適用于新高考新教材備戰(zhàn)2025屆高考生物一輪總復(fù)習(xí)第10單元生物技術(shù)與工程課時規(guī)范練52基因工程的基本工具與操作程序

課時規(guī)范練52基因工程的基本工具與操作程序必備知識基礎(chǔ)練考點一重組DNA技術(shù)的基本工具1.(2023·廣東汕頭統(tǒng)考)“工欲善其事,必先利其器”,基因工程需用到多種工具。下列關(guān)于基因工程的基本工具的說法,錯誤的是()A.在構(gòu)建基因表達載體時,通常用同種限制酶或能產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶切割載體和含有目的基因的DNA片段B.E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶都能“縫合”黏性末端,恢復(fù)被限制酶切開的磷酸二酯鍵C.基因工程中真正被用作載體的質(zhì)粒,都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進行人工改造的D.基因工程中使用的載體還可以是各種病毒,如可以利用改造后的噬菌體將基因表達載體導(dǎo)入動物受精卵細胞2.下列有關(guān)限制酶和DNA連接酶的敘述,正確的是()A.用限制酶酶切獲得一個外源基因時得到兩個切口,有兩個磷酸二酯鍵被斷開B.限制酶識別序列越短,則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大C.序列—CATG↓—和—G↓GATCC—被限制酶切出的黏性末端堿基數(shù)不同D.T4DNA連接酶和E.coliDNA連接酶都能催化平末端和黏性末端的連接3.(2023·北京海淀模擬)科研人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗病毒蛋白基因C導(dǎo)入番木瓜,培育出轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜,Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)模式如圖所示。下列敘述正確的是()A.農(nóng)桿菌的T-DNA與番木瓜基因發(fā)生重組B.構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶和DNA聚合酶C.含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌具有四環(huán)素抗性D.轉(zhuǎn)基因抗病番木瓜不具有卡那霉素抗性考點二基因工程的基本操作程序4.由于某目的基因酶切后的末端為平末端,載體E只有產(chǎn)生黏性末端的酶切位點,需借助中間載體P將目的基因接入載體E。據(jù)圖分析,下列敘述正確的是()A.通過PCR擴增獲取目的基因是基因工程的核心工作B.為了便于該目的基因接入載體E,可用限制酶EcoRⅤ或SmaⅠ切割載體PC.載體P只能作為中間載體,是因為其沒有表達該目的基因的啟動子與終止子D.若受體細胞表現(xiàn)出抗性基因的相應(yīng)性狀,表明重組載體成功導(dǎo)入受體細胞5.(2023·福建龍巖模擬)為提高紅豆杉細胞培養(yǎng)物中紫杉醇的產(chǎn)量,研究人員構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶基因(Bapt)的超表達載體,并將其導(dǎo)入紅豆杉細胞,具體流程如圖。下列相關(guān)說法不正確的是()A.p1301載體上可能含有增強Bapt基因表達的序列B.超表達載體中應(yīng)含有潮霉素抗性基因作為標記基因C.可使用Bapt基因制成的探針檢測過程⑤是否成功D.工廠化生產(chǎn)紫杉醇需將改造后的紅豆杉細胞培養(yǎng)至愈傷組織6.(2023·浙江嘉興聯(lián)考)MAP30蛋白存在于苦瓜的果實和種子中。實驗表明MAP30蛋白具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒等功能,近年來引起了人們的廣泛關(guān)注。MAP30蛋白基因可作為基因工程中的目的基因,下列敘述錯誤的是()A.可從苦瓜果實或種子中提取RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因B.對PCR擴增后的產(chǎn)物,一般需要通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定C.檢測MAP30蛋白基因是否成功表達,可用抗原—抗體雜交技術(shù)D.直接將MAP30蛋白基因?qū)腭R鈴薯受體細胞,可獲得轉(zhuǎn)基因幼苗7.(2024·廣東茂名統(tǒng)考)在轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的研究過程中,采用了圖示質(zhì)粒。其上有SalⅠ、HindⅢ和BamHⅠ三種限制酶切割位點,同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因,獲得此質(zhì)粒的農(nóng)桿菌表現(xiàn)出對兩種抗生素的抗性。(1)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時,選用和SalⅠ兩種限制酶切割目的基因的兩端及質(zhì)粒,可防止。

