JJG 1064-2011氨基酸分析儀

中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程2011-01-21發(fā)布 2概述 3計(jì)量性能要求 4通用技術(shù)要求 4.2工作正常性 5計(jì)量器具控制 5.1檢定條件 5.2檢定項(xiàng)目 5.3檢定方法 5.4檢定結(jié)果的處理 5.5檢定周期 附錄A檢定證書(內(nèi)頁(yè))參考格式 附錄B檢定結(jié)果通知書(內(nèi)頁(yè))參考格式 附錄C檢定記錄參考格式 附錄D流動(dòng)相密度測(cè)量方法 1氨基酸分析儀檢定規(guī)程本規(guī)程適用于食品安全、醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢驗(yàn)和飼料監(jiān)察等分析用氨基酸分析儀(以下簡(jiǎn)稱儀器)的首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢驗(yàn)。氨基酸分析儀是采用陽(yáng)離子交換色譜法對(duì)氨基酸進(jìn)行分離，并進(jìn)行定性和定量分析的儀器。樣品中的蛋白質(zhì)經(jīng)鹽酸水解，其產(chǎn)物經(jīng)離子交換色譜柱分離，分離出的單個(gè)氨基酸組分與茚三酮試劑反應(yīng)，生成紫色化合物，用可見(jiàn)光檢測(cè)器測(cè)量其在570nm的吸光度(脯氨酸和羥脯氨酸在440nm測(cè)量),與標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度比較，即可計(jì)算出樣品中氨基酸的含量。氨基酸分析儀的基本原理圖見(jiàn)圖1。FDg自動(dòng)進(jìn)樣器流動(dòng)相檢測(cè)器衍生單元氨基酸分析儀的主要計(jì)量性能應(yīng)符合表1的要求。2序號(hào)1輸液系統(tǒng)流量設(shè)定值誤差不大于士2%流量穩(wěn)定性2色譜柱分離度(峰高分離度)甘氨酸-丙氨酸不小于90%亮氨酸-異亮氨酸不小于80%3檢測(cè)器1)基線噪聲不大于0.5mV2)基線漂移不大于1.5mV/60min不大于1nmol(S/N=2,組氨酸)4整機(jī)性能1)定性測(cè)量重復(fù)性RSD,不大于1.5%(天冬氨酸和精氨酸2)定量測(cè)量重復(fù)性線性相關(guān)系數(shù)γ不小于0.995儀器上應(yīng)有儀器名稱、型號(hào)、制造廠名、產(chǎn)品系列號(hào)、出廠日期等內(nèi)容的標(biāo)牌儀器應(yīng)無(wú)影響正常工作的損傷、劃痕，各部分連接可靠，緊固件無(wú)松動(dòng)4.2.1儀器管路應(yīng)使用不銹鋼、聚醚醚酮(PEEK)、聚四氟乙烯等管材，在規(guī)定的壓4.2.2儀器電源線、信號(hào)線等插接緊密，各開(kāi)關(guān)、按鍵、旋鈕、指示燈等功能正常，5.1.1.1室內(nèi)溫度為15℃~30℃,濕度為30%～80%RH。5.1.1.2儀器周圍無(wú)強(qiáng)烈的機(jī)械震動(dòng)和電磁干擾。3國(guó)家計(jì)量行政部門批準(zhǔn)的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。5.2檢定項(xiàng)目檢定項(xiàng)目見(jiàn)表2。表2檢定項(xiàng)目一覽表序號(hào)后續(xù)檢定1外觀及工作正常性檢查十十十2流量設(shè)定值誤差十3流量穩(wěn)定性十—4分離度十十十5十十6十十7檢測(cè)限十十十8定性測(cè)量重復(fù)性十十十9十十十線性十注：“+”表示應(yīng)檢定項(xiàng)目，“一”表示可不檢定項(xiàng)目.5.3檢定方法5.3.1外觀及工作正常性檢查按第4章的要求，目視、手動(dòng)逐項(xiàng)檢查。5.3.2泵流量設(shè)定值誤差Ss和流量穩(wěn)定性Sg的檢定氨基酸分析儀有2個(gè)泵，輸送緩沖溶液的泵簡(jiǎn)稱泵1,輸送茚三酮的泵簡(jiǎn)稱泵2.按儀器說(shuō)明書的要求設(shè)定常用的泵流量，啟動(dòng)泵1,只用緩沖溶液B1,待壓力穩(wěn)定后，從檢測(cè)器出口用事先清洗、干燥、稱重過(guò)的容量瓶收集流動(dòng)相，同時(shí)用秒表計(jì)時(shí)，收集20min～30min,在分析天平上稱重，按式(1)計(jì)算流量實(shí)測(cè)值Fm(mL/min)。每測(cè)完一次，改變泵流量，幾分鐘后再恢復(fù)到原設(shè)定值，待穩(wěn)定后按上述方法收集流動(dòng)相、稱重。重復(fù)測(cè)量3次，3次結(jié)果的平均值為流量實(shí)測(cè)值。按式(2)、式(3)計(jì)算泵1W?