楊樹PtrMYB092和PtrMYB152轉(zhuǎn)錄因子在木質(zhì)素合成中的功能研究的開題報告

楊樹PtrMYB092和PtrMYB152轉(zhuǎn)錄因子在木質(zhì)素合成中的功能研究的開題報告一、研究背景和意義木質(zhì)素是維持植物細胞壁結(jié)構(gòu)和抵抗病害的重要組成部分，也是紙漿、木材加工和生物質(zhì)能源生產(chǎn)中的重要原料。因此，對木質(zhì)素合成途徑的調(diào)控機制進行深入研究，有極其重要的理論和應(yīng)用價值。近年來的研究表明，轉(zhuǎn)錄因子在木質(zhì)素合成途徑中扮演了重要作用。楊樹是一種快速生長、具有高產(chǎn)木質(zhì)素的經(jīng)濟作物，因此研究楊樹中轉(zhuǎn)錄因子在木質(zhì)素合成途徑中的功能，對于探索木質(zhì)素合成途徑的調(diào)控機制，進而提高產(chǎn)量和質(zhì)量具有極其重要的意義。二、研究目的和內(nèi)容本研究旨在探究楊樹中PtrMYB092和PtrMYB152轉(zhuǎn)錄因子在木質(zhì)素合成中的功能，并深入研究其調(diào)控機制。具體內(nèi)容包括：（1）通過基因克隆技術(shù)，獲取PtrMYB092和PtrMYB152編碼序列，并進行生物信息學分析。（2）采用定量PCR技術(shù)，分析PtrMYB092和PtrMYB152在楊樹不同組織中的表達模式。（3）利用原位雜交技術(shù)觀察PtrMYB092和PtrMYB152在楊樹幼苗中的表達模式，并探究其在木質(zhì)素合成途徑中的作用。（4）利用快速酵母雙雜交技術(shù)，篩選出與PtrMYB092和PtrMYB152相互作用的蛋白質(zhì)。（5）采用熒光素酶報告系統(tǒng)研究PtrMYB092和PtrMYB152的功能機制。三、研究方法（1）基因克隆技術(shù)通過RT-PCR技術(shù)從楊樹RNA中擴增出PtrMYB092和PtrMYB152基因，將其克隆到植物表達載體中進行基因工程操作。（2）定量PCR技術(shù)利用實時熒光定量PCR技術(shù)對楊樹不同組織中PtrMYB092和PtrMYB152的mRNA進行定量分析。（3）原位雜交技術(shù)使用亞硝酸鹽還原法和硼氫化鈉還原法進行組織取樣和固定，采用小麥胚乳雜交技術(shù)進行原位雜交實驗。（4）快速酵母雙雜交技術(shù)利用酵母雙雜交體系篩選與PtrMYB092和PtrMYB152相互作用的蛋白質(zhì)。（5）熒光素酶報告系統(tǒng)將PtrMYB092和PtrMYB152蛋白與所研究的木質(zhì)素合成途徑相關(guān)基因的啟動子進行克隆，將其構(gòu)建到熒光素酶報告系統(tǒng)中進行功能研究。四、研究方案（1）獲取PtrMYB092和PtrMYB152基因的編碼序列，進行生物信息學分析。（2）采集楊樹不同組織，分離RNA，利用RT-PCR技術(shù)擴增PtrMYB092和PtrMYB152基因mRNA，利用定量PCR技術(shù)對其表達模式進行分析。（3）利用原位雜交技術(shù)觀察PtrMYB092和PtrMYB152在楊樹幼苗中的表達模式，并探究其在木質(zhì)素合成途徑中的作用。（4）利用快速酵母雙雜交技術(shù)篩選與PtrMYB092和PtrMYB152相互作用的蛋白質(zhì)。（5）將PtrMYB092和PtrMYB152蛋白與所研究的木質(zhì)素合成途徑相關(guān)基因的啟動子進行克隆，將其構(gòu)建到熒光素酶報告系統(tǒng)中進行功能研究。五、研究預(yù)期結(jié)果通過對PtrMYB092和PtrMYB152在楊樹中的功能研究，探究了轉(zhuǎn)錄因子在木質(zhì)素合成中的調(diào)控作用