(2)用分別含有氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選農(nóng)桿菌時,發(fā)現(xiàn)含有目的基因的農(nóng)桿菌不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長,這說明。

(3)采用農(nóng)桿菌感染煙草細胞是因其體內(nèi)的重組Ti質(zhì)粒上的能將目的基因插入煙草細胞的染色體DNA上。

(4)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草植株,依據(jù)的原理是

。(5)導(dǎo)入抗鹽基因的煙草是否可以表達其遺傳特性,需檢測,除上述分子水平檢測外還需進行鑒定。

考點三實驗:DNA的粗提取與鑒定、DNA片段的擴增及電泳鑒定8.(2023·江蘇蘇州質(zhì)檢)下列以洋蔥為實驗材料進行“DNA的粗提取與鑒定實驗”的敘述,正確的是()A.洋蔥研磨液需要用濾紙過濾,以保證提取的DNA量B.濾液中加入冷酒精后,用玻璃棒攪拌會使DNA的提取量增加C.向含DNA的濾液中加入2mol/L的NaCl溶液有利于去除雜質(zhì)D.用二苯胺試劑鑒定DNA時,需沸水浴加熱冷卻后再觀察顏色變化9.(2023·廣東統(tǒng)考)DNA瓊脂糖凝膠電泳是一種分離、純化或分析PCR擴增后的待檢DNA片段的技術(shù)。下列關(guān)于核酸片段的擴增及電泳鑒定的相關(guān)敘述,正確的是()A.mRNA也是核酸,因此可直接用PCR擴增儀擴增B.PCR反應(yīng)緩沖液中一般要添加ATP,以激活耐高溫的DNA聚合酶C.帶電量相同的情況下,相對分子質(zhì)量比較大的DNA片段距離加樣孔越近D.瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中含指示劑,其可以在紫外燈下被檢測出來10.(2023·河北邢臺聯(lián)考)PCR引物的3'端為結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基,5'端無嚴格限制,可用于添加限制酶切點等序列。下列敘述正確的是()A.PCR第四次循環(huán),消耗了8對引物B.脫氧核苷酸作為擴增的原料會依次連接到5'端C.PCR反應(yīng)體系中需要加入脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶、Ca2+等D.用圖中引物擴增至少四個循環(huán)后才能獲得兩端均添加限制酶切點的目的產(chǎn)物關(guān)鍵能力提升練1.(2021·湖北卷)某實驗利用PCR技術(shù)獲取目的基因,實驗結(jié)果顯示除目的基因條帶(引物與模板完全配對)外,還有2條非特異條帶(引物和模板不完全配對)。為了減少反應(yīng)非特異條帶的產(chǎn)生,以下措施中有效的是()A.增加模板DNA的量B.延長熱變性的時間C.延長延伸的時間D.提高復(fù)性的溫度2.(2024·廣東佛山統(tǒng)考)下圖1表示某DNA片段及限制酶酶切位點,用限制酶XhoⅠ和SalⅠ分別處理該DNA片段后,酶切產(chǎn)物電泳分離的結(jié)果如圖2所示。下列敘述錯誤的是()圖1圖2A.不同的限制酶切割DNA后形成的黏性末端可能相同B.限制酶XhoⅠ與限制酶SalⅠ識別的核苷酸序列不同C.泳道①②分別是限制酶XhoⅠ和限制酶SalⅠ處理得到的產(chǎn)物D.用限制酶XhoⅠ和限制酶SalⅠ同時處理該DNA片段,可得到6種電泳產(chǎn)物3.