1）2.4黏合劑種類的篩選選取卡波姆980、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯醇作為黏合劑進行考察，其他按照初步處方制備凝膠貼膏；按初黏力（40分），持黏力（30分）和感官評價（30分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括膜殘留度（10分）、皮膚追隨性（15分）、均勻性（5分），如表4所示，完成評價并計算評分結(jié)果，篩選黏合劑的種類。表4黏合劑篩選感官評價標(biāo)準(zhǔn)感官指標(biāo)評分細(xì)則膜殘留度反復(fù)揭帖后皮膚上無黏連、膏體無變形（7-10）反復(fù)揭帖皮膚上有少許殘留、膏體輕微變形（4-6）反復(fù)揭帖大量膏體殘留皮膚、膏體脫落（0-3）皮膚追隨性貼膏貼于手腕背部，用力甩不脫落。（11-15）貼膏貼于手腕背部，用力甩易脫落。（6-10）貼膏貼于手腕背部，輕甩易脫落。（0-5）均勻性膏體質(zhì)地均勻、無結(jié)塊顆粒、無氣泡、表面有光澤（4-5）膏體質(zhì)地較均勻，有個別白色結(jié)塊顆粒或氣泡（2-3）膏體質(zhì)地不均勻，有大量結(jié)塊或空洞氣泡，表面凹凸不平（0-1）2.5交聯(lián)調(diào)節(jié)劑種類的篩選選取酒石酸、檸檬酸作為交聯(lián)調(diào)節(jié)劑進行考察，其他按照初步處方制備凝膠貼膏；按初黏力（40分），持黏力（30分）和感官評價（30分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括表面光滑度（5分）、皮膚追隨性（10分）、滲布程度（15分），如表5所示，完成評價并計算評分結(jié)果，篩選黏合劑的種類。表5交聯(lián)調(diào)節(jié)劑篩選感官評價標(biāo)準(zhǔn)感官指標(biāo)評分細(xì)則表面光滑度膏體表面平坦、光滑（4-5）膏體表面有少量凹凸不平（2-3）膏體表面凹凸不平（0-1）皮膚追隨性貼膏貼于手腕背部，用力甩不脫落。（7-10）貼膏貼于手腕背部，用力甩易脫落。（4-6）貼膏貼于手腕背部，輕甩易脫落。（0-3）滲布性完全無滲布（11-15）輕微滲布（6-10）滲布量大（0-5）2.6基質(zhì)添加順序的考察查閱文獻和初步實驗結(jié)果所得，確定基本處方為高分子骨架材料：NP-7002.55g；黏合劑：卡波姆9800.22g；交聯(lián)劑：甘羥鋁0.2g；交聯(lián)調(diào)節(jié)劑：酒石酸0.10g；保濕劑：甘油16g；蒸餾水23g?？ú?80需要充分溶脹于水中，作為A相，而甘羥鋁、NP-700、可以較好得溶解于甘油中，搭配甘油作為B相，酒石酸易溶于水中，作為C相。選取B+A+C，B+C+A，A+B+C的基質(zhì)添加順序進行考察。按初黏力（40分）、感官評價（60分）作為評價指標(biāo)，對不同基質(zhì)添加順序制備的貼膏進行評價，擇優(yōu)確定基質(zhì)添加順序。2.7單因素試驗確定基質(zhì)用量范圍2.7.1NP-700用量考察準(zhǔn)確稱取0.65g、1.60g、2.55g、3.50g的NP-700，其余基質(zhì)用量不變，按照2.6中基本處方和最優(yōu)基質(zhì)添加順序制備凝膠貼膏。按初黏力（15分），持黏力（15分）和感官評價（70分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括均勻性(20分)、膜殘留度（20分）、賦形性（30分），完成評價并計算評分結(jié)果，確定NP-700的用量范圍。均勻性：膏體是否均勻，表面是否光滑，分為表面均勻光滑、有凹凸、凹凸不平嚴(yán)重對應(yīng)20、14、7分。膜殘留度：膏體揭離皮膚時是否無殘留，反復(fù)揭開，黏貼于手腕背部，重復(fù)3次，末次觀察有無殘留，分為無殘留、少量殘留、殘留，對應(yīng)20、14、7分。賦形性：膏體形態(tài)穩(wěn)定，不易變形，用手指觸摸，無膏體黏連至拉絲，分為不變形、有少量黏連和拉絲、大量黏連和拉絲,對應(yīng)30、20、10分。