輸血科常用實驗及工作體會

前言

血型判定、交叉配血、抗體篩選試驗是輸血科當前最慣用試驗，也是每個輸血工作者應該熟練掌握試驗，依據工作經驗我們認為在試驗過程中一些細節(jié)輕易被忽略，值得注意，現將工作中一些體會與大家一起探討交流，請大家提出寶貴意見。輸血科常用實驗及工作體會第1頁ABO血型判定1、判定原理：依據紅細胞上有沒有A抗原或(和)B抗原及血清中有無對應抗體將血型分為A型、B型、AB型和O型四種

正定型（細胞定型）

反定型（血清定型）2、方法：試管法、微柱凝膠法、玻片法均為凝集試驗輸血科常用實驗及工作體會第2頁ABO血型判定（試管法）1、試驗材料：正定試劑：抗-A、抗-B（是否質控？質控要求？統(tǒng)計？）抗-AB

確認弱A、B抗原，與弱A、B抗原親和力強,會產生較強反應?？?H

用于檢驗亞型及孟買型。抗-A1

用于A亞型檢測。輸血科常用實驗及工作體會第3頁ABO血型判定（試管法）反定試劑A1細胞（為何？）、B細胞，自制細胞質控

O細胞檢驗是否存在ABO系統(tǒng)以外抗體干擾ABO反定型。本身對照用于確認正反定型結果有效性,排除本身抗體對定型干擾(如冷凝集等)。A2細胞用于A亞型判定（有些A亞型產生抗-A1抗體而不產生抗A2）。輸血科常用實驗及工作體會第4頁ABO血型判定（試管法）2、試驗方法：正定：1滴2~5%被檢者紅細胞+1~2滴標準血清混勻，3400轉15秒（轉速選擇）反定：2滴受檢者血清+1滴標準紅細胞混勻離心輸血科常用實驗及工作體會第5頁ABO血型判定（試管法）3、結果判定：搖動力度，細胞扣邊緣情況，弱凝集判斷（亞型尤其主要）正定預期結果3+~4+，假如出現弱凝集應該考慮是抗原減弱還是亞型，不能輕易錯過。血型判定并統(tǒng)計正反不一致思索與處理？關鍵在于認識發(fā)覺問題輸血科常用實驗及工作體會第6頁ABO血型判定（試管法）4、正反不一致原因分析試驗人員技術操作錯誤紅細胞標本相關問題血清標本相關問題輸血科常用實驗及工作體會第7頁ABO血型判定（試管法）技術操作錯誤試劑濃度與配比，普通問題不大，不過百分比不適當可能漏檢亞型忘記加試劑，試劑工作中有可能出現結果判定，尤其對溶血結果認識，假如是血清標本可能碰到，56度破壞補體驗證統(tǒng)計錯誤，實際工作中對于錯誤匯報占很大百分比標本錯誤輸血科常用實驗及工作體會第8頁ABO血型判定（試管法）紅細胞問題：ABO亞型！使正定凝集較弱，也是發(fā)覺亞型關鍵所在白血病或其它惡性疾病使患者紅細胞A、B抗原減弱?。』颊呓谳斎肓薃BO不一樣型紅細胞，或ABO不一樣型骨髓移植，可能出現混合視野。紅細胞取得性或遺傳性異常，如取得性B抗原、T/Tn多凝集紅細胞。一些疾?。ㄈ绺骨话┰斐裳獫{中存在大量型物質，中和抗-A或抗-B抗體，引發(fā)正定型為假陰性或弱陽性?；颊哐逯懈咝r本身冷凝集素使紅細胞發(fā)生凝集！！輸血科常用實驗及工作體會第9頁ABO血型判定（試管法）血清標本相關問題新生兒抗體陰性或很弱、老年人抗體減弱！！