(2023·廣東一模)研究人員將編碼OsGLO1、EcCAT、EcGCL和TSR四種不同酶的基因分別與葉綠體轉(zhuǎn)運肽(引導(dǎo)合成的蛋白質(zhì)進入葉綠體)基因連接,搭載到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA片段上構(gòu)建出多基因表達載體(部分序列如圖),最終在水稻葉綠體內(nèi)構(gòu)建出一條新的代謝途徑,提高了水稻的產(chǎn)量。下列說法正確的是()A.常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因表達載體插入水稻細胞的染色體DNA上B.可用PCR檢測轉(zhuǎn)基因水稻中是否轉(zhuǎn)錄出四種酶的mRNAC.應(yīng)選用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選成功轉(zhuǎn)化的水稻細胞D.EcCAT、OsGLO1基因在轉(zhuǎn)錄時以DNA的同一條單鏈為模板4.如圖為目的基因結(jié)構(gòu)示意圖及幾種限制酶的酶切位點,下列相關(guān)敘述正確的是()A.圖中所示目的基因可能來源于真核生物,也可能來源于原核生物B.噬菌體可以作為載體將重組DNA導(dǎo)入動物細胞獲得轉(zhuǎn)基因動物C.運用PCR技術(shù)擴增該基因時,形成磷酸二酯鍵所需要的能量可由dNTP提供D.用圖中目的基因和質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒時,只能用SmaⅠ酶切割5.(2024·廣東東莞開學(xué)考試)限制性內(nèi)切核酸酶SalⅠ和XhoⅠ識別序列與切割位點如下圖1。用SalⅠ切割目的基因兩側(cè),用XhoⅠ切割載體質(zhì)粒,再用連接酶處理可形成重組質(zhì)粒。實驗者用兩種酶單獨切割或同時切割普通質(zhì)粒和重組質(zhì)粒,再將產(chǎn)物電泳分離,其結(jié)果如下圖2。下列敘述正確的是()圖1圖2A.SalⅠ切割產(chǎn)生的黏性末端與XhoⅠ切割產(chǎn)生的黏性末端不同B.根據(jù)重組質(zhì)粒的酶切結(jié)果可知,有2個目的基因插入重組質(zhì)粒中C.重組質(zhì)粒上有1個限制酶SalⅠ和1個限制酶XhoⅠ的識別序列D.兩種酶切后產(chǎn)生的2kb產(chǎn)物可作為探針篩選含目的基因的受體細胞6.抗凝血酶是一種天然抗凝血劑,在臨床上被廣泛應(yīng)用。目前科學(xué)家已在豬和羊等動物的乳腺生物反應(yīng)器中表達出了人的抗凝血酶,下圖是構(gòu)建抗凝血酶基因表達載體所用的pBR質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及人抗凝血酶基因所在的DNA片段,回答下列問題。(1)現(xiàn)有以下4種引物,引物A:5'-GGACCCCGGG-3';引物B:5'-CATTTCTAGA-3';引物C:5'-CCTGGGGCCC-3';引物D:5'-GTAAAGATCT-3'。利用PCR擴增獲取抗凝血酶基因,應(yīng)選用引物(填引物名稱),擴增產(chǎn)物可選擇限制酶切割后再利用E.coliDNA連接酶連接到pBR質(zhì)粒上。

(2)所選用的pBR質(zhì)粒上含有啟動子,其作用是,將構(gòu)建的基因表達載體先導(dǎo)入大腸桿菌細胞,然后將大腸桿菌涂布到含新霉素的選擇培養(yǎng)基上,長出了多個大腸桿菌菌落,這些菌落并非都是目的菌株,原因是。

(3)將篩選得到的目的菌株提取質(zhì)粒,再通過方法導(dǎo)入豬或羊的內(nèi),通過培養(yǎng)即可獲得能表達人抗凝血酶的乳腺生物反應(yīng)器。