2.7.2卡波姆980用量考察準(zhǔn)確稱取0.10g、0.16g、0.22g、0.28g、0.34g的卡波姆980，其余基質(zhì)用量不變，按照2.6中基本處方和最優(yōu)基質(zhì)添加順序制備凝膠貼膏。按初黏力（15分），持黏力（25分）和感官評價（60分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括均勻性（20分）、皮膚追隨性（25分）、膜殘留度（15分），完成評價并計算評分結(jié)果，確定卡波姆980的用量范圍。均勻性：膏體是否均勻，表面是否光滑，分為表面均勻光滑、有凹凸、凹凸不平嚴(yán)重對應(yīng)20、14、7分。皮膚追隨性：將成型凝膠膏劑貼于手腕背部,用力甩10下不脫落,分為不脫落、不易脫落、易脫落，對應(yīng)25、16、8分。膜殘留度：膏體揭離皮膚時是否無殘留，反復(fù)揭開，黏貼于手腕背部，重復(fù)3次，末次觀察有無殘留，分為無殘留、少量殘留、殘留，對應(yīng)15、10、5分。2.7.3甘羥鋁用量的考察準(zhǔn)確稱取0.10g、0.15g、0.20g、0.25g、0.30g的甘羥鋁，其余基質(zhì)用量不變，按照2.6中基本處方和最優(yōu)基質(zhì)添加順序制備凝膠貼膏。按初黏力（30分），持黏力（25分）和感官評價（45分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括膜殘留度（25分）、均勻性（20分），完成評價并計算評分結(jié)果，確定甘羥鋁的用量范圍。膜殘留度：膏體揭離皮膚時是否無殘留，反復(fù)揭開，黏貼于手腕背部，重復(fù)3次，末次觀察有無殘留，分為無殘留、少量殘留、殘留，對應(yīng)25、16、8分。均勻性：膏體是否均勻，表面是否光滑，分為表面均勻光滑、有凹凸、凹凸不平嚴(yán)重對應(yīng)20、14、7分。2.7.4檸檬酸用量考察準(zhǔn)確稱取0.6g、1g、1.4g、1.8g的檸檬酸，其余基質(zhì)用量不變，按照2.6中基本處方和最優(yōu)基質(zhì)添加順序制備凝膠貼膏。以初黏力和感官評價作為評價指標(biāo)，對不同用量檸檬酸制備的五虎活血貼膏進行評價，確定檸檬酸的用量范圍。2.7.5甘油用量考察準(zhǔn)確稱取10g、13g、16g、19g、22g的甘油，其余基質(zhì)用量不變，按照2.6中基本處方和最優(yōu)基質(zhì)添加順序制備凝膠貼膏。按初黏力（20分），持黏力（15分）和感官評價（30分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括膜殘留度（40分）、均勻性（15分）、表面光澤度（10分），完成評價并計算評分結(jié)果，確定甘油的用量范圍。膜殘留度：膏體揭離皮膚時是否無殘留，反復(fù)揭開，黏貼于手腕背部，重復(fù)3次，末次觀察有無殘留，分為無殘留、少量殘留、殘留，對應(yīng)40、26、13分。均勻性：膏體是否均勻，表面是否光滑，分為表面均勻光滑、有凹凸、凹凸不平嚴(yán)重對應(yīng)15、10、5分。2.8正交試驗優(yōu)化凝膠貼膏的配方結(jié)合單因素試驗結(jié)果，選用甘油（A）、NP-700（B）、甘羥鋁（C）、卡波姆980（D）4種基質(zhì)，每種基質(zhì)均設(shè)置3個水平，見下表6設(shè)計L9（34）正交設(shè)計因素水平表。按初黏力（35分），持黏力（20分）和感官評價（45分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括均勻性（10分）、膜殘留度（10分）、皮膚追隨性（10分）、涂展性（5分）、滲布程度（10分），如表7所示，完成評價并計算評分結(jié)果，篩選出最優(yōu)的凝膠貼膏處方。表6L9（34）正交設(shè)計因素水平表水平因素A甘油/gBNP-700/gC甘羥鋁/gD卡波姆/g1121.60.150.162142.550.20.223163.50.250.28

