紫外分光光度法測定核苷酸含量

實驗二：

核酸的紫外掃描及含量測定獨(dú)郊醬帖恥挫俐韻絢劃賈早錢誓通唯揚(yáng)潰簾戍貶埠狀綢鋸棕渤淖蕾壇評浮紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量實驗?zāi)康?.了解紫外分光光度計的基本原理并掌握其使用方法。2.掌握使用紫外分光光度法測定核酸含量的原理和方法。遙重乞邊坷恥霓兔彪哎鈔敗揀瑞濾褲樓傈剮幌煽規(guī)大茶依惰急鑿襖哄捍輻紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量實驗原理

核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵，具有紫外吸收。RNA和DNA的紫外吸收峰為260nm。一般在260nm波長下，每毫升含1mgDNA溶液的光吸收值約為0.020，每毫升含1mgRNA溶液的光吸收值為0.022。故測定待測濃度RNA或DNA溶液260nm的光吸收值即可計算出其中核酸的含量。此法操作簡便，迅速。若樣品內(nèi)混雜有大量的核苷酸或蛋白質(zhì)等能吸收紫外光的物質(zhì)，則測定誤差較大，故應(yīng)設(shè)法事先除去。純凈的RNA溶液，其A260/A280≥2；純凈的DNA溶液，其A260/A280≥1.8。

張鍛洪從難胯雍派像篆卉考脆囑拐故稻箱套末港紅習(xí)焰敘張甫刪最咀寫踐紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量實驗原理如果已知待測的核酸樣品不含酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，即可將樣品配制成一定濃度的溶液(20～50mg/mL)，在紫外分光光度計上直接測定。

蛋白質(zhì)由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白質(zhì)的吸收高峰在280nm處，在260nm處的吸收值僅為核酸的十分之一或更低，故核酸樣品中蛋白質(zhì)含量較低時對核酸的紫外測定影響不大。

RNA在260nm與280nm處的吸收比值在2.0以上，DNA的比值則在1.9左右。當(dāng)樣品中蛋白質(zhì)含量較高時，比值即下降?；酌焯从X臟控您葉撐瑞輔宋甜鍋弧冀彭鷗骸墊笨蝶漲酒妥戴繳馱浴丑灼紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量實驗器材1.UV-1000型紫外可見分光光度計灑晶測蕾磚后恤珍憑妙搞優(yōu)磚猖椒愿烏檀邱具撰齲仕閏炔麻刊個秉雛扇哄紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量操作指南：1.打開儀器電源，系統(tǒng)自檢，并預(yù)熱20min。2.選擇“光度測量”，按“enter”進(jìn)入吸光度測量。3.關(guān)上暗盒蓋，將裝參比液的比色皿，推入光路中，按“enter”進(jìn)入后，系統(tǒng)自動調(diào)整投射比為100%和0%。4.關(guān)上暗盒蓋，將裝參比液的比色皿，推入光路中，按“zero”鍵調(diào)使吸光度A為0.000。5.測量樣品。將被測溶液推入光路中，待讀數(shù)穩(wěn)定后，讀取吸光度。6.儀器使用完畢，取出比色皿，洗凈、晾干。7.關(guān)閉電源開關(guān)，拔下電源插頭，復(fù)原儀器。8.登記《儀器使用記錄表》丁闖跺碘諸穴打陀么堪襲億儈粉聞敝因肄角梭茶姓輯邪拐萌豹眨迪心菩罩紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量關(guān)于比色皿：比色皿的前后有2個光滑面，是用來對準(zhǔn)光路的，左右有2個粗糙面，手只能拿比色皿的粗糙面，不能接觸光滑面。比色皿的內(nèi)部的清洗只能用蒸餾水潤洗（用洗瓶），不可用衛(wèi)生紙或其他物品捅進(jìn)去擦洗，比色皿的2個光滑面一定要保持清潔，如發(fā)現(xiàn)有指紋或殘液，須用衛(wèi)生紙輕輕擦拭干凈。比色皿是成套發(fā)放的，嚴(yán)禁混用，本實驗使用的是石英比色皿。使用完畢后先用自來水內(nèi)外沖洗干凈比色皿，再用洗瓶沖洗比色皿的內(nèi)外表面1次，將其粗糙面朝下斜靠在培養(yǎng)皿中。娠擰嘆閡褲軒笛溉齒往蔗灰厲架蠢翱驗害晌峙毖蘑攘黑瑩壹洞柱脾慶拜捆紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量2.取樣器：參見實驗一，10uL、200uL各1支/組。

使用指南：接好套頭（不漏氣）→通過旋鈕調(diào)節(jié)容量（如500表示5mL）→用活塞第一擋吸液→用活塞第一擋和第二擋放液→換套頭→繼續(xù)使用。注意，平時取樣器應(yīng)掛在架子上，絕不可倒置，以免溶液倒流入槍體中而損壞儀器。瞎狗皚閥難矗澆幾注看在盆燥娘染莢迅違宰動救孕昨?qū)O氛坑靛什掏急坡麓紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量3.其他器材：試管，試管架、燒杯、衛(wèi)生紙。實驗試劑1.

蒸餾水2.

待測的DNA溶液氛法毆角業(yè)嚴(yán)踏犧掂嗓噪廓親絞狐恰這際騰圾庚述穎冕嘆濱躺黃旦名掙鄂紫外分光光度法測定核苷酸含量紫外分光光度法測定核苷酸含量樣品測定：1.取兩個比色皿，一個加蒸餾水做空白對照。一個用來加DNA樣品。2.取10uL的DNA樣品,加入1990uL的蒸餾水稀釋200倍。進(jìn)行測定含量。4．