7.(2024·湖南長沙長郡中學(xué)摸底)R-7是家蠶體內(nèi)的一種小分子非編碼RNA,可與某些mRNA尾端的一段非編碼序列(3'-UTR)結(jié)合,進而影響基因的表達。為研究R-7是否影響家蠶基因B(調(diào)控家蠶眼睛發(fā)育)的表達,科研人員將基因B中對應(yīng)3'-UTR的DNA片段與熒光素酶基因(R-7不影響熒光素酶基因的表達)重組,如圖1所示。將該重組載體導(dǎo)入家蠶胚胎細胞并檢測其表達情況,結(jié)果如圖2所示。請回答下列問題。圖1圖2(1)要想短時間內(nèi)獲得大量目的基因,需要用到的技術(shù)是,該技術(shù)的原理是。

(2)圖1中對應(yīng)3'-UTR的DNA片段應(yīng)插入到位點,原因是。基因工程的核心步驟是。

(3)科研人員從圖②所示的實驗組和對照組細胞中提取蛋白質(zhì),經(jīng)處理檢測后獲得相對熒光值(在適宜條件下,熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應(yīng)并發(fā)出熒光)。實驗組為將重組載體導(dǎo)入含R-7的家蠶胚胎細胞中,對照組1為將含有熒光素酶基因的表達載體(不含對應(yīng)3'-UTR的DNA片段)導(dǎo)入含R-7的家蠶胚胎細胞中,則對照組2應(yīng)為。由結(jié)果推知R-7通過進而抑制基因B的表達。

8.(2021·天津卷)乳酸菌是乳酸的傳統(tǒng)生產(chǎn)菌,但耐酸能力較差,影響產(chǎn)量。釀酒酵母耐酸能力較強,但不產(chǎn)生乳酸。研究者將乳酸菌的乳酸脫氫酶基因(LDH)導(dǎo)入釀酒酵母,獲得能產(chǎn)生乳酸的工程菌株。下圖1為乳酸和乙醇發(fā)酵途徑示意圖,圖2為構(gòu)建表達載體時所需的關(guān)鍵條件。圖1圖2(1)乳酸脫氫酶在轉(zhuǎn)基因釀酒酵母中參與厭氧發(fā)酵的場所應(yīng)為。(2)獲得轉(zhuǎn)基因釀酒酵母菌株的過程如下:①設(shè)計引物擴增乳酸脫氫酶編碼序列。為使擴增出的序列中編碼起始密碼子的序列由原核生物偏好的GTG轉(zhuǎn)變?yōu)檎婧松锲玫腁TG,且能通過雙酶切以正確方向插入質(zhì)粒,需設(shè)計引物1和2。其中引物1的5'端序列應(yīng)考慮和。

②將上述PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒重組后,導(dǎo)入大腸桿菌,篩選、鑒定,擴增重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒上有,所以能在大腸桿菌中擴增。啟動子存在物種特異性,易被本物種的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)識別并啟動轉(zhuǎn)錄,因此重組質(zhì)粒上的乳酸脫氫酶編碼序列(填“能”或“不能”)在大腸桿菌中高效表達。

③提取重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)入不能合成尿嘧啶的釀酒酵母菌株,在的固體培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)基因釀酒酵母,并進行鑒定。

(3)以葡萄糖為碳源,利用該轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進行厭氧發(fā)酵,結(jié)果既產(chǎn)生乳酸,也產(chǎn)生乙醇。若想進一步提高其乳酸產(chǎn)量,下列措施中不合理的是(單選)。