表7正交優(yōu)化試驗感官評價的評分指標(biāo)感官指標(biāo)評分細(xì)則均勻性膏體質(zhì)地均勻、無結(jié)塊顆粒、無氣泡、表面有光澤（7-10）膏體質(zhì)地較均勻，有個別白色結(jié)塊顆?；驓馀荩?-6）膏體質(zhì)地不均勻，有大量結(jié)塊或空洞氣泡，表面凹凸不平（0-3）膜殘留度反復(fù)揭帖后皮膚上無黏連、膏體無變形（7-10）反復(fù)揭帖皮膚上有少許殘留、膏體輕微變形（4-6）反復(fù)揭帖大量膏體殘留皮膚、膏體脫落（0-3）皮膚追隨性貼膏貼于手腕背部，用力甩不脫落。（7-10）貼膏貼于手腕背部，用力甩易脫落。（4-6）貼膏貼于手腕背部，輕甩易脫落。（0-3）涂展性膏體容易涂展（4-5）膏體易涂展（2-3）膏體不能涂布（0-1）滲布性完全無滲布（7-10）輕微滲布（4-6）滲布量大（0-3）2.9載藥量的選擇根據(jù)最終優(yōu)化的處方，考察不同載藥量時，五虎活血貼膏的性能，以載藥量0.6g、0.8g、1.0g、1.2g、1.4g為考察變量。按初黏力（40分），感官評價（60分）進行評分，感官評價指標(biāo)包括膜殘留度（15分）、膏體透明度（25分）、均勻性（20分），如表8所示，完成評價并計算評分結(jié)果，選擇合適的載藥量。表8載藥量選擇的評分指標(biāo)感官指標(biāo)評分細(xì)則膜殘留度反復(fù)揭帖后皮膚上無黏連、膏體無變形（11-15）反復(fù)揭帖皮膚上有少許殘留、膏體輕微變形（6-10）反復(fù)揭帖大量膏體殘留皮膚、膏體脫落（0-5）膏體透明度膏體透明，不溶物少（17-25）膏體有少量條絮狀不溶物（9-16）膏體有大量顆粒狀、團狀不溶物（0-8）均勻性膏體質(zhì)地均勻、無結(jié)塊顆粒、無氣泡、表面有光澤（14-20）膏體質(zhì)地較均勻，有個別白色結(jié)塊顆粒或氣泡（8-13）膏體質(zhì)地不均勻，有大量結(jié)塊或空洞氣泡，表面凹凸不平（0-7）2.10五虎活血貼膏配方與制備工藝通過篩選確定基質(zhì)配方中骨架材料、黏合劑、交聯(lián)調(diào)節(jié)劑的種類；通過單因素試驗和正交試驗確定骨架材料、黏合劑、交聯(lián)劑和交聯(lián)調(diào)節(jié)劑具體用量；通過黏性測定感官評價確定基質(zhì)的添加順序和最大載藥量；2.11五虎活血貼膏的質(zhì)量評價2.11.1性狀考察在室內(nèi)明亮柔和光線下觀察三個不同批次的五虎活血貼膏，對其膏面外觀均勻性、滲布性、基質(zhì)色澤、氣味等，判斷其質(zhì)量。2.11.2含膏量測定用2020版《中國藥典》含膏量檢查法，取3個不同批次五虎活血貼膏，撕下蓋襯，稱定背襯與膏體總重量，置燒杯中，倒入適量蒸餾水，使之沒過貼膏，于電爐上加熱煮沸，至背襯與膏體分離完全后，將背襯取出，用清水清洗至背襯無殘余膏體，高溫100℃下干燥30min，取出放冷后稱定其質(zhì)量，損失重量為膏重。2.11.3穩(wěn)定性考察（1）耐熱穩(wěn)定性參照2020年版《中國藥典》橡膠貼膏耐熱性檢查法，取3個不同批次五虎活血凝膠貼膏，除去蓋襯，將貼膏置于60℃的溫度下加熱2h,自然冷卻至室溫后，檢查背襯材料是否滲膏體、漏膏現(xiàn)象、膏體表面是否光滑、是否有黏性。（2）耐寒穩(wěn)定性取3個不同批次五虎活血凝膠貼膏，除去蓋襯，將貼膏置于-10℃的冰箱冷凍室中24h,取出恢復(fù)室溫后，將樣品與常溫放置的樣品進行比較，觀察膏體表面是否光滑，是否有黏性。2.11.4賦形性測定取3個不同批次五虎活血凝膠貼膏，除去蓋襯，置37℃、相對濕度60%的恒溫恒濕箱30min，取出，用夾子將供試品固定在一平整鋼板上，鋼板與水平面的傾斜角為60度，放置24h，觀察膏面是否有流淌現(xiàn)象。2.11.5黏附力測定取3個不同批次五虎活血凝膠貼膏，除去蓋襯，按照2.11下初黏力測試方法測定貼膏的黏附力，記錄貼膏可以黏住的最大鋼球號。2.11.6總黃酮含量測定試劑準(zhǔn)備5%亞硝酸鈉溶液：稱取5.0g亞硝酸鈉（NaNO2），去離子水稀釋并定容至100mL容量瓶中。