白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制劑患者、先天丙種球蛋白缺乏患者、免疫缺點患者抗體減弱??！ABO不一樣型骨髓移植患者。使用血漿或凝固不完全血清會形成很小纖維蛋白凝集紅細胞凝塊！！患者血清中有不規(guī)則抗體或本身冷凝集素??！一些疾病（多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、何杰金淋巴瘤等）造成球蛋白水平增高，引發(fā)緡錢狀凝集；纖維蛋白原水平增高，會引發(fā)緡錢狀凝集；血漿增容劑（葡聚糖、PVP）也會引發(fā)緡錢狀凝集造成假陽性結果。輸血科常用實驗及工作體會第10頁ABO血型判定（試管法）5、正反不符處理程序：患者年紀患者病史患者近期輸血史患者近期用藥史患者是否進行了骨髓移植患者以前血型家系調查處理細胞、血清、改變試驗條件增加試驗（洗滌細胞、改變百分比、反應溫度、吸收放散、血型物質測定）輸血科常用實驗及工作體會第11頁ABO血型判定（試管法）常見問題處理ABO亞型正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H反定：A1c、A2c、Bc、Oc、本身對照吸收放散唾液型物質檢測有條件者可作家系調查輸血科常用實驗及工作體會第12頁ABO血型判定（試管法）A、B抗原減弱延長孵育時間、4℃孵育酶處理紅細胞吸收放散唾液型物質檢測既往血型調查輸血科常用實驗及工作體會第13頁ABO血型判定（試管法）抗體減弱延長孵育時間、4℃孵育加大血清用量（很實用)既往血型調查酶處理試劑紅細胞輸血科常用實驗及工作體會第14頁ABO血型判定（試管法）冷本身抗體將血清和紅細胞分別在37孵育后再混合用37℃溫鹽水洗滌紅細胞、45℃熱放散3分鐘巰基試劑(DTT)處理紅細胞本身吸收去除血清中本身冷抗體輸血科常用實驗及工作體會第15頁ABO血型判定（試管法）室溫反應同種抗體用譜細胞做抗體判定選擇沒有對應抗原A、B細胞做反定型輸血科常用實驗及工作體會第16頁ABO血型判定（微柱法）1、原理：是生物化學凝膠過濾技術和免疫學抗原抗體反應相結合產物，經過調整凝膠濃度來控制凝膠間隙大小。使其間隙只能允許游離RBC經過，從而使游離RBC與聚集RBC分離。假如經過離心RBC沉積在凝膠管底部，則表明RBC未發(fā)生凝聚凝集，是陰性反應，若RBC聚集在凝膠帶上部，則表明RBC發(fā)生凝集，呈陽性反應。其本質仍是凝集試驗（凝膠可能不一樣，長春為葡聚糖。）基本概念：特異性膠、中性膠、抗人球蛋白試劑膠輸血科常用實驗及工作體會第17頁ABO血型判定（微柱法）2、試驗材料：比較單一，都是商品化，定量加樣，注意細胞濃度0.8%3、操作：正定反定（加樣次序）4、結果判定：按說明，凝集強度判斷，注意混合視野判定，弱凝集判定5、注意事項：細胞濃度，試劑一定室溫平衡，最好室溫反應15分鐘再離心以增強弱反強度（衛(wèi)生部第1批質控出現問題，有2個標本反定正確率60%）輸血科常用實驗及工作體會第18頁ABO血型判定（微柱法）6、假陽性反應可見于：