A.進一步優(yōu)化發(fā)酵條件B.使用乳酸菌LDH基因自身的啟動子C.敲除釀酒酵母的丙酮酸脫羥酶基因D.對轉(zhuǎn)基因釀酒酵母進行誘變育種答案：必備知識基礎(chǔ)練1.D解析在構(gòu)建基因表達載體時,通常用同種限制酶或能產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶切割載體和含有目的基因的DNA片段,便于后面連接形成重組載體,A項正確;E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶都能連接黏性末端,此外T4DNA連接酶還可以連接平末端,但連接平末端時的效率比較低,B項正確;在基因工程操作中,真正被用作載體的質(zhì)粒,都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進行過人工改造的,C項正確;基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外,還有噬菌體、動植物病毒等,利用病毒作載體時,將基因表達載體導(dǎo)入動物細胞需要用改造后的動物病毒,D項錯誤。2.B3.A解析構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶和DNA連接酶,B項錯誤;抗病毒蛋白基因C的插入位點位于四環(huán)素抗性基因內(nèi)部,插入抗病毒蛋白基因C后,重組Ti質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因被破壞,含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌不具有四環(huán)素抗性,C項錯誤;轉(zhuǎn)基因抗病番木瓜含有卡那霉素抗性基因,故轉(zhuǎn)基因抗病番木瓜具有卡那霉素抗性,D項錯誤。4.C解析基因工程的核心步驟是構(gòu)建基因表達載體,A項錯誤;由于載體E只有產(chǎn)生黏性末端的酶切位點,要使中間載體P接入載體E,同時防止載體E自身環(huán)化,需要用兩種限制酶分別切割載體E和中間載體P,據(jù)圖可知,中間載體P和載體E均含有XhoⅠ和PstⅠ酶識別序列,故可選用XhoⅠ和PstⅠ酶進行酶切,載體P的這兩種酶識別序列中含有EcoRⅤ識別位點,并且其切割的為平末端,可以用于連接目的基因,SmaⅠ酶雖然也能切割得到平末端,但是其識別位點沒有位于XhoⅠ和PstⅠ酶識別位點之間,故不能選擇其對中間載體P進行切割,B項錯誤;由圖可知,載體P是中間質(zhì)粒,不含有表達該目的基因的啟動子和終止子,C項正確;受體細胞表現(xiàn)出抗性基因的相應(yīng)性狀,可能是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒,也可能只導(dǎo)入了空質(zhì)粒(不含目的基因的質(zhì)粒),D項錯誤。5.C解析根據(jù)題干信息“研究人員構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶基因(Bapt)的超表達載體來提高紫杉醇產(chǎn)量”可知,p1301載體上可能含有增強子序列,作用是促進Bapt基因的表達,A項正確;超表達載體中應(yīng)含有潮霉素抗性基因作為標記基因,在含有潮霉素的培養(yǎng)基上,超表達載體能夠存活,從而起到篩選作用,B項正確;由于紅豆杉細胞中本身存在Bapt基因,無論超表達載體是否成功導(dǎo)入,都能與Bapt基因探針形成雜交分子,因此不能通過Bapt基因探針來檢測步驟⑤是否成功,C項錯誤;工廠化生產(chǎn)紫杉醇屬于細胞產(chǎn)物的獲得,只需要培養(yǎng)到愈傷組織階段,D項正確。6.D解析若要使目的基因在受體細胞中表達,需要構(gòu)建基因表達載體,而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細胞,D項錯誤。7.答案(1)HindⅢ目的基因和質(zhì)粒的自我環(huán)化或反向連接(2)抗四環(huán)素基因被破壞(3)T-DNA(4)植物細胞的全能性(5)抗鹽基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,是否翻譯出蛋白質(zhì)個體水平上的抗鹽解析(1)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時,BamHⅠ會破壞抗鹽基因,可以選用HindⅢ和SalⅠ兩種酶切割目的基因的兩端及質(zhì)粒,雙酶切可以避免目的基因和質(zhì)粒的自我環(huán)化或反向連接。