10%硝酸鋁溶液：稱取10.0g硝酸鋁（Al(NO3)3?9H2O），去離子水稀釋并定容至100mL容量瓶中。4%氫氧化鈉試液：稱取4.0g氫氧化鈉（NaOH），去離子水稀釋并定容至100mL容量瓶中。0.2mg/mL蘆丁對照品溶液：稱取20mg蘆丁對照品，70%乙醇稀釋并定容至100mL容量瓶中。蘆丁對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密稱取蘆丁對照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0置25mL容量瓶中，加水至10mL，加入5%亞硝酸鈉溶液1mL，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，得以0.0mL對照品溶液制得的溶液為空?，在波長510nm處測定吸光度值。以對照品濃度為橫坐標(biāo)(mg/mL)，吸光度為縱坐標(biāo)(A)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品溶液的測定按2.8項下最優(yōu)處方和工藝制備五虎活血貼膏，精密刮取膏體10g，置于錐形瓶中，加50mL70%乙醇，超聲30min，放冷，浸泡至膏體變白色，溶劑顏色不再加深，用45μm濾頭濾過，準(zhǔn)確移取濾液10mL于25mL容量瓶中。加入5%亞硝酸鈉溶液1mL，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加??刻度，搖勻，放置15min。按2.8項下最優(yōu)處方和工藝制備空白凝膠膏劑，其余處理與供試品溶液相同，所得溶液做空白對照，在波長510nm處測定吸光度值。根據(jù)結(jié)果計算樣品中總黃酮的含量。2.11.7雞胚絨毛尿囊膜試驗將7天以內(nèi)的受精雞胚于37.5℃（±0.5℃）、相對濕度55%～70%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9d。用牙科鋸齒彎鑷剝?nèi)馐椅恢玫牡皻ぃ┞栋咨澳?，滴?.3mL0.9%氯化鈉溶液濕潤蛋膜后用鑷子小心撕掉內(nèi)膜,保證血管膜不受損。參考SN/T2329-2009《化妝品眼刺激性／腐蝕性的雞胚絨毛尿囊膜試驗》[21]，采用終點評價法，取3g五虎活血貼膏樣品涂布于保鮮膜，覆蓋于CAM膜上，使之與五虎活血貼膏樣品直接接觸。作用３min后，揭開保鮮膜，30S后觀察每種毒性效應(yīng)變化程度，平行6次。以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的氯化鈉溶液作為陰性對照，以0.1mol/L氫氧化鈉溶液作為陽性對照，設(shè)置對照組。根據(jù)（公式1）計算五虎活血貼膏樣品終點評分（ES），根據(jù)（公式2）計算對照組刺激評分（IS）。并根據(jù)表10評價五虎活血貼膏樣品的刺激性，根據(jù)表11評價對照組的刺激性結(jié)果保留小數(shù)點后2位：ES=（公式1）IS=（公式2）式中：secH——CAM出現(xiàn)出血的平均時間（s）secL——CAM出現(xiàn)血管融解的平均時間（s）secC——CAM出現(xiàn)凝血的平均時間（s）表9終點評分法結(jié)果評價刺激評分刺激性分類ES＜12無/輕刺激性12≤ES＜16中度刺激性16≤ES強刺激性/腐蝕性表10刺激評分法結(jié)果評價刺激評分刺激性分類IS＜1無刺激性1≤IS＜5輕刺激性5≤IS＜10中度刺激性10≤IS強刺激性/腐蝕性

