梅毒實驗室檢測技術(shù)

關(guān)于梅毒實驗室檢測技術(shù)2梅毒控制規(guī)劃中期評估-

梅毒實驗室檢測知識調(diào)查（1）1.一旦感染梅毒，梅毒螺旋體特異性抗體通常會終身陽性2.RPR/TRUST只能用于梅毒初篩3.二期梅毒時，TPPA和RPR兩種血清學(xué)試驗100％陽性4.接受抗梅治療的嬰兒，隨訪18個月后TPPA（+）/RPR（-）可確診為胎傳梅毒5.常規(guī)梅毒血清學(xué)檢測的是IgG抗體，不能檢測到IgM抗體6.TPPA（-）/RPR（+）結(jié)果一般可排除梅毒螺旋體感染7.TPPA滴度檢測是臨床治療梅毒效果評價的重要參考指標(biāo)

第2頁,共51頁，2024年2月25日，星期天3梅毒控制規(guī)劃中期評估-

梅毒實驗室檢測知識調(diào)查（2）8.新生兒血清TPPA（+）/RPR（+），可診斷為先天梅毒9.梅毒初篩可采用任何一種血清學(xué)檢測方法10.RPR和TRUST的方法原理相同，所以兩種方法的定量試驗滴度結(jié)果一定一致11.TPPA（+）/RPR（-）可能是極早期梅毒12.ELISA法檢測陽性，TPPA復(fù)檢陰性，最終結(jié)果報告：TPPA試驗陰性，解釋ELISA法為假陽性。

第3頁,共51頁，2024年2月25日，星期天實驗室檢測的目的？早期發(fā)現(xiàn)臨床診斷有效治療精準(zhǔn)醫(yī)療疫情報告檢測方法檢測策略結(jié)果的解讀和合理應(yīng)用醫(yī)生、檢驗、防保第4頁,共51頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果如何解讀和合理應(yīng)用第5頁,共51頁，2024年2月25日，星期天如何發(fā)揮實驗室檢測作用實驗室檢測實驗室診斷艾滋病檢測策略最新進(jìn)展（2015）

確證（診）試驗→補充試驗陽、陰性→有、無反應(yīng)

增加了各種檢測策略

強調(diào)臨床診斷

≠第6頁,共51頁，2024年2月25日，星期天梅毒是一個可以臨床治愈的傳染病

病例診斷依據(jù)病史癥狀實驗室檢查實驗室檢查結(jié)果對梅毒診斷及判愈有決定性意義第7頁,共51頁，2024年2月25日，星期天如和達(dá)到實驗室檢測的基本要求檢測方法檢測策略質(zhì)量保證管理層面（行政、疾控）生產(chǎn)廠家醫(yī)療機構(gòu)（醫(yī)生、檢驗、防保）第8頁,共51頁，2024年2月25日，星期天常用梅毒實驗室檢測方法檢測方法病原學(xué)檢測梅毒螺旋體血清學(xué)試驗非梅毒螺旋體血清學(xué)組織病理學(xué)檢測白細(xì)胞檢測蛋白檢測第9頁,共51頁，2024年2月25日，星期天未經(jīng)治療的梅毒病人的自然病程感染梅毒螺旋體一期梅毒二期梅毒隱形梅毒三期梅毒梅毒樹膠腫脊髓癆,麻痹性癡呆心血管梅毒72%30%終生隱形梅毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染28%感染梅毒螺旋體2-6周1-3月1-3月2-50年第10頁,共51頁，2024年2月25日，星期天病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進(jìn)行檢測。方法：（1）暗視顯微鏡檢查

（2）鍍銀染色法

（3）核酸檢測（血液標(biāo)本？）注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒有獲得成功，僅能通過接種兔睪丸等部位進(jìn)行有限增殖。

第11頁,共51頁，2024年2月25日，星期天病原學(xué)檢查的臨床意義螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。第12頁,共51頁，2024年2月25日，星期天梅毒血清學(xué)檢測方法(1)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗（非特異性梅毒抗體）(2)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗

（特異性梅毒抗體）兩類方法。問題：

為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢測方法？第13頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉(zhuǎn)為陰性。中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T491—2016:梅毒非特異性抗體檢測操作指南２０１６-０７-０７發(fā)布２０１６-１２-１５實施第14頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理方法包括：（1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)

（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）（3）性病研究實驗室試驗(VDRL)等。基本成分是心磷脂卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似第15頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理示意圖第16頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速？轉(zhuǎn)幅？2、定性試驗加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中，

并均勻地涂布在整個圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23℃-29℃）

，亮光下觀察結(jié)果？滴/mL，1滴=？ul√×第17頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)幅2、定性試驗加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中，

并均勻地涂布在整個圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23℃-29℃）

，亮光下觀察結(jié)果60滴/mL，1滴=17ul100r/min約18mm第18頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點3、定量試驗稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。下同定性試驗。？1:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512問題：定量試驗原倍血清滴度是多少？問題：定量試驗血清稀釋需要使用試管嗎？第19頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點3、定量試驗稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。下同定性試驗。1:11:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512第20頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。可作為梅毒篩查試驗。因治療后血清滴度可下降并陰性，故（1）可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征；（2）結(jié)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗鑒別梅毒現(xiàn)癥感染和既往感染VDRL試驗用于神經(jīng)梅毒腦脊液檢測特異性高，檢測陽性可以作為神經(jīng)梅毒確診依據(jù)，但敏感性較低，即檢測陰性不能排除神經(jīng)梅毒。第21頁,共51頁，2024年2月25日，星期天血清固定早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。血清固定：一直保持低滴度，不轉(zhuǎn)陰非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點第22頁,共51頁，2024年2月25日，星期天1:11:21:81:41:16非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點前帶現(xiàn)象第23頁,共51頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點假陽性反應(yīng)技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗即可排除。生物學(xué)假陽性反應(yīng)(一般滴度小于1:8），應(yīng)采用梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗如TPPA等進(jìn)行排除。第24頁,共51頁，2024年2月25日，星期天梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者終身陽性。問題：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗的定量試驗在梅毒診療中有意義嗎？第25頁,共51頁，2024年2月25日，星期天梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)

熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）-IgM、IgG第26頁,共51頁，2024年2月25日，星期天TPPATPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。第27頁,共51頁，2024年2月25日，星期天+明膠顆粒梅毒抗原+抗原致敏顆粒抗原致敏顆粒血液中抗體抗原抗體凝集TPPA試驗原理示意圖第28頁,共51頁，2024年2月25日，星期天294+：粒子光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊3+：粒子光滑覆蓋大部分底2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細(xì)胞環(huán)1+：粒子光滑集聚覆概孔底，周圍有一明顯細(xì)胞環(huán)±：粒子沉集孔底，中央形成一小點–：粒子緊密沉積孔底中央

TPPA試驗結(jié)果判讀敏感性特異性病期一期二期隱性臨床試驗a100100100美國CDC8810010095a:均為RPR陽性標(biāo)本第29頁,共51頁，2024年2月25日，星期天ELISA/

CLIAELISA試驗是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗陽性反應(yīng)。本法可用于大樣本血清檢測?；瘜W(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA化學(xué)發(fā)光法的敏感性？？第30頁,共51頁，2024年2月25日，星期天31梅毒免疫層析快速檢測方法（全血法）第31頁,共51頁，2024年2月25日，星期天梅毒免疫層析快速檢測方法（血清、血漿法）第32頁,共51頁，2024年2月25日，星期天梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗，排除RPR假陽性。不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進(jìn)行診斷。不能作為療效觀察的指標(biāo)。第33頁,共51頁，2024年2月25日，星期天34梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果解釋（梅毒臨床診斷參考依據(jù)）

