劑與核酸藥物

關(guān)于劑與核酸藥物人體免疫及其功能免疫，又稱是免疫性或免疫力，是指機體在識別自我的基礎(chǔ)上，辨別、消滅和排除抗原性異物以維護機體的穩(wěn)定性和生理平衡的過程。對人體主要有以下三大功能

1、防疫功能：免疫能幫助機體消滅與消除入侵之“敵”—病原微生物及其抗原。

2、穩(wěn)定功能：免疫能幫助機體消除新陳代謝中損傷與衰老死亡的細胞，維持機體內(nèi)部的“治安”。

3、監(jiān)控功能：免疫能幫助機體抑制和消滅癌細胞持續(xù)性感染。如有的人患病癥沒用藥而自然痊愈，即是免疫的作用。第2頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫調(diào)節(jié)（Immunoregulation）免疫調(diào)節(jié) 主要是指在免疫應(yīng)答過程中，各種免疫細胞與免疫分子相互促進和抑制，形成正負作用的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，并在基因的控制下，完成免疫系統(tǒng)對抗原的識別和應(yīng)答。第3頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第4頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫調(diào)節(jié)（Immunoregulation）免疫分子的調(diào)節(jié)作用

1抗體封閉抗原作用（結(jié)合抗原表位，阻止識別，抑制體液免疫應(yīng)答）

2免疫復(fù)合物的調(diào)節(jié)作用（免疫復(fù)合物既可促進免疫應(yīng)答，又可抑制免疫應(yīng)答）

3免疫細胞表面調(diào)節(jié)性受體的作用【激活受體（正調(diào)節(jié)），抑制性受體（負調(diào)節(jié)）】免疫細胞的調(diào)節(jié)作用

1T細胞調(diào)節(jié)

2B細胞調(diào)節(jié)

3NK細胞與巨噬細胞調(diào)節(jié)整體水平的調(diào)節(jié)作用

1神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)

2免疫系統(tǒng)對神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響第5頁,共39頁，2024年2月25日，星期天T細胞的調(diào)節(jié)T細胞在免疫調(diào)節(jié)中決定免疫應(yīng)答的類型，協(xié)調(diào)細胞免疫和體液免疫之間的關(guān)系。

Th細胞的調(diào)節(jié)分類：Th0細胞、Th1細胞和Th2細胞

Th0細胞為Th1細胞和Th2細胞的前體細胞；

Th1細胞輔助細胞免疫應(yīng)答；

Th2細胞輔助體液免疫應(yīng)答。第6頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第8頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫調(diào)節(jié)劑對人體免疫系統(tǒng)具有抑制或增強作用的物質(zhì)稱為免疫調(diào)節(jié)劑免疫抑制劑:抑制免疫反應(yīng)（FK－506）免疫增強劑：增強人體的免疫功能（多糖）第10頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫抑制劑的研究作用機理篩選策略重要品種第11頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫抑制劑免疫抑制劑是指能夠抑制免疫反應(yīng)的藥物，它能抑制淋巴細胞增殖、分化和影響淋巴細胞的功能。選擇性免疫抑制劑是指對淋巴細胞有專一性作用，對紅細胞生成幾乎沒有影響，無毒性或毒性極微，不損害宿主對細菌和真菌的感染防御機制。免疫抑制劑應(yīng)用于器官移植中的抗排斥作用和治療自身免疫性疾病如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡、霉菌病、炎性腸病、自身免疫溶血性貧血等。第12頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫抑制劑作用機理第1代：以皮質(zhì)激素、硫唑嘌呤、抗淋巴細胞球蛋白(ALG)為代表，主要作用為溶解免疫活性細胞，阻斷細胞的分化，其特點為非特異性、廣泛的免疫抑制。第2代：以環(huán)孢素A(CsA)和FK506為代表，主要阻斷免疫活性細胞的白細胞介素2(IL-2)的效應(yīng)環(huán)節(jié)，因其以淋巴細胞為主而具有相對特異性。第3代：以單克隆抗體、雷帕霉素、霉酚酸脂為代表，其作用于抗原呈遞和分子間的相互作用，與第2代制劑有協(xié)同作用。第4代：以抗IL-2受體單克隆抗體、FTY20等為代表，主要針對改變cytokine環(huán)境，如抑制TH1，增強TH2。第13頁,共39頁，2024年2月25日，星期天作用機理1