3結(jié)果與討論3.1骨架材料種類的篩選結(jié)果骨架材料種類的篩選結(jié)果如表11所示，可以看出NP-700的初黏力、持黏力表現(xiàn)均比黃原膠和西黃芪膠要好，且膜殘留度、表面光滑度和基質(zhì)色澤外觀評分均優(yōu)于黃原膠和西黃芪膠，因此選擇骨架材料為NP-700。表11骨架材料種類篩選結(jié)果骨架材料初黏力持黏力膜殘留度表面光滑度基質(zhì)色澤總分NP-7002210157559黃原膠26065340西黃芪膠1001233283.2黏合劑種類篩選結(jié)果黏合劑種類的篩選結(jié)果如表12所示，卡波姆980、甲基纖維素和CMC-Na的初黏力和持黏力大小相當(dāng)，均優(yōu)于聚乙烯醇，而相比于甲基纖維素和CMC-Na,卡波姆980在膜殘留度、皮膚追隨性和均勻性的評分總最高，因此選用卡波姆980作為黏合劑。表12黏合劑種類篩選結(jié)果黏合劑初黏力持黏力膜殘留度皮膚追隨性均勻性總分卡波姆9802210815459甲基纖維素2210814256CMC-Na2210913458聚乙烯醇184772383.3交聯(lián)調(diào)節(jié)劑種類篩選結(jié)果交聯(lián)調(diào)節(jié)劑種類的篩選結(jié)果如表13所示，作為交聯(lián)調(diào)節(jié)劑，與酒石酸相比，加入檸檬酸的膏體初黏力與持黏力均優(yōu)于酒石酸，但滲布現(xiàn)象稍遜于酒石酸，在表面光滑度與皮膚追隨性上評分均高于酒石酸，綜合選擇檸檬酸作為交聯(lián)調(diào)節(jié)劑。表13交聯(lián)調(diào)節(jié)劑種類篩選結(jié)果交聯(lián)調(diào)節(jié)劑初黏力持黏力表面光滑度皮膚追隨性滲布性得分酒石酸1610391351檸檬酸26304139823.4基質(zhì)添加順序考察結(jié)果交聯(lián)調(diào)節(jié)劑種類的篩選結(jié)果如表14所示，以添加順序為B+A+C、A+B+C制得的貼膏，膏體均勻，較易攪拌和涂布，但B+A+C添加順序制得的貼膏存在少量顆粒，且初黏力表現(xiàn)不如A+B+C添加順序制得的膏體，因此綜合選用A+B+C的添加順序為本實驗其質(zhì)的添加順序。即甘油相和檸檬酸先后加入溶脹好的卡波姆980中。表14基質(zhì)添加順序考察結(jié)果添加順序鋼球大小感官評價B+A+C12號膏體均勻，較易攪拌，較易涂布，少量顆粒，無殘留B+C+A11號膏體不均勻，不易攪拌，難以涂布，少量顆粒，無殘留A+B+C13號膏體均勻，較易攪拌，較易涂布，無顆粒，無殘留3.5單因素試驗確定基質(zhì)用量范圍結(jié)果3.5.1NP-700用量考察結(jié)果NP-700用量考察結(jié)果如表15所示，當(dāng)NP-700的用量少于1.6g時，制得的膏體流動性大，賦形性差，有大量膜殘留，當(dāng)其用量大于3.5g時，制得的膏體表面不均勻且難以涂布，綜合選用1.6g、2.55g、3.5g作為其正交試驗的水平。表15NP-700用量考察結(jié)果NP-700/g初黏力持黏力均勻性膜殘留度賦形性得分0.651101606331.613316812522.55158131623753.5141541825763.5.2卡波姆980用量考察結(jié)果卡波姆980用量考察結(jié)果如表16所示，當(dāng)卡波姆980的用量少于0.28g時，制得的膏體黏力逐漸增大，當(dāng)其用量大于0.28g時，黏性稍有下降，且膏體表面不平整，綜合選用0.16g、0.22g、0.28g作為其正交試驗的水平。表16卡波姆980用量考察結(jié)果卡波姆/g初黏力持黏力均勻性皮膚追隨性膜殘留度總分0.1131517188710.161419171910790.221420162011810.281524121812810.34142571812763.5.3甘羥鋁用量考察結(jié)果甘羥鋁用量考察結(jié)果如表17所示，在一定范圍內(nèi)，隨著甘羥鋁用量增多，膏體的成型性和黏性增強，但隨著用量增加的同時，均勻性也在下降，膏面表面不平整，綜合選用0.15g、0.20g、0.25g作為其正交試驗的水平。表17甘羥鋁用量考察結(jié)果甘羥鋁/g初黏力持黏力膜殘留度均勻性總分0.12331218550.152471516620.224252015840.252622312620.3024212310783.5.4檸檬酸用量考察結(jié)果檸檬酸用量考察結(jié)果表明，用量為0.6g、1g、1.4g、1.8g時，外觀無明顯區(qū)別，可黏住的鋼球大小分別為11號、13號、13號、12號。