試驗結(jié)果參考結(jié)果解釋*梅毒螺旋體抗原血清試驗非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性陽性可能為現(xiàn)癥梅毒陰性陽性非梅毒螺旋體血清試驗假陽性陽性陰性臨床治愈的早期梅毒（既往感染者）或極早期梅毒陰性陰性排除梅毒感染或極早期梅毒問題：此結(jié)果解釋適用于先天（胎傳）梅毒嗎？第34頁,共51頁，2024年2月25日，星期天35梅毒IgM抗體（TP-IgM）IgM抗體的產(chǎn)生是感染后的早期體液免疫應(yīng)答反應(yīng)。IgM分子比IgG較大，所以IgM抗體不能通過胎盤屏障。而母親的IgG抗體可以通過胎盤屏障傳給胎兒。因此若在新生兒血中檢測到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據(jù)，而IgM抗體可為先天梅毒的診斷依據(jù)。IgM抗體檢測其特異性較高，但敏感性較低。因此，IgM抗體檢測陰性，不能排除先天梅毒感染。第35頁,共51頁，2024年2月25日，星期天36先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)梅毒暴露嬰兒具有以下條件之一：暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽性梅毒螺旋體IgM抗體陽性*RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍及以上RPR/TRUST檢測隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升滿18月齡后，TPPA檢測陽性第36頁,共51頁，2024年2月25日，星期天37第37頁,共51頁，2024年2月25日，星期天梅毒實驗室檢測策略第38頁,共51頁，2024年2月25日，星期天

梅毒實驗室檢測策略思考39非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗排除試驗假陽性確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染排除治愈的既往感染者確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染？RPR：初篩試驗TPPA：確證試驗第39頁,共51頁，2024年2月25日，星期天40第40頁,共51頁，2024年2月25日，星期天41陽性

梅毒螺旋體血清試驗

（ELISA）

陰性

報告：

ELISA陰性

陽性

RPR定性/定量試驗

陰性

推薦TPPA復(fù)檢

陽性

報告：

ELISA陽性

RPR陽性及滴度

果

陰性

報告：

ELISA陽性

TPPA陽性

RPR陰性

報告：

ELISA陽性

TPPA陰性

RPR陰性

報告：

ELISA陽性

RPR陰性

果

第41頁,共51頁，2024年2月25日，星期天42第42頁,共51頁，2024年2月25日，星期天43陽性

梅毒螺旋體血清試驗

（ELISA）

陰性

報告：

ELISA陰性

陽性

RPR定性/定量試驗

陰性

推薦TPPA復(fù)檢

陽性

報告：

ELISA陽性

RPR陽性及滴度

果

陰性

報告：

ELISA陽性

TPPA陽性

RPR陰性

報告：

ELISA陽性

TPPA陰性

RPR陰性

報告：

ELISA陽性

RPR陰性

果

梅毒篩查最佳策略第43頁,共51頁，2024年2月25日，星期天第44頁,共51頁，2024年2月25日，星期天452015非梅毒螺旋體血清學(xué)試劑評估試劑簡稱

敏感性(%)特異性(%)功效率(%)上海榮盛TRUST99.03100.0099.67上海科華RPR100.0098.5199.01北京萬泰TRUST98.0699.5099.01廈門英科TRUST96.12100.0098.68北京金豪TRUST98.0698.5198.36第45頁,共51頁，2024年2月25日，星期天46方法

試劑簡稱

敏感性(%)特異性(%)功效率(%)

萬泰98.28100.0099.34科華97.41100.0099.01三維97.41100.0099.01麗珠97.41100.0099.01ELISA現(xiàn)代97.41100.0099.01金豪97.41100.0099.01

英科98.2898.9498.68科衛(wèi)96.55100.0098.68華大95.69100.0098.36

發(fā)光

科美97.4199.4798.682015梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試劑評估第46頁,共51頁，2024年2月25日，星期天實驗室生物安全防護(hù)要求一級生物安全防護(hù)水平：適用于第四類病原微生物二級生物安全防護(hù)水平：適用于第三類病原微生物三級生物安全防護(hù)水平：適用于第二類病原微生物四級生物安全防護(hù)水平：適用于第一類病原微生物47一般臨床血標(biāo)本處理是否需要在幾級生物安全實驗室操作?第47頁,共51頁，2024年2月25日，星期天梅毒實