環(huán)孢素和FK-506

通過與胞漿內(nèi)可溶性蛋白質(zhì)親免素受體結(jié)合而發(fā)揮作用的。親免素受體有3個亞型，分別為Cyclophilin,FKBP-12,Pin1,它們都具有旋折酶（PPIase，羥脯氨酸順反異構(gòu)酶）的活性。 其中FK-506與FKBP12結(jié)合，形成藥物受體復(fù)合物，抑制T細胞內(nèi)鈣調(diào)素依賴的磷酸酶（Calcineurin）活性，導(dǎo)致T細胞IL-2基因轉(zhuǎn)錄受抑制，IL-2分泌減少，造成免疫抑制。第14頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第15頁,共39頁，2024年2月25日，星期天作用機理2霉酚酸酯（MPA） 高選擇性、非競爭性、可逆性的次黃嘌呤核苷磷酸脫氫酶（IMPDH）抑制劑，可抑制鳥嘌呤核苷酸的經(jīng)典合成途徑。人體內(nèi)淋巴細胞與其他細胞不同，不能利用嘌呤補救途徑合成嘌呤，因此MPA可以高度選擇性的抑制淋巴細胞活化，抑制機體的細胞免疫和體液免疫功能。同時在淋巴細胞激活過程中，MPA通過減少GTP和GDP巖藻糖、GDP-甘露糖含量抑制淋巴細胞表面粘附分子的糖基化，從而抑制激活的淋巴細胞與上皮細胞或靶細胞粘附而殺傷靶細胞。第16頁,共39頁，2024年2月25日，星期天TCR:Tcellreceptor作用機理第17頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第18頁,共39頁，2024年2月25日，星期天第19頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫抑制劑篩選傳統(tǒng)的篩選方法

MLR混合淋巴細胞反應(yīng)

T細胞抑制活性

NK細胞抑制活性新的篩選方法 抑制Calcireurin活性方法（Dibefurin）

P56酪氨酸蛋白激酶活性方法（Lymphostin） 抑制活化T細胞的核因子的NFAT-68和NFAT-133第20頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫抑制劑篩選含RBP基因的酵母篩選模型 用含有RBP(雷帕霉素結(jié)合蛋白，RapamycinBindingProtein,RBP)基因的啤酒酵母菌RS188N及其變株RS188NΔrbp：：：LEU(RBP基因片段由于被亮氨酸基因嵌入從而阻斷該基因編碼RBP的產(chǎn)生)的篩選模型，凡對RS188N抑菌圈比對RS188NΔrbP：：：LEU的抑菌圈大6mm以上，被認為產(chǎn)生Rapamycin及其結(jié)構(gòu)類似物。第21頁,共39頁，2024年2月25日，星期天抑制Calcireurin活性方法Abbott公司建立了Calcineurin活性分析體系:將小牛Calcineurin和Calmodlin在反應(yīng)緩沖液中混合,以4-甲基傘形基磷酸為底物。加入含底物的緩沖液以起始反應(yīng),快速振搖混勻反應(yīng)體系,37℃培養(yǎng)1小時,加入堿性緩沖液以終止反應(yīng)。在355nm激發(fā)光下測460nm熒光強度。利用這一篩選體系發(fā)現(xiàn)了真菌產(chǎn)物Dibefurin,其抑制Calcineurin活性的IC50為μg/ml;抑制MLR的IC50為2.5μg/ml(BrillGM,1996年)。第22頁,共39頁，2024年2月25日，星期天重要品種In1970，cyclosporinswereisolatedintheSandozLaboratoriesinBaselfromCylindrocarponlucidumBooth(afungusfromaWisconsinsoilsample)andolypocladiuminflatumGams(afungusfromaNorwegiansoilsample).Theirstructureswerereportedin1976.1Itwasfortunatethatthisgrouptestedalloftheirnewcompoundsfornotonlyantibacterialandantifungalactivity,butalsoforantiviral,cytostaticandimmunosuppressiveactivity.ThelattertestslookedforadiminutionofcytotoxicT-cellactivity,andcyclosporinAprovedtohavehighpotencycoupledwithalackofcytotoxicityandthiswasakeydiscovery.環(huán)孢菌素A第23頁,共39頁，2024年2月25日，星期天重要品種

Subsequently,thestructurallyunrelatedpolyketidemetaboliteFK506(3)wasisolatedin1984bytheFujisawaPharmaceuticalCompanywhowereengagedinasystematicscreeningprogrammeforagentswithsimilaractivitytocyclosporin

Streptomycestsukubaensis9996(foundinasoilsamplefromtheTsukubaregionofN.Japan)providedaproductwitharound100timesgreaterimmunosuppressant activitythancyclosporinA.Itsstructurewasfinallyelucidatedin1987anditsubsequentlyenteredclinicalusein1991underthetradenameTacrolimus(Prograf).第24頁,共39頁，2024年2月25日，星期天來氟米特（LEF）又稱雷抑素第25頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫增強劑的研究免疫增強劑根據(jù)其作用原理可分為中樞性免疫增強劑和儲存性免疫增強劑；儲存性免疫增強劑與抗原同時、同部位注射時可以改變抗原分子構(gòu)型或其電荷，從而增強抗原性，或延長抗原的儲存和釋放的時間，由此持續(xù)地刺激機體而增強特異性免疫應(yīng)答；中樞性免疫增強劑能激活一種或多種免疫活性細胞或是通過促進免疫細胞表面標志的表達、加速細胞的成熟與增殖，或是作用于某些淋巴細胞的亞群而間接發(fā)揮作用；常用的免疫增強劑有鋁佐劑、油懸液佐劑、BCG、干擾素、脂多糖、真菌糖肽、某些中草藥等。第26頁,共39頁，2024年2月25日，星期天白細胞介素-2白細胞介素-2是輔助T細胞分泌的淋巴因子，在免疫系統(tǒng)中起著重要的作用，它能促進T細胞，NK細胞，B細胞的分化成熟及激活其生物活性，誘導(dǎo)淋巴因子激活的殺傷細胞活性，還能促進許多淋巴因子如干擾素、腫瘤壞死因子等的合成與釋放以及抗體生成。因此白細胞介素-2能大大增強機體免疫功能，對不少感染性疾病有治療作用，對某些腫瘤的防治有良好的效果。第27頁,共39頁，2024年2月25日，星期天真菌多糖