(2)所給的限制酶在質(zhì)粒上的切割位點都位于抗四環(huán)素基因內(nèi)部,如果目的基因插入質(zhì)粒中,得到重組質(zhì)粒,則含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌只含有完整的抗氨芐青霉素基因,不含完整的抗四環(huán)素基因(被目的基因破壞),這種農(nóng)桿菌不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長。(3)農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細胞,并且整合到受體細胞染色體的DNA上,根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點,如果將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上,通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用,就可以把目的基因整合到植物細胞染色體的DNA上。(4)利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草植株,依據(jù)的原理是植物細胞的全能性。(5)基因的表達產(chǎn)物是RNA和蛋白質(zhì),導(dǎo)入抗鹽基因的煙草是否可以表達其遺傳特性,需要檢測抗鹽基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,是否翻譯出蛋白質(zhì),除此之外,還需進行個體水平上的抗鹽鑒定。8.D解析洋蔥研磨液用兩層紗布過濾,以保證提取的DNA量,A項錯誤;DNA在冷酒精中的溶解度很低,蛋白質(zhì)在冷酒精中的溶解度較高,故可以利用DNA不溶于冷酒精的原理,提純DNA,但提取量不變,B項錯誤;向含DNA的濾液中加入0.14mol/L的NaCl溶液有利于去除雜質(zhì),C項錯誤;在沸水浴條件下,DNA遇二苯胺會被染成藍色,用二苯胺試劑鑒定DNA時,需沸水浴加熱冷卻后再觀察顏色變化,D項正確。9.C解析mRNA是核酸,但不能直接用PCR擴增儀擴增,需要先逆轉(zhuǎn)錄為cDNA再用PCR擴增儀擴增,A項錯誤;PCR反應(yīng)緩沖液中一般要添加Mg2+,以激活耐高溫的DNA聚合酶,B項錯誤;PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定,在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān),帶電量相同的情況下,相對分子質(zhì)量比較大的DNA片段移動距離較短,距離加樣孔越近,C項正確;瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中不含指示劑,不能在紫外燈下被檢測出來,凝膠中的DNA分子通過染色,可以在紫外燈下被檢測出來,D項錯誤。10.A解析該DNA是雙鏈,第一次循環(huán)要1對引物,第二次要2對……第四次要8對,即PCR第四次循環(huán),消耗了8對引物,A項正確;進行PCR時,擴增是從引物的3'端延伸,因此脫氧核苷酸作為擴增的原料會依次連接到3'端,B項錯誤;PCR反應(yīng)體系中需要加入脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶和擴增緩沖液(含Mg2+)等物質(zhì),不需要加Ca2+,C項錯誤;根據(jù)半保留復(fù)制的特點可知,PCR前兩輪循環(huán)產(chǎn)生的四個DNA分子的兩條鏈均不等長,第三輪循環(huán)產(chǎn)生的DNA分子存在等長的兩條核苷酸鏈,即用圖中引物擴增至少三個循環(huán)后才能獲得兩端均添加限制酶切點的目的產(chǎn)物,D項錯誤。關(guān)鍵能力提升練1.D解析增加模板DNA的量可以提高反應(yīng)速度,但不能有效減少非特異性條帶,A項不符合題意;延長熱變性的時間和延長延伸的時間會影響變性、延伸過程,但對于延伸中的配對影響不大,故不能有效減少反應(yīng)非特異性條帶的產(chǎn)生,B、C兩項不符合題意。