（1）未完全除去纖維蛋白原不完全血清標本，殘余纖維蛋白原在凝膠中成為纖維蛋白，妨礙紅細胞沉淀而浮于膠中或膠表面。（我們收到衛(wèi)生部2、3批質控標本有此現象）（２）被檢標本染菌也使紅細胞浮于膠中或膠表面。

（3）被檢紅細胞破碎，常管底及近底部一側，而不是在管底尖部。此為離心時微柱管離心力方向和該微管軸向方向不一致，本應為陰性結果沉淀位置偏離而呈似弱陽性是因為紅細胞陳舊，此時即使應該是陰性結果，但破碎紅細胞膜沉于膠中或膠面呈弱陽性。

（4）試驗室溫度低時，因凝膠顆?；顒有越档?，單個細胞穿過時困難，輕易出現假陽性結果。

輸血科常用實驗及工作體會第19頁ABO血型判定（微柱法）（5）鐮刀形紅細胞貧血病人在做血型配血時易出現假陽性：

正常紅細胞有一定變形性，能夠經過小于其直徑凝膠間隙，而鐮形紅細胞貧血病人紅細胞變形能力降低，剛性增大，不能透過凝膠間隙，故出現假陽性。（6）嚴重感染病人易出現假陽性：

病人血清或血漿中白細胞過多，堵塞了凝膠間隙，從而影響了紅細胞沉降，造成假陽性。（曾碰到一例）

輸血科常用實驗及工作體會第20頁ABO血型判定（微柱法）7、假陰性反應：

（1）抗體過少、弱。

（2）抗原、抗體百分比不適當。

注意：不是一個試驗方法能夠檢測出全部抗原抗體反應。輸血科常用實驗及工作體會第21頁ABO血型判定總結注意弱反應（尤其是正定，普通應該很強）發(fā)覺正反不一致，不能輕易錯過，慎用假陽性解釋，可重復試驗有問題做好統(tǒng)計，處理方案，不?？偨Y不一樣試驗方法結合，試管與微柱各有優(yōu)缺點發(fā)覺問題是關鍵，因為每個醫(yī)院情況不一樣，大部分醫(yī)院試劑不全，不能準確判斷其亞型，不過應該具備發(fā)覺亞型能力.輸血科常用實驗及工作體會第22頁RH血型判定1、原理：依據是否含有D抗原區(qū)分Rh陰陽性2、試劑：IgM;IgG+IgM3、操作及結果解釋試劑選擇及陰性確認問題?。≡噭┻x擇：輸血科能夠選擇IgM試劑Rh陰性確認：輸血科與血站對陰性標本處理不一樣，輸血科對陰性標本無須再深入確認，以防弱D或部分D患者輸入Rh陽性血；血站必須對RH陰性標本確認，以防弱D過部分D血液輸給Rh陰性患者。輸血科常用實驗及工作體會第23頁交叉配血慣用方法鹽水：發(fā)覺IgM抗體凝聚胺、微柱凝膠、酶法：發(fā)覺IgG型不規(guī)則抗體輸血科常用實驗及工作體會第24頁交叉配血（凝聚胺）原理：（略）操作：（是否質控？統(tǒng)計？）試劑用量:假凝集消除液不能輕易多加，可能會造成假陰性反應時間：加凝聚胺試劑后不可馬上離心，應使其充分反應觀察時間：一分鐘之內觀察結果影響原因：抗凝劑影響（反定凝集較差可能受到抗凝劑影響，能夠多加凝聚胺試劑凝集很好）、細胞濃度不可太濃輸血科常用實驗及工作體會第25頁交叉配血（微柱凝膠）原理：屬于經典抗人球蛋白試驗操作：50微升0.8%紅細胞+25微升血清或血漿（依據廠家說明）結果判斷：不能錯過弱凝集，假如有懷疑能夠重復試驗，注意：標本最好抗凝、離心以消除纖維蛋白帶來干擾輸血科常用實驗及工作體會第26頁交叉配血（微柱凝膠）凝聚胺與微柱凝膠法兩種方法差異：微柱法相對敏感，但不是萬能，有些抗體可能凝聚胺更敏感（如Rh抗體），實際工作極難發(fā)覺此現象，可能與工作人員熟練程度相關，不論任何一個方法配血不合均不能發(fā)血。輸血科常用實驗及工作體會第27頁抗體篩選（微柱法）操作及結果判斷（略）抗體篩選陽性結果處理：最好作抗體判定，有些稀有抗體配血成功率極低能夠尋求幫助，普通醫(yī)院可能無此條件用微柱法和凝聚胺兩種方法同時配血或者用微柱凝膠法配血，絕對不能夠單純用凝聚胺配血（方法差異可能漏檢）輸血科常用實驗及工作體會第28頁問題討論：1、微柱法抗體篩選弱陽性，遇配血不合標本是否也應為弱陽性？（劑量效應以及紅細胞新鮮度影響）2、微柱法抗體篩選陽性，選擇3袋微柱法配血均相合是否說明抗體篩選為假陽性？3、微柱法抗體篩選陽性，是否可用凝聚胺法直接配血選擇相合血液？輸血科常用實驗及工作體會第29頁發(fā)覺B(A)血型1例試管法正定AB，A抗原弱于B抗原，不過結果顯著微柱法正反定型，正反定型相符為B型，抗A抗體很強與正?？笰無差異，懷疑初檢血型錯誤試管法正反定型復檢：正定AB，反定B型，懷疑特殊血型或標本問題保險起見重抽標本，結果相同懷疑A亞型B，產生抗A（以上試驗我科完成）省血液中心送檢，匯報A2B輸血科常用實驗及工作體會第30頁發(fā)覺B(A)血型1例我科隨即進行以下試驗：父母血型判定：父親：O母親：與女兒血型表現一致，初步判為cisAB依據資料普通cisAB為A強B弱，產生抗B，而此例A弱B強產生抗A，與B(A)血型表現一致，高度懷疑B(A)無法確認，送上海血液中心進行血清血及分子生物學確認輸血科常用實驗及工作體會第31頁上海血液中心判定結果ABO正定抗-A抗B抗A1人源抗A人源抗B2+4+W-1+4+W說明確實存在A、B抗原ABO反定：A1細胞B細胞O細胞A2細胞（6滴）

3+S--1+W說明確實存在抗-A，且與A1、A2細胞同時凝集抗-H：O細胞B細胞患者細胞

2+S1+W2+說明抗H增強輸血科常用實驗及工作體會第32頁上海血液中心判定結果結論：患者存在AB抗原，且A弱B強；血清中存在抗A，同時和A1、A2細胞凝集；抗-H增強，符合B(A)特點判定為：B（A）血型為了深入證實進行基因測序結論為640堿基變異，A被G取代為B（A）*04型輸血科常用實驗及工作體會第33頁B(A)血型血清學特點B(A)血型血清學特點：同時存在AB抗原，A弱B強普通判定為A亞型B，不過存