——容量瓶的質(zhì)量，g;p實(shí)驗(yàn)溫度下流動(dòng)相的密度，g/cm3(密度測(cè)量方法見(jiàn)附錄D);4Fmx——3次測(cè)量中流量最大值，mL/min;泵1流量測(cè)量結(jié)束后，啟動(dòng)泵2,按上述方法測(cè)量泵1和泵2的流量，由當(dāng)時(shí)測(cè)得的緩沖溶液B1與茚三酮混合液的密度及流動(dòng)相搜集時(shí)間，按式(1)計(jì)算泵1加泵2的流量，扣除泵1的流量，即得泵2的流量，重復(fù)測(cè)量3次，按式(2)、式(3)計(jì)算泵5.3.3分離度按儀器推薦的測(cè)量條件設(shè)置各項(xiàng)參數(shù)，啟動(dòng)儀器待穩(wěn)定后，由進(jìn)樣系統(tǒng)注入氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為5nmol/mL～20nmol/mL)做色譜分析，由色譜圖測(cè)量的數(shù)據(jù)按式(Leu)-異亮氨酸(Ile)的分離度R。H兩相鄰色譜峰交點(diǎn)到基線的距離，mm,5.3.4基線噪聲和漂移按儀器推薦的測(cè)量條件設(shè)置儀器參數(shù)，啟動(dòng)泵1(只用緩沖溶液B1)和泵2,待儀器穩(wěn)定后記錄基線60min,取一段時(shí)間基線峰-峰值表示基線噪聲，以mV(或μV)表示；60min內(nèi)基線偏離起始點(diǎn)的值為基線漂移，以mV(μV)/60min表示。5.3.5檢測(cè)限在5.3.3的測(cè)量條件下，測(cè)量濃度為5nmol/mL左右的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液3次，記錄色譜圖，由組氨酸(His)峰高平均值和基線噪聲值，按式(5)計(jì)算檢測(cè)限CLCm——組氨酸溶液濃度，nmol/mL;Hm——組氨酸色譜峰高的平均值，mV或mm;5.3.6定性、定量測(cè)量重復(fù)性在5.3.3的測(cè)量條件下，重復(fù)測(cè)量氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度同5.3.3)至少7次，由測(cè)量結(jié)果按式(6)計(jì)算天冬氨酸(Asp)和精氨酸(Arg)保留時(shí)間的重復(fù)性及甘氨酸(Gly)和組氨酸(His)峰面積的重復(fù)性，用RSD式中：X;——第i次測(cè)量的色譜峰保留時(shí)間(或峰面積);5X——色譜峰保留時(shí)間(或峰面積)的n次測(cè)量平均值。在儀器正常的工作條件下，測(cè)量4～5個(gè)濃度(至少在兩個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi))氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)量3次，計(jì)算甘氨酸和賴氨酸峰面積的算術(shù)平均值，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)峰面積平均值的線性相關(guān)系數(shù)γ不小于0.995。5.4檢定結(jié)果的處理5.5檢定周期氨基酸分析儀的檢定周期不超過(guò)1年，更換重要部件或?qū)x器性能有懷疑時(shí)，應(yīng)隨X——色譜峰保留時(shí)間(或峰面積)的n次測(cè)量平均值。在儀器正常的工作條件下，測(cè)量4～5個(gè)濃度(至少在兩個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi))氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)量3次，計(jì)算甘氨酸和賴氨酸峰面積的算術(shù)平均值，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)峰面積平均值的線性相關(guān)系數(shù)γ不小于0.995。5.4檢定結(jié)果的處理5.5檢定周期氨基酸分析儀的檢定周期不超過(guò)1年，更換重要部件或?qū)x器性能有懷疑時(shí)，應(yīng)隨7檢定結(jié)果通知書(內(nèi)頁(yè))參考格式B.3色譜柱分離度：Thr-Ser:Leu-Ile:檢出限：B.5整機(jī)性能B.6不合格項(xiàng)目：8附錄C檢定記錄參考格式氨基酸分析儀檢定記錄送檢單位檢定日期單位地址室內(nèi)溫度聯(lián)系電話相對(duì)濕度儀器型號(hào)檢定人員生產(chǎn)廠家核驗(yàn)人員設(shè)備編號(hào)證書編號(hào)泵編號(hào)1流動(dòng)相密度F?=F?+?=W?W?W?-W?FF?F氨基酸H?HH?-H/H?Thr-SerGly-AlaLeu-IleC.4基線噪聲C.6檢測(cè)限序號(hào)保留時(shí)間/minAspArgHis1234567平均值樣品濃度測(cè)量結(jié)果123平均線性相關(guān)系數(shù)流動(dòng)相密度測(cè)量方法D.1緩沖溶液B1的密度準(zhǔn)確稱量(準(zhǔn)確到0.1mg)一個(gè)清潔、干燥、體積校準(zhǔn)過(guò)的5mL容量瓶的質(zhì)量，記為m?,從緩沖溶液B1瓶中取出B1溶液注入容量瓶中恰好到刻度(注意不要將流動(dòng)相沾到容量瓶刻線以上),在天平上稱重，記為m?,按下式計(jì)算緩沖溶液B1的密度，重復(fù)3次，取平均值。mz——容量瓶十緩沖溶液的質(zhì)量，g;D.2緩沖溶液B1和茚三