2.C解析不同的限制酶識別的序列不同,但可能會產(chǎn)生相同的黏性末端,A項正確;結(jié)合圖1和圖2可知,限制酶XhoⅠ與限制酶SalⅠ識別的核苷酸序列不同,用限制酶XhoⅠ和限制酶SalⅠ同時處理該DNA片段,該片段共有5個酶切位點,可得到6種電泳產(chǎn)物,泳道①②分別是限制酶SalⅠ和限制酶XhoⅠ處理得到的產(chǎn)物,B、D兩項正確,C項錯誤。3.B解析常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胨炯毎?先將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中,然后導(dǎo)入農(nóng)桿菌中,再通過農(nóng)桿菌侵染水稻細胞,將目的基因插入水稻細胞的染色體DNA上,A項錯誤;可用PCR檢測轉(zhuǎn)基因水稻中是否含有目的基因以及是否轉(zhuǎn)錄出四種酶的mRNA,B項正確;結(jié)合圖示可知,潮霉素抗性基因在T-DNA中,會整合到植物的染色體上,因此用含潮霉素的培養(yǎng)基可以篩選轉(zhuǎn)化成功的水稻細胞,C項錯誤;DNA的兩條鏈反向平行,假設(shè)圖中DNA分子上面一條鏈為5'-端→3'-端方向,RNA聚合酶啟動轉(zhuǎn)錄時只能與模板鏈的3'-端結(jié)合,結(jié)合圖示啟動子的方向可知,EcCAT的模板鏈為下鏈,OsGLO1的模板鏈為上鏈,D項錯誤。4.C解析圖中基因的編碼區(qū)存在外顯子和內(nèi)含子,因此該目的基因來源于真核生物,A項錯誤;噬菌體是DNA病毒,是細菌病毒,不能侵入動物細胞,不能作為載體將重組DNA導(dǎo)入動物細胞獲得轉(zhuǎn)基因動物,B項錯誤;dNTP含有特殊的化學(xué)鍵,在進行PCR擴增該基因時,可以在形成磷酸二酯鍵時提供能量,C項正確;SmaⅠ酶的酶切位點在編碼區(qū),會破壞目的基因,所以不能用SmaⅠ酶切割目的基因,D項錯誤。5.C解析SalⅠ切割產(chǎn)生的黏性末端與XhoⅠ切割產(chǎn)生的黏性末端都是3'-AGCT-5',A項錯誤;普通質(zhì)粒被切割后長度都是5kb,用一種酶切割重組質(zhì)粒得到的結(jié)果都是7kb,用兩種酶切割結(jié)果顯示為5kb和2kb兩個片段,說明有1個目的基因插入重組質(zhì)粒中,B項錯誤;由于用一種酶切割后只有一個片段,用兩種酶切割結(jié)果顯示為兩個片段,說明重組質(zhì)粒上有1個限制酶SalⅠ和1個限制酶XhoⅠ的識別序列,C項正確;兩種酶切后產(chǎn)生的2kb產(chǎn)物只含有目的基因的部分片段,且需要經(jīng)過標記,然后解鏈成為單鏈DNA分子才可以作為探針篩選含目的基因的受體細胞,D項錯誤。6.答案(1)A和DXmaⅠ和BglⅡ(2)RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄導(dǎo)入不含目的基因(空載)的質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在這種培養(yǎng)基上生長(3)顯微注射受精卵解析(1)PCR過程需要兩種引物,能分別與目的基因兩條鏈的3'-端通過堿基互補配對結(jié)合,根據(jù)圖中信息可知,結(jié)合堿基互補配對原則,可以判斷引物A、D可以擴增抗凝血酶基因。E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端,不能連接平末端,因此排除SmaⅠ,未在目的基因兩側(cè)找到NheⅠ的識別序列,因此也不能選用,在目的基因兩側(cè)能找到限制酶XmaⅠ和BglⅡ的識別序列,因此要將擴增產(chǎn)物連接到pBR質(zhì)粒上,需用限制酶XmaⅠ和BglⅡ切割目的基因和質(zhì)粒。(2)啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄。能在含新霉素的培養(yǎng)基上生長的菌株有兩種,一種是導(dǎo)入重組質(zhì)粒的,另一種是導(dǎo)入空載質(zhì)粒的,導(dǎo)入不含目的基因(空載)的質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在這種培養(yǎng)基上生長。(3)動物基因工程的受體細胞通常是受精卵,將目的基因?qū)雱游锸芫殉Ｓ蔑@微注射法。7.答案(1)PCR擴增技術(shù)DNA復(fù)制(2)2目的基因應(yīng)插入啟動子與終止子之間,且不能破壞熒光素酶基因基因表達載體的構(gòu)建(3)將重