1g和1.4g用量時黏性表現(xiàn)最佳，考慮到降低損耗，綜合選用1g為配方的具體用量。3.5.5甘油用量考察結(jié)果甘羥鋁用量考察結(jié)果如表18所示，隨著甘油用量增加，膏體表面越光滑，色澤越好，初黏力增強；同時，膏體內(nèi)聚力變差，持黏力有所下降，膜殘留度增加。因此，綜合選用12g、14g、16g作為其正交試驗的水平。表18甘油用量考察結(jié)果甘油/g初黏力持黏力膜殘留度均勻性表面光澤度得分1011153855741313123497751617924108681918216119562219158129493.6正交試驗優(yōu)化凝膠貼膏的配方結(jié)果4個因素的極差R值結(jié)果為：RB>RA>RC>RD，如表19-20所示，因此4個因素對貼膏的影響程度為：B>A>C>D，即4種基質(zhì)材料的影響程度為：NP-700>甘油>甘羥鋁>卡波姆980。根據(jù)Ki值結(jié)果，可得出較優(yōu)組合為A3B3C3D2，即甘油16g、NP-7003.50g、甘羥鋁0.25g、卡波姆9800.22g。表19正交試驗優(yōu)化凝膠貼膏的配方結(jié)果編號初黏力持黏力均勻性膜殘留性皮膚追隨性涂展性滲布性得分126103294256223156934107032317593410714257464435352613773456562115693456373354384057832119374470932138974679表20L9（34）正交設(shè)計試驗結(jié)果編號ABCD總分111115621232703132371421335352221656231263731225783213709333179K165.6755.3363.0066.67K260.3368.3364.3367.67K368.6771.0067.3364.67R8.3315.674.333.00驗證試驗：綜合正交試驗結(jié)果，確定最優(yōu)處方為甘油16g、NP-7003.50g、甘羥鋁0.25g、卡波姆9800.22g。檸檬酸0.1g，按照2.6中最優(yōu)基質(zhì)添加順序制備3批五虎活血貼膏，進行驗證試驗。結(jié)果如表21，所制得凝膠膏劑黏性好，外觀均勻,皮膚追隨性好,無膜殘留。表21正交設(shè)計驗證結(jié)果編號初黏力持黏力均勻性膜殘留度皮膚追隨性涂展性滲布性總分1331599746832331589746823331799746853.7載藥量考察結(jié)果載藥量考察結(jié)果如表22所示，隨著載藥量增大，貼膏的外觀性能下降，不利于凝貼膏的成型，但藥粉用量過少達不到治療效果，由最大載藥量原則，綜合確定凝膠貼膏載藥量為1.0g。表22載藥量考察結(jié)果藥粉/g初黏力膜殘留度膏體透明度均勻性得分0.63872218850.84082016841.04091814811.2409169741.4389137673.8五虎活血貼膏的配方與制備工藝得到凝膠貼膏的配方如表23所示。表23五虎活血貼膏的配方表相別序號原料名稱重量/gA相1卡波姆9800.222去離子水22B相3NP-7002.554甘羥鋁0.25五虎藥粉1.06甘油14C相7檸檬酸0.18離子水去1制備工藝如下：將A相中卡波姆撒在去離子水中，靜置一晚，至其充分溶脹；將C相中檸檬酸溶解于去離子水中；稱取適量甘油，提前60℃水浴1min，加入NP-700和甘羥鋁，用玻棒攪拌均勻；保持水浴溫度，往B相中加入藥粉，用玻棒攪拌均勻；B相、C相先后緩慢倒入A相，用玻棒攪拌，至基質(zhì)混勻，玻棒攪拌出現(xiàn)阻力感；趁熱涂布于無紡布上，烘箱50℃下烘6h，即得。3.9五虎活血貼膏的評價結(jié)果3.9.1性狀考察在室內(nèi)明亮柔和光線下觀察五虎活血貼膏，色棕黃，氣芳香，膏面平整光滑，無結(jié)塊，存在少量不溶紅色條狀物，無漏膏，黏性好，可反復(fù)揭貼。