從各種真菌中提取的真菌多糖組分，常有活化人體巨噬細胞，刺激抗體產(chǎn)生，從而達到提高人體免疫力，增強人體抗病防癌能力的作用。從真菌中提取的多糖，優(yōu)于從動物體內(nèi)血液中提取的免疫球蛋白，具有更大的提高人體免疫力和抗癌的作用。香菇多糖：為一種免疫刺激劑，能增強輔助T細胞的功能，可用于治療慢性肝炎和肝癌；銀耳多糖：能明顯促進特異抗體的形成和腹腔巨噬細胞的吞噬能力，增加外周血液中T淋巴細胞數(shù)量；冬蟲夏草多糖、靈芝多糖等。第28頁,共39頁，2024年2月25日，星期天免疫增強劑發(fā)展趨勢未來的免疫增強劑應(yīng)該有以下特征： 能促進體液免疫和細胞免疫； 能增強弱免疫性抗原的抗原性，而沒有毒副作用； 能以不同途經(jīng)免疫，也能用于不同抗原； 能在免疫抑制個體中發(fā)揮作用； 能應(yīng)用于食用動物不應(yīng)有殘余毒素； 能有效影響免疫反應(yīng)的質(zhì)量；穩(wěn)定、便宜而且容易生產(chǎn)和保存。第29頁,共39頁，2024年2月25日，星期天核酸藥物的研究什么是核酸藥物？ 各種具有不同功能的核酸、核酸類似物、寡聚核糖核苷酸（RNA）和寡聚脫氧核糖核苷酸（DNA），后者主要作用于基因水平，在信息流上游起作用。核酸類藥物：Aptamers，抗基因核酸藥物，核酶，反義核酸和其他核酸類似物等。第30頁,共39頁，2024年2月25日，星期天核酸藥物分類第31頁,共39頁，2024年2月25日，星期天反義核酸反義核酸包括反義ＲＮＡ(ａｎｔｉｓｅｎｓｅＲＮＡ)和反義ＤＮＡ(ａｎｔｉｓｅｎｓｅＤＮＡ)兩種,是指與靶ＲＮＡ(多為ｍＲＮＡ)具有互補序列的ＲＮＡ或ＤＮＡ分子。它通過與靶ＲＮＡ進行堿基配對結(jié)合的方式參與基因表達的調(diào)控。通常把轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生反義ＲＮＡ的基因稱為反義基因(ａｎｔｉｓｃｎｓｅｇｅｎｅ)或反義ＤＮＡ,因其與轉(zhuǎn)錄靶ＲＮＡ的目的基因是反義的。第32頁,共39頁，2024年2月25日，星期天

新的反義核酸藥物反義核酸的第二代新藥通過抑制apoB蛋白100來降低血脂，它是致動脈硬化脂蛋白的克星；波士頓麻薩諸塞州召開的2004年世界藥物開發(fā)技術(shù)的會議上，美國舊金山加利福尼亞大學(xué)的StephenYoung說：“因為這種藥物專門抑制apoB蛋白，從而達到降低血漿膽固醇的作用，這在人類歷史上還是第一次，所以原始資料另人非常滿意。第33頁,共39頁，2024年2月25日，星期天抑制SARS病毒復(fù)制的反義核酸藥物

工研院生物醫(yī)學(xué)工程中心與美國ISIS藥廠於1月14日同步在臺北及美國加州同步發(fā)表SARS反意核酸藥物其一為開發(fā)可有效抑制SARS冠狀病毒複製的第二代反意核酸藥物；其二為成功完成利用肺部輔助器械之吸入式噴霧劑型藥物。以開發(fā)RNA藥物為主的美國ISIS公司為全球第一個商業(yè)化量產(chǎn)反意核酸藥物的公司，共取得一千餘項反意核酸藥物相關(guān)專利，目前至少有11個反意核酸藥物正在臨床試驗階段，包括：氣喘、癌癥等。第34頁,共39頁，2024年2月25日，星期天RＮａｓｅＡRＮａｓｅＡ是第一個被應(yīng)用于動物腫瘤和臨床白血病治療的ＲＮａｓｅ,并取得一定的效果。但由于它在抗腫瘤方面存在一定的缺陷和不足,因此酶學(xué)家們轉(zhuǎn)向其它的ＲＮａｓｅ的研究。最初從曲霉菌中分離出的一種ＲＮａｓｅ,能夠抑制大鼠腫瘤生長,但是臨床試驗顯示其毒性較高,抗腫瘤作用較弱。后來,ＢＳＲＮａｓｅ顯示出強大的抗腫瘤功能,通過細胞毒