3.9.2含膏量測定結(jié)果五虎活血貼膏含膏量結(jié)果如表24所示，平均每貼膏劑含膏量為3.7236g表24含膏量計算結(jié)果批號貼膏總重量/g背襯重量/g膏體重量/g平均含膏量/g20230405-14.82500.86783.95723.723620230405-24.37040.84993.520520230405-34.55410.86103.69313.9.3穩(wěn)定性考察結(jié)果（1）耐熱穩(wěn)定性3個批號五虎活血貼膏通過高溫測試恢復(fù)室溫后，均未發(fā)生明顯變化，貼膏未出現(xiàn)滲膏、漏膏現(xiàn)象，膏體表面光滑，手指觸摸有較強黏性，表明五虎活血貼膏的耐熱穩(wěn)定性良好。（2）耐寒穩(wěn)定性3個批號五虎活血貼膏通過高溫測試恢復(fù)室溫后，均未發(fā)生明顯變化，貼膏未出現(xiàn)滲膏、漏膏現(xiàn)象，膏體表面光滑，手指觸摸有較強黏性，表明五虎活血貼膏的耐熱穩(wěn)定性良好。3.9.4賦形性測定結(jié)果3個批號五虎活血貼膏通過傾斜角60度，放置24h后，均未發(fā)生明顯變化，貼膏膏面無流淌現(xiàn)象，表明五虎活血貼膏賦形性良好。3.9.5黏附性測定結(jié)果測得3個批號的五虎活血貼膏能黏住的鋼球大小分別為19號、18號、18號鋼球。因此暫定本品黏附性為能黏住18號鋼球。3.9.6總黃酮含量測定結(jié)果蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線測量結(jié)果如表25所示，蘆丁對照品濃度（c）為橫坐標(biāo)（x），吸光度（A）為縱坐標(biāo)(y)，線性回歸得y=1.1267x+0.0057，R2=0.9955，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，根據(jù)公式3算得三個批次五虎活血貼膏中總黃酮含量分別為為:1.4909mg/g、1.6146mg/g、1.6465mg/g。平均總黃酮含量為1.5840mg/g。（公式3）式中：ABS——溶液吸光度（A）M——取膏量（g）表25不同濃度的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液在510nm處吸光度值樣品濃度（mg/mL）00.040.080.160.240.32吸光度（A）00.04720.09450.18720.28960.3562表26總黃酮含量計算結(jié)果批號取膏量/g吸光度（A）總黃酮含量(mg/g)總黃酮平均含量(mg/g)20230405-19.84320.13801.49091.584020230405-29.58460.14521.614620230405-310.34100.15921.6465圖1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線3.9.7雞胚絨毛尿囊膜試驗結(jié)果6組五虎活血貼膏樣品均無出血、凝血和血管融解的情況出現(xiàn)，ES=0，表現(xiàn)為無刺激性；0.9%氯化鈉溶液作用于雞胚絨毛尿囊膜5min內(nèi)均未出現(xiàn)出血、血管融解、凝血現(xiàn)象，IS為0；0.1mol/L的氫氧化鈉溶液作用于雞胚絨毛尿囊膜后10s時開始發(fā)生出血，38s時出現(xiàn)血管融解，96s時發(fā)生凝血現(xiàn)象，根據(jù)（公式2），算得IS為17.14，雞胚絨毛尿囊膜血管的刺激性結(jié)果如表27所示。結(jié)果表明五虎活血貼膏刺激性小，較為溫和。表27五虎活血貼膏對CAM刺激性結(jié)果編號出血情況凝血情況血管融解情況ES刺激性分類10000無刺激性2000無刺激性3000無刺激性4000無刺激性5000無刺激性6000無刺激性陰性對照0000無刺激性陽性對照10389617.14強刺激性/腐蝕性

4結(jié)論本論文主要是以藥典中記載的，具有活血散瘀、消腫止痛功效的成方制劑五虎散為功效成分，結(jié)合凝膠貼膏便捷性，設(shè)計一款具有活血散瘀、消腫止痛功效、黏附力好、穩(wěn)定性強、安全無毒、無刺激性的貼膏劑。通過一系列實驗得出以下結(jié)論：按初黏力